李春成，謝月英，周旭麗，劉偉

（湘潭市婦幼保健院病理科，湖南 湘潭 411101）

ER、PR、C-erbB-2、nm 23在67例乳腺癌中的表達及與臨床病理的關(guān)系

李春成，謝月英，周旭麗，劉偉

（湘潭市婦幼保健院病理科，湖南 湘潭 411101）

目的 探討雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progesterone receptor,PR)、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達情況及其與臨床病理的關(guān)系。方法 采用免疫組化染色法檢測ER、PR、C-erbB-2、nm 23在67例乳腺癌中的表達情況，然后進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果 67例乳腺癌中，ER、PR、C-erbB-2、nm 23陽性率分別為61.2%（41/67），43.3%（33/67），61.2%（41/67），58.2%（39/67），各免疫指標陽性率表達均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；它們的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（P＜0.01），與患者年齡、臨床分期無關(guān)（P＞0.05），C-erbB-2在乳腺癌中的表達與腫塊大小明顯相關(guān)（P＜0.05），ER、PR、nm 23在乳腺癌中的表達與腫塊大小無關(guān)（P＞0.05）；ER、PR與C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達具有明顯相關(guān)性（P＜0.001）。結(jié)論 聯(lián)合檢測ER、PR、C-erbB-2與nm 23指標對乳腺癌的治療和預后判斷具有重大臨床指導意義。

乳腺癌；ER；PR；C-erbB-2；nm 23

乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率明顯上升，全球每年有120～140萬新增乳腺癌病例，每年有50萬左右的患者死于該病，嚴重威脅著女性生殖健康[1-2]。乳腺癌的發(fā)生是多階段多因素影響發(fā)展而來的，起始于普通導管上皮增生，逐漸進展為導管原位癌、浸潤癌，最后發(fā)展為轉(zhuǎn)移。鑒于乳腺癌臨床發(fā)展的不穩(wěn)定性，確定乳腺癌的腫瘤標記物對臨床治療、臨床分期、診斷以及復發(fā)和轉(zhuǎn)移、預后的監(jiān)測是非常重要的[3]。ER、PR、C-erbB-2、nm 23等標記物已經(jīng)應用于臨床實踐中。復習相關(guān)文獻[4-5]，發(fā)現(xiàn)它們在乳腺癌中的表達有所差異。雖然，以上生物分子標記物已分別在相關(guān)研究有所報道，但本研究通過聯(lián)合檢測以上標記物，分析其在乳腺癌的表達意義。因此，本研究通過收集湘潭市婦幼保健院病理科67例乳腺癌病例，采用免疫組化法聯(lián)合檢測ER、PR、C-erbB-2、nm 23腫瘤標記物在乳腺癌中的表達情況，統(tǒng)計學分析它們與臨床病理特征的關(guān)系，目的在于探討ER、PR、C-erbB-2和nm 23在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及靶向治療與預后的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2015年9月～2017年3月在湘潭市婦幼保健院乳腺外科手術(shù)切除的乳腺癌病理資料67例，所有病例均為女性，年齡22～65歲，中位年齡42歲；所有病例均為I～Ⅲ期可手術(shù)切除的患者，均經(jīng)病理診斷確診，且在術(shù)前均未接受過放、化療及內(nèi)分泌治療。

1.2 檢測方法

1.2.1 試劑 ER、PR、C-erbB-2、nm 23受體相應的單克隆抗體購置北中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB顯色液、免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司,乙醇PBS緩沖液,二甲苯等其他試劑購于麗欣生物有限公司。

