李春成，謝月英，周旭麗，劉偉

（湘潭市婦幼保健院病理科，湖南 湘潭 411101）

ER、PR、C-erbB-2、nm 23在67例乳腺癌中的表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系

李春成，謝月英，周旭麗，劉偉

（湘潭市婦幼保健院病理科，湖南 湘潭 411101）

目的 探討雌激素受體（estrogen receptor,ER）、孕激素受體（progesterone receptor,PR)、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)情況及其與臨床病理的關(guān)系。方法 采用免疫組化染色法檢測(cè)ER、PR、C-erbB-2、nm 23在67例乳腺癌中的表達(dá)情況，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 67例乳腺癌中，ER、PR、C-erbB-2、nm 23陽(yáng)性率分別為61.2%（41/67），43.3%（33/67），61.2%（41/67），58.2%（39/67），各免疫指標(biāo)陽(yáng)性率表達(dá)均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；它們的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（P＜0.01），與患者年齡、臨床分期無(wú)關(guān)（P＞0.05），C-erbB-2在乳腺癌中的表達(dá)與腫塊大小明顯相關(guān)（P＜0.05），ER、PR、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)與腫塊大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）；ER、PR與C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)具有明顯相關(guān)性（P＜0.001）。結(jié)論 聯(lián)合檢測(cè)ER、PR、C-erbB-2與nm 23指標(biāo)對(duì)乳腺癌的治療和預(yù)后判斷具有重大臨床指導(dǎo)意義。

乳腺癌；ER；PR；C-erbB-2；nm 23

乳腺癌是女性中最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，發(fā)病率明顯上升，全球每年有120～140萬(wàn)新增乳腺癌病例，每年有50萬(wàn)左右的患者死于該病，嚴(yán)重威脅著女性生殖健康[1-2]。乳腺癌的發(fā)生是多階段多因素影響發(fā)展而來(lái)的，起始于普通導(dǎo)管上皮增生，逐漸進(jìn)展為導(dǎo)管原位癌、浸潤(rùn)癌，最后發(fā)展為轉(zhuǎn)移。鑒于乳腺癌臨床發(fā)展的不穩(wěn)定性，確定乳腺癌的腫瘤標(biāo)記物對(duì)臨床治療、臨床分期、診斷以及復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移、預(yù)后的監(jiān)測(cè)是非常重要的[3]。ER、PR、C-erbB-2、nm 23等標(biāo)記物已經(jīng)應(yīng)用于臨床實(shí)踐中。復(fù)習(xí)相關(guān)文獻(xiàn)[4-5]，發(fā)現(xiàn)它們?cè)谌橄侔┲械谋磉_(dá)有所差異。雖然，以上生物分子標(biāo)記物已分別在相關(guān)研究有所報(bào)道，但本研究通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)以上標(biāo)記物，分析其在乳腺癌的表達(dá)意義。因此，本研究通過(guò)收集湘潭市婦幼保健院病理科67例乳腺癌病例，采用免疫組化法聯(lián)合檢測(cè)ER、PR、C-erbB-2、nm 23腫瘤標(biāo)記物在乳腺癌中的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析它們與臨床病理特征的關(guān)系，目的在于探討ER、PR、C-erbB-2和nm 23在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展及靶向治療與預(yù)后的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2015年9月～2017年3月在湘潭市婦幼保健院乳腺外科手術(shù)切除的乳腺癌病理資料67例，所有病例均為女性，年齡22～65歲，中位年齡42歲；所有病例均為I～Ⅲ期可手術(shù)切除的患者，均經(jīng)病理診斷確診，且在術(shù)前均未接受過(guò)放、化療及內(nèi)分泌治療。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 試劑 ER、PR、C-erbB-2、nm 23受體相應(yīng)的單克隆抗體購(gòu)置北中杉金橋生物技術(shù)有限公司，DAB顯色液、免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司,乙醇PBS緩沖液,二甲苯等其他試劑購(gòu)于麗欣生物有限公司。

1.2.2 S-P免疫染色法 石蠟標(biāo)本連續(xù)4 μm切片，貼附于載玻片后烤片。常規(guī)脫蠟，高溫修復(fù)抗原。按照免疫組化試劑盒操作步驟逐步進(jìn)行。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，癌灶旁正常乳腺組織作為陽(yáng)性?xún)?nèi)對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判讀 ER、PR陽(yáng)性表達(dá)于胞核，呈棕黃色；nm 23表達(dá)于胞質(zhì)。判斷標(biāo)準(zhǔn)采用陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)定結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性（-），10%～25%為弱陽(yáng)性（+），26%～50%為陽(yáng)性（++），＞50%為強(qiáng)陽(yáng)性（+++）。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽(yáng)性病例。C-erbB-2陽(yáng)性判定根據(jù)腫瘤細(xì)胞膜著色強(qiáng)度和比例來(lái)確定，腫瘤細(xì)胞無(wú)著色為0分；任何比例的腫瘤細(xì)胞顯示弱的不完整的細(xì)胞膜著色或＜10%的腫瘤細(xì)胞顯示弱的完整的細(xì)胞膜著色為1分；≥10%的腫瘤細(xì)胞顯示弱的或中度完整細(xì)胞膜著色，或＜30%的腫瘤細(xì)胞顯示一致的強(qiáng)的完整的細(xì)胞膜著色為2分；≥30%的腫瘤細(xì)胞顯示一致的強(qiáng)的完整的細(xì)胞膜著色為3分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行結(jié)果分析，計(jì)數(shù)資料采用c2檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)情況 67例乳腺癌中，ER、PR、C-erbB-2、nm 23陽(yáng)性表達(dá)情況明顯不同。ER總陽(yáng)性率為61.2%（41/67），PR總陽(yáng)性率為43.3%（33/67），C-erbB-2總陽(yáng)性率為 61.2%（41/67），nm 23總陽(yáng)性率為58.2%（39/67）。各免疫指標(biāo)陽(yáng)性率表達(dá)均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖1，表1。

