張美榮，李學榮

（1.青島大學，山東 青島 266034；2.青島大學附屬醫(yī)院兒科血液病區(qū)，山東 青島 266034）

EB病毒感染異型淋巴細胞及T淋巴細胞亞群的研究

張美榮1，李學榮2

（1.青島大學，山東 青島 266034；2.青島大學附屬醫(yī)院兒科血液病區(qū)，山東 青島 266034）

目的 通過對EB病毒感染者的外周血白細胞形態(tài)和數(shù)量變化進行觀察，探討EB病毒感染患者的異型淋巴細胞的分布及其與T淋巴細胞亞群變化的關系。方法 選取2016年1月～2017年1月青島大學附屬醫(yī)院收治的EB病毒感染陽性兒童患者48例，對其開展外周血白細胞計數(shù)，分類計數(shù)和異型淋巴細胞觀察。如患者的異型淋巴細胞增高，則對其開展T細胞亞群測定，并與同時期在該院進行健康體檢者50例的檢查結果進行比較。結果 EB病毒感染者和健康體檢者的外周血白細胞計數(shù)數(shù)量，淋巴細胞、中性粒細胞分類，以及異型淋巴細胞計數(shù)差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Ⅱ型為EB病毒感染患者的主要異型淋巴細胞；EB病毒感染患者的CD3+和CD8+T細胞數(shù)量高于對照組，CD4+T細胞數(shù)量和CD4+/CD8+比值低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論 相較正常人群，EB病毒感染者的異型淋巴細胞出現(xiàn)增高，且免疫功能出現(xiàn)紊亂，外周血異型淋巴細胞增高同機體免疫系統(tǒng)反應程度存在關聯(lián)。

人類皰疹病毒4型；淋巴細胞；T淋巴細胞亞群

EB病毒（epstein-barr virus,EBv），又稱人類皰疹病毒4型[Human herpesvirus 4（HHV-4）][1]。當該類病毒入侵機體后，可改變機體內(nèi)外周血淋巴細胞的形狀以及數(shù)量，當人體受到EB病毒感染后，機體中的外周血中，將會有異型淋巴細胞出現(xiàn)，以EB病毒感染導致的傳染性單核細胞增多癥為典型代表,且患者往往會出現(xiàn)多種免疫細胞特別是淋巴細胞亞群及多種免疫因子水平異常[2-3]。本次研究就選取2015年1月～2016年1月青島大學附屬醫(yī)院收治的EB病毒感染陽性患者48例，通過對EB病毒感染者的外周血白細胞形態(tài)和數(shù)量變化進行觀察，探討EB病毒感染患者的異型淋巴細胞的分布及其與T淋巴細胞亞群變化的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本次研究選取2016年1月～2017年1月青島大學附屬醫(yī)院收治的EB病毒感染陽性兒童患者48例，其中男28例，女20例，年齡5～13歲，平均（7.3±2.9）歲。取同時期在本院進行健康體檢的體檢者50例作為對照組，其中男30例，女20例，年齡4～14歲，平均（8.8±3.2）歲。兩組在性別，年齡等臨床資料上比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法 本次研究所采用的試驗試劑和儀器包括血液分析儀（購自德國敦昊生物儀器有限公司，型號GSD5500，所采用試劑為儀器配套試劑，質(zhì)控物為儀器配套質(zhì)控物）；郝的慕斯染色液（美國Kword公司）；流式細胞儀（美國Best vovos公司生產(chǎn)，型號GD3，試劑為儀器配套試劑。）首先采集EB病毒感染者以及健康體檢者的靜脈血液3 mL，采用EDTAK2抗凝管進行血液收集，當收集完成后，將抗凝管進行搖晃。采用血液分析儀，對采集血液中的白細胞進行測定，與此同時，開展血液涂片工作，采用郝的慕斯染色液對涂片進行染色后，使用油鏡進行分類，每份所觀察的白細胞數(shù)量為200個，并將觀察結果進行記錄，根據(jù)《臨床檢驗基礎》中的相關判定原則，對患者血液中的異型淋巴細胞的形態(tài)開展分型，如患者的異型淋巴細胞的形態(tài)為空泡型，或者是漿細胞型，則為Ⅰ型異型淋巴細胞；如患者的異型淋巴細胞的形態(tài)為單核細胞型，或者為不規(guī)則型，則為Ⅱ型異型淋巴細胞；如患者的異型淋巴細胞的形態(tài)為幼稚型，則為Ⅲ型異型淋巴細胞。同時對EB感染患者，以及健康體檢者的血液中的白細胞計數(shù)，以及分類計數(shù)結果進行比較，包括淋巴細胞（L%），中性粒細胞（N%），單核細胞（M%），嗜堿性粒細胞（B%），嗜酸性粒細胞（E%），以及異型淋巴細胞（異淋%）。同時對EB病毒感染患者和健康體檢者開展外周血T細胞亞群檢測，檢測所應用的方法為單克隆抗體免疫熒光標記法，首先取EDTA-K2抗凝管中收集的血液，采用流式細胞儀，對血液中的CD3+，CD4+，CD8+水平，以及CD4+/CD8+比值進行計算。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行分析。計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料以率（%）表示，采用c2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 EB病毒感染者異型淋巴分型情況 通過觀察可知，EB病毒感染者異型淋巴分型分布為：Ⅰ型3例（6.25%），Ⅱ型43例（89.58%），Ⅲ型2例（4.17%）。