1.2.2 S-P免疫染色法 石蠟標本連續(xù)4 μm切片，貼附于載玻片后烤片。常規(guī)脫蠟，高溫修復抗原。按照免疫組化試劑盒操作步驟逐步進行。以PBS代替一抗作為陰性對照，癌灶旁正常乳腺組織作為陽性內(nèi)對照。

1.2.3 結(jié)果判讀 ER、PR陽性表達于胞核，呈棕黃色；nm 23表達于胞質(zhì)。判斷標準采用陽性細胞比例評定結(jié)果，陽性細胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%～25%為弱陽性（+），26%～50%為陽性（++），＞50%為強陽性（+++）。陽性細胞數(shù)≥10%為陽性病例。C-erbB-2陽性判定根據(jù)腫瘤細胞膜著色強度和比例來確定，腫瘤細胞無著色為0分；任何比例的腫瘤細胞顯示弱的不完整的細胞膜著色或＜10%的腫瘤細胞顯示弱的完整的細胞膜著色為1分；≥10%的腫瘤細胞顯示弱的或中度完整細胞膜著色，或＜30%的腫瘤細胞顯示一致的強的完整的細胞膜著色為2分；≥30%的腫瘤細胞顯示一致的強的完整的細胞膜著色為3分。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行結(jié)果分析，計數(shù)資料采用c2檢驗,P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達情況 67例乳腺癌中，ER、PR、C-erbB-2、nm 23陽性表達情況明顯不同。ER總陽性率為61.2%（41/67），PR總陽性率為43.3%（33/67），C-erbB-2總陽性率為 61.2%（41/67），nm 23總陽性率為58.2%（39/67）。各免疫指標陽性率表達均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），見圖1，表1。

圖1 癌組HEA、ERB、PRC、C-erbB-2D、nm 23E在乳腺癌中的陽性表達SPX20Figure 1 Positive expression of cancer group HEA,ERB,PRC,C-erbB-2D,nm 23E in breast cancer SP X20

表1 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達情況Table 1 Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer

2.2 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系 在67例乳腺癌中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（P＜0.01），與患者年齡、臨床分期無關(guān)（P＞0.05），C-erbB-2在乳腺癌中的表達與腫塊大小明顯相關(guān)，ER、PR、nm 23在乳腺癌中的表達與腫塊大小無關(guān)（P＞0.05）。在淋巴結(jié)陽性轉(zhuǎn)移病例中，ER、PR陽性表達率偏低，分別為22.6%（12/53）、24.5%（13/53），C-erbB-2明顯呈高表達，C-erbB-2和 nm 23 陽性表達率分別為 54.7（29/53）、17%（9/53）（P＜0.01），見表2。

表2 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer and its relation with clinical pathology

2.3 ER、PR與C-erbB-2、nm 23相關(guān)性分析 ER、PR與C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達具有明顯相關(guān)性（P＜0.001），見表3。

表3 ER、PR與C-erbB-2、nm 23相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of between ER,PR and C-erbB-2,nm 23

3 討論

乳腺癌是一組復雜和異質(zhì)性的腫瘤，生物學行為相差大，其發(fā)生、發(fā)展與預后受多種因素影響[5]。Sotiriou和Pusztai指出基因表達模型研究結(jié)果改變了乳腺癌的觀點,為乳腺癌提供了一種分子診斷新工具。譬如，ER、PR、C-erbB-2、nm 23等已經(jīng)作為監(jiān)測乳腺癌高風險和選擇有效治療的一種有效腫瘤標記物[6]。在這研究背景下，在乳腺癌靶向治療和預后監(jiān)測中，建立一種穩(wěn)定、有效的腫瘤標記物是非常有臨床價值意義。

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，其生長、發(fā)育和細胞增殖均受ER、PR激素受體的影響[7]。ER和PR陽性表達率目前被臨床作為激素治療的真標準，廣泛應用于乳腺癌的分子診斷、后續(xù)外科治療、化療和放療中[8]。PR表達被認為是ER功能和乳腺癌預后的一個生物標記，同時PR也是調(diào)節(jié)ER功能的相關(guān)蛋白[9]。單獨ER陽性對內(nèi)分泌治療反應占55%，ER、PR同時陽性對內(nèi)分泌治療反應占75%～80%。當乳腺組織細胞發(fā)生癌變時，ER、PR可能丟失也可能保留，若ER、PR丟失，腫瘤生長增殖不受內(nèi)分泌調(diào)控，其內(nèi)分泌治療的有效率也不足10%[10]。已有研究結(jié)果提示浸潤性乳腺癌階段PR的陽性率約在50%～70%，基本上與ER接近[11]，郭少峰等報道ER、PR陽性表達率分別為58.1%、49.5%[12]。本組研究數(shù)據(jù)顯示，ER、PR陽性表達率分別為61.2%，43.3%，兩者表達率比較接近。此外，本研究在分析ER與PR相關(guān)性中，統(tǒng)計結(jié)果顯示ER表達與PR表達呈正相關(guān)，以上事實都證實了ER、PR的表達具有協(xié)同性特點，而不是獨立的乳腺癌療效和預后因素，這也解釋了在乳腺癌內(nèi)分泌治療中，臨床為何要同時參考ER和PR在腫瘤的表達情況?？傊?，ER與PR可以作為乳腺癌診斷和治療的一種腫瘤標記物，其陽性表達率越高，內(nèi)分泌治療效果可能越好。