圖1 癌組HEA、ERB、PRC、C-erbB-2D、nm 23E在乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)SPX20Figure 1 Positive expression of cancer group HEA,ERB,PRC,C-erbB-2D,nm 23E in breast cancer SP X20

表1 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)情況Table 1 Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer

2.2 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 在67例乳腺癌中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)（P＜0.01），與患者年齡、臨床分期無(wú)關(guān)（P＞0.05），C-erbB-2在乳腺癌中的表達(dá)與腫塊大小明顯相關(guān)，ER、PR、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)與腫塊大小無(wú)關(guān)（P＞0.05）。在淋巴結(jié)陽(yáng)性轉(zhuǎn)移病例中，ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率偏低，分別為22.6%（12/53）、24.5%（13/53），C-erbB-2明顯呈高表達(dá)，C-erbB-2和 nm 23 陽(yáng)性表達(dá)率分別為 54.7（29/53）、17%（9/53）（P＜0.01），見(jiàn)表2。

表2 ER、PR、C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer and its relation with clinical pathology

2.3 ER、PR與C-erbB-2、nm 23相關(guān)性分析 ER、PR與C-erbB-2、nm 23在乳腺癌中的表達(dá)具有明顯相關(guān)性（P＜0.001），見(jiàn)表3。

表3 ER、PR與C-erbB-2、nm 23相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis of between ER,PR and C-erbB-2,nm 23

3 討論

乳腺癌是一組復(fù)雜和異質(zhì)性的腫瘤，生物學(xué)行為相差大，其發(fā)生、發(fā)展與預(yù)后受多種因素影響[5]。Sotiriou和Pusztai指出基因表達(dá)模型研究結(jié)果改變了乳腺癌的觀點(diǎn),為乳腺癌提供了一種分子診斷新工具。譬如，ER、PR、C-erbB-2、nm 23等已經(jīng)作為監(jiān)測(cè)乳腺癌高風(fēng)險(xiǎn)和選擇有效治療的一種有效腫瘤標(biāo)記物[6]。在這研究背景下，在乳腺癌靶向治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)中，建立一種穩(wěn)定、有效的腫瘤標(biāo)記物是非常有臨床價(jià)值意義。

乳腺癌是一種激素依賴(lài)性腫瘤，其生長(zhǎng)、發(fā)育和細(xì)胞增殖均受ER、PR激素受體的影響[7]。ER和PR陽(yáng)性表達(dá)率目前被臨床作為激素治療的真標(biāo)準(zhǔn)，廣泛應(yīng)用于乳腺癌的分子診斷、后續(xù)外科治療、化療和放療中[8]。PR表達(dá)被認(rèn)為是ER功能和乳腺癌預(yù)后的一個(gè)生物標(biāo)記，同時(shí)PR也是調(diào)節(jié)ER功能的相關(guān)蛋白[9]。單獨(dú)ER陽(yáng)性對(duì)內(nèi)分泌治療反應(yīng)占55%，ER、PR同時(shí)陽(yáng)性對(duì)內(nèi)分泌治療反應(yīng)占75%～80%。當(dāng)乳腺組織細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，ER、PR可能丟失也可能保留，若ER、PR丟失，腫瘤生長(zhǎng)增殖不受內(nèi)分泌調(diào)控，其內(nèi)分泌治療的有效率也不足10%[10]。已有研究結(jié)果提示浸潤(rùn)性乳腺癌階段PR的陽(yáng)性率約在50%～70%，基本上與ER接近[11]，郭少峰等報(bào)道ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.1%、49.5%[12]。本組研究數(shù)據(jù)顯示，ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.2%，43.3%，兩者表達(dá)率比較接近。此外，本研究在分析ER與PR相關(guān)性中，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示ER表達(dá)與PR表達(dá)呈正相關(guān)，以上事實(shí)都證實(shí)了ER、PR的表達(dá)具有協(xié)同性特點(diǎn)，而不是獨(dú)立的乳腺癌療效和預(yù)后因素，這也解釋了在乳腺癌內(nèi)分泌治療中，臨床為何要同時(shí)參考ER和PR在腫瘤的表達(dá)情況。總之，ER與PR可以作為乳腺癌診斷和治療的一種腫瘤標(biāo)記物，其陽(yáng)性表達(dá)率越高，內(nèi)分泌治療效果可能越好。