2.2 EB病毒感染患者同健康體檢者的外周血白細胞計數(shù)與分類計數(shù)結果比較 EB病毒感染者和健康體檢者的外周血白細胞計數(shù)數(shù)量，淋巴細胞、中性粒細胞分類，以及異型淋巴細胞計數(shù)差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表1。

2.3 EB病毒感染患者同健康體檢者的T細胞亞群比較 EB病毒感染患者的CD3+T細胞數(shù)量高于對照組，CD4+T細胞數(shù)量低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

3 討論

目前醫(yī)學界普遍認為，導致異型淋巴細胞出現(xiàn)的原因為，機體受到病毒或者是某些病原體的感染，導致機體內(nèi)的巨噬細胞系統(tǒng)出現(xiàn)異常，發(fā)生異常增生[4]。當機體受到EB病毒或者是某些病原體侵襲后，機體內(nèi)的B淋巴細胞受體會與進入機體的病毒或病原體進行結合，在進行不斷增值，以及在進行復制的過程中，機體內(nèi)的T淋巴細胞會對其進行識別，從而使得機體內(nèi)的抑制性T細胞的增殖得以激發(fā)，同時自身也會產(chǎn)生轉(zhuǎn)化，導致細胞毒性效應的發(fā)生，由于受到刺激，而出現(xiàn)異常增殖的T細胞，以及數(shù)量不多的B細胞，一同在機體外周血中出現(xiàn)，于是就形成了異型淋巴細胞[5-6]。 因此很多種類的病毒所導致的感染，都是濕的機體內(nèi)外周血異型淋巴細胞的數(shù)量增加，比如EB病毒感染，柯薩奇B組病毒感染，弓形體病，自身免疫性疾病，藥物過敏等。在臨床上，將這種現(xiàn)象也被叫做淋巴細胞類白血病反應[7]。

表1 EB病毒感染患者同健康體檢者的外周血白細胞計數(shù)與分類計數(shù)結果比較（x±s）

表2 EB病毒感染患者同健康體檢者的T細胞亞群比較（x±s）

本次研究結果顯示，EB病毒感染者和健康體檢者的外周血白細胞計數(shù)數(shù)量，淋巴細胞、中性粒細胞分類，以及異型淋巴細胞計數(shù)差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；提示EB病毒可對機體淋巴系統(tǒng)造成強烈的刺激。從白細胞計數(shù)總數(shù)，已經(jīng)分類計數(shù)的角度來進行分析可以發(fā)現(xiàn)，EB病毒感染患者的WBC雖仍然處于正常范圍內(nèi)，但仍舊低于健康體檢者；分析其原由，可能與患者的粒細胞受到EB病毒破壞有關，這也是導致白細胞分類計數(shù)中，淋巴細胞比例升高，中性粒細胞相較健康體檢者更低的原因之一[8]。本次研究結果顯示，EB病毒感染者異型淋巴分型分布以Ⅱ型為主，EB病毒感染患者的CD3+T細胞數(shù)量高于對照組，CD4+T細胞數(shù)量低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示外周血異型淋巴細胞增高，同機體免疫功能反應存在一定關聯(lián)。這也和前人的研究結果相符[9]。此外，有學者認為，EB病毒感染導致B淋巴細胞功能亢進過度活化產(chǎn)生大量的自身抗體和免疫因子可以導致自身免疫病的發(fā)生和發(fā)展[10]。

綜上所述，相較正常人群，EB病毒感染者的異型淋巴細胞出現(xiàn)增高，且免疫功能出現(xiàn)紊亂，外周血異型淋巴細胞增高同機體免疫系統(tǒng)反應程度存在直接關系。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2017.33.033

李學榮，E-mail：lxr0060@163.com