C-erbB-2是EGFR家族成員之一，又稱neu基因，位于染色體17q21。在15%～35%浸潤性乳腺癌中，發(fā)現(xiàn)C-erbB-2的高表達，它的異常表達明顯增加乳腺癌轉(zhuǎn)移的風險，降低乳腺癌患者的生存率[13]。被認為是預后不良的一個腫瘤標記物，它的過表達與腫瘤細胞的侵襲性、抗激素治療、細胞毒性療法以及總體低生存率明顯相關(guān)[14]。nm 23是由美國國立癌癥研究所steeg等分離出的一種被認為與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因。其蛋白表達水平與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移能力有關(guān)，高表達者具有低轉(zhuǎn)移性[15]。絕大多數(shù)學者認為，nm 23的表達率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤的復發(fā)呈負相關(guān)[16]。本研究中，分析C-erbB-2與nm 23兩者相關(guān)性，結(jié)果顯示兩者關(guān)系明顯呈負相關(guān)。同時，在淋巴結(jié)陽性轉(zhuǎn)移中，C-erbB-2表達明顯升高，nm 23的表達明顯降低。此外，C-erbB-2的高表達還與乳腺癌腫塊的增大呈正相關(guān)，以上結(jié)果均顯示C-erbB-2有促進腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能，以及nm 23抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移的生物活性。因此，C-erbB-2和nm 23可以作為乳腺癌轉(zhuǎn)移和預后監(jiān)測的一種有效腫瘤標記物。

有學者認為激素受體的表達情況決定了患者對內(nèi)分泌治療的反應性，是治療方案選擇的一個決定因素[17]。但也有研究報道，ER表達陽性的乳腺癌中，仍有40%的患者對內(nèi)分泌治療無效[18]。多數(shù)學者認為這可能與其它腫瘤基因表達相關(guān),比如，C-erbB-2癌基因的過表達，nm 23抑癌基因的表達降低,從而導致腫瘤細胞的運動能力增強，促進腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[19-20]。本研究結(jié)果顯示，C-erbB-2、nm 23與ER、PR表達具有一致性。在淋巴結(jié)陽性轉(zhuǎn)移病例中，ER、PR陽性表達率偏低，分別為 22.6%（12/53）、24.5%（13/53），C-erbB-2明顯呈高表達，C-erbB-2和nm 23陽性表達率分別為54.7（29/53）、17%（9/53）。以上數(shù)據(jù)也說明了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及治療受多種因素影響。因此，聯(lián)合檢測ER、PR、C-erbB-2與nm 23指標對指導乳腺癌的治療以及轉(zhuǎn)移和預后的監(jiān)測具有重大臨床意義。但本研究有待更深入探討以上標記物與其它預后指標進行比較分析，以及從蛋白、基因表達水平上探討其在乳腺癌和癌前病變中表達差異，更全面揭示乳腺癌的治療和預后相關(guān)因素，從而使乳腺癌患者受益最大化。

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Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in 67 breast cancer and its relation with clinical pathology

Li Chun-cheng,Xie Yue-ying,Zhou Xu-li,Liu Wei
(Department of Pathology of Maternal and Child Health Hospital of XiangTan,XiangTan,Hunan,411101,China)

Objective To investigate expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer and its relation with clinical pathology.Methods Using immunohistochenmical assay,the expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer were detected.The correlation between expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 and clinicopathological characteristics were retro-spectively analyzed.Results In the 67 breast cancer,the positive rates of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 were 61.2%(41/67),43.3%(33/67),61.2%(41/67),58.2%(39/67),which positive rates were striking statistical significance(P＜0.01).Their expression were correlated with lymph nodes metastasis(P＜0.01)and had nothing to do with age and clinical stage of patient(P＞0.05),Lump size was obviously correlated with expression of C-erbB-2(P＜0.05)and incorrelated with expression of ER,PR,nm 23 in breastcancer(P＞0.05).Expression between ER,PR and C-erbB-2,nm 23 were significantly correlated(P＜0.001).Conclusion Combined detection of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 was importantly clinical guidance significance with treatment and prognosis of breast cancer.

Breast cancer;ER;PR;C-erbB-2;nm 23

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.33.002

李春成，E-mail:493423161@qq.com