C-erbB-2是EGFR家族成員之一，又稱(chēng)neu基因，位于染色體17q21。在15%～35%浸潤(rùn)性乳腺癌中，發(fā)現(xiàn)C-erbB-2的高表達(dá)，它的異常表達(dá)明顯增加乳腺癌轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，降低乳腺癌患者的生存率[13]。被認(rèn)為是預(yù)后不良的一個(gè)腫瘤標(biāo)記物，它的過(guò)表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲性、抗激素治療、細(xì)胞毒性療法以及總體低生存率明顯相關(guān)[14]。nm 23是由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所steeg等分離出的一種被認(rèn)為與腫瘤轉(zhuǎn)移抑制相關(guān)的基因。其蛋白表達(dá)水平與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力有關(guān)，高表達(dá)者具有低轉(zhuǎn)移性[15]。絕大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，nm 23的表達(dá)率與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤的復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)[16]。本研究中，分析C-erbB-2與nm 23兩者相關(guān)性，結(jié)果顯示兩者關(guān)系明顯呈負(fù)相關(guān)。同時(shí)，在淋巴結(jié)陽(yáng)性轉(zhuǎn)移中，C-erbB-2表達(dá)明顯升高，nm 23的表達(dá)明顯降低。此外，C-erbB-2的高表達(dá)還與乳腺癌腫塊的增大呈正相關(guān)，以上結(jié)果均顯示C-erbB-2有促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能，以及nm 23抑制乳腺癌的轉(zhuǎn)移的生物活性。因此，C-erbB-2和nm 23可以作為乳腺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后監(jiān)測(cè)的一種有效腫瘤標(biāo)記物。

有學(xué)者認(rèn)為激素受體的表達(dá)情況決定了患者對(duì)內(nèi)分泌治療的反應(yīng)性，是治療方案選擇的一個(gè)決定因素[17]。但也有研究報(bào)道，ER表達(dá)陽(yáng)性的乳腺癌中，仍有40%的患者對(duì)內(nèi)分泌治療無(wú)效[18]。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為這可能與其它腫瘤基因表達(dá)相關(guān),比如，C-erbB-2癌基因的過(guò)表達(dá)，nm 23抑癌基因的表達(dá)降低,從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)，促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移[19-20]。本研究結(jié)果顯示，C-erbB-2、nm 23與ER、PR表達(dá)具有一致性。在淋巴結(jié)陽(yáng)性轉(zhuǎn)移病例中，ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率偏低，分別為 22.6%（12/53）、24.5%（13/53），C-erbB-2明顯呈高表達(dá)，C-erbB-2和nm 23陽(yáng)性表達(dá)率分別為54.7（29/53）、17%（9/53）。以上數(shù)據(jù)也說(shuō)明了乳腺癌的發(fā)生發(fā)展及治療受多種因素影響。因此，聯(lián)合檢測(cè)ER、PR、C-erbB-2與nm 23指標(biāo)對(duì)指導(dǎo)乳腺癌的治療以及轉(zhuǎn)移和預(yù)后的監(jiān)測(cè)具有重大臨床意義。但本研究有待更深入探討以上標(biāo)記物與其它預(yù)后指標(biāo)進(jìn)行比較分析，以及從蛋白、基因表達(dá)水平上探討其在乳腺癌和癌前病變中表達(dá)差異，更全面揭示乳腺癌的治療和預(yù)后相關(guān)因素，從而使乳腺癌患者受益最大化。

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Expression of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in 67 breast cancer and its relation with clinical pathology

Li Chun-cheng,Xie Yue-ying,Zhou Xu-li,Liu Wei
(Department of Pathology of Maternal and Child Health Hospital of XiangTan,XiangTan,Hunan,411101,China)

Objective To investigate expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer and its relation with clinical pathology.Methods Using immunohistochenmical assay,the expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 in breast cancer were detected.The correlation between expression information of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 and clinicopathological characteristics were retro-spectively analyzed.Results In the 67 breast cancer,the positive rates of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 were 61.2%(41/67),43.3%(33/67),61.2%(41/67),58.2%(39/67),which positive rates were striking statistical significance(P＜0.01).Their expression were correlated with lymph nodes metastasis(P＜0.01)and had nothing to do with age and clinical stage of patient(P＞0.05),Lump size was obviously correlated with expression of C-erbB-2(P＜0.05)and incorrelated with expression of ER,PR,nm 23 in breastcancer(P＞0.05).Expression between ER,PR and C-erbB-2,nm 23 were significantly correlated(P＜0.001).Conclusion Combined detection of ER,PR,C-erbB-2,nm 23 was importantly clinical guidance significance with treatment and prognosis of breast cancer.

Breast cancer;ER;PR;C-erbB-2;nm 23

10.3969/j.issn.1009-4393.2017.33.002

李春成，E-mail:493423161@qq.com