周先麗，王鵬程，李遠(yuǎn)遠(yuǎn)，程柳，羅琴，梁成欽，付明磊，*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院廣西高校生藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541004；2.中國(guó)有色桂林礦產(chǎn)地質(zhì)研究院有限公司，廣西桂林541004）

GC-MS法測(cè)定羅漢果中擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留量

周先麗1，王鵬程1，李遠(yuǎn)遠(yuǎn)1，程柳2，羅琴1，梁成欽1，付明磊1，*

（1.桂林醫(yī)學(xué)院廣西高校生藥學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西桂林541004；2.中國(guó)有色桂林礦產(chǎn)地質(zhì)研究院有限公司，廣西桂林541004）

建立氣質(zhì)聯(lián)用（Gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）測(cè)定羅漢果中6種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留量方法。樣品用石油醚-丙酮混合溶劑超聲提后過(guò)固相萃取小柱凈化，經(jīng)HP-5MS色譜柱分離，以氣相色譜質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果表明：6種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為 0.999 1～0.999 9，檢出限為 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg。樣品中 3 個(gè)加標(biāo)水平的回收率為 83.5%～106.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.9%～6.5%。本試驗(yàn)所建立的方法操作簡(jiǎn)便，具有良好的回收率，精密度和靈敏度，符合檢測(cè)要求，可用于羅漢果中6種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留的測(cè)定。

羅漢果；擬除蟲(chóng)菊酯；氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）

羅漢果[Siraitia Grosvenorii（Swing le）C.Jeffrey]屬葫蘆科羅漢果屬的植物，具有清肺止咳，抗菌消炎等功效，是廣西桂北地區(qū)特色藥材[1]。羅漢果除了藥用外，大部分用來(lái)生產(chǎn)甜苷，用于食品甜味劑，比如羅漢果糖，因?yàn)槠浜刑鹞端?，甜度高，深受糖尿病、肥胖者的喜歡[2-3]。由于羅漢果栽培時(shí)間較長(zhǎng)，加上桂北地區(qū)氣候溫暖、濕潤(rùn)，非常容易產(chǎn)生各種病蟲(chóng)害，因此為了保證產(chǎn)量，不可避免要使用農(nóng)藥[1，4]。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥是廣譜殺蟲(chóng)劑，由于具有高效、低毒的特點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中廣泛用于害蟲(chóng)防治[5-7]。隨著人們生活水平的不斷提高，食品的安全問(wèn)題日益被人們所重視，對(duì)農(nóng)藥殘留限量的要求也將更嚴(yán)格。擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留對(duì)人的健康危害極大，即使是低劑量的長(zhǎng)期接觸也會(huì)引起慢性疾病，甚至還存在致癌風(fēng)險(xiǎn)[8-9]，所以摸索和建立靈敏度更高，抗干擾能力更強(qiáng)，定量更準(zhǔn)確擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的檢測(cè)方法是非常必要的。目前檢測(cè)擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留常用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC） 與氣相色譜法（Gas chromatography，GC），較少使用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）[10]。與GC 和HPLC相比，GC-MS靈敏度更高，抗干擾能力更強(qiáng)，定量更準(zhǔn)確[11-12]。在此前工作中我們已利用HPLC-MS法和GC-MS法測(cè)定了羅漢果中氨基甲酸酯和有機(jī)氯農(nóng)藥的殘留量[13-14]，而在本文中我們利用GC-MS法對(duì)羅漢果中6種擬除蟲(chóng)菊酯的農(nóng)藥殘留進(jìn)行了檢測(cè)，以便為羅漢果的安全使用提供更系統(tǒng)的質(zhì)量控制依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

羅漢果樣品分別采于廣西永福百壽、永福堡里、臨桂中庸、臨桂茶垌、龍勝飄里。

1.2 儀器與試劑

GCMS-QP2010氣質(zhì)聯(lián)用儀：日本島津公司，配有自動(dòng)進(jìn)樣器（AOC-20i）；RE-5298A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；DFY-400高速中藥粉碎機(jī)：溫嶺市林大科技有限公司；B2200S-7臺(tái)式超聲清洗機(jī)：必能信超聲有限公司。6種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品甲氰菊酯、氯菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯、氟胺氰菊酯、溴氰菊酯：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

1.3 方法

1.3.1 氣相色譜-質(zhì)譜分析條件

氣相色譜條件：HP-5MS石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度為 250℃，He載氣（≥99.999%），載氣流量3 mL/min；分流進(jìn)樣，分流比1∶1；柱升溫程序：初始溫度90℃，保持1 min，以30℃/min升至230℃，保持1 min，以2℃/min升至280℃；柱流速率為1.46 mL/min；進(jìn)樣量2.0 μL。

質(zhì)譜條件：接口溫度為280℃，EI離子源，電子能量70 eV，離子源溫度230℃，溶劑延遲時(shí)間12 min，傳輸線溫度280℃；選擇性離子檢測(cè)模式測(cè)定；定量方法為外標(biāo)法；數(shù)據(jù)采集方式為全掃描模式，質(zhì)量掃描范圍70 amu～400 amu，選擇離子強(qiáng)度大、不受干擾的離子為定量離子，各化合物定量離子及定性離子見(jiàn)表1。

表1 羅漢果中擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留的保留時(shí)間和特征離子Table 1 The Retention Time and Characteristic Ions of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii

1.3.2 樣品提取

將羅漢果樣品用自來(lái)水沖洗，再用二次蒸餾水沖洗，置于烘箱中烘干（60℃）后，粉碎，過(guò)5號(hào)篩。精密稱(chēng)取2.0 g，置100 mL具塞錐形瓶中，加石油醚（60℃～90℃）-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液 30 mL，超聲處理15 min，過(guò)濾，藥渣再重復(fù)上述操作2次后，合并濾液。于45℃減壓濃縮至干，殘?jiān)蒙倭空和榉磸?fù)操作3次，至干，殘?jiān)偌舆m量正己烷溶解，待凈化。

1.3.3 樣品凈化

將混合小柱（由下至上依次為無(wú)水硫酸鈉2.0 g、弗羅里硅土4.0 g、氧化鋁1.0 g和無(wú)水硫酸鈉2.0 g）作為凈化柱，用石油醚-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液20 mL淋洗柱體后，將待凈化液轉(zhuǎn)移至凈化柱中，用石油醚-丙酮（4∶1，體積比）混合溶液50 mL洗脫，收集洗脫液，于40℃～45℃減壓濃縮至干，以正己烷定容至10 mL溶解，待測(cè)。

2 結(jié)果與討論

2.1 GC-MS分析條件選擇

試驗(yàn)對(duì)氣相色譜柱、柱流速率、進(jìn)樣口溫度以及質(zhì)譜接口溫度等因素進(jìn)行比較，確定了最佳條件（1.3.1）。結(jié)果表明分離良好，各農(nóng)藥的出峰順序如圖1、圖 2。

2.2 線性范圍與檢測(cè)限

分別精密量取混合對(duì)照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL于10 mL量瓶中，用正己烷稀釋至刻度并搖勻，作為混合對(duì)照品溶液，每個(gè)濃度平行3份，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到線性方程，見(jiàn)表2。

由此可見(jiàn)6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥在0.1 μg/mL～1.0 μg/mL之間線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）為0.999 1～0.999 9。檢出限按信噪比3∶1計(jì)算，6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥檢出限為 0.139 μg/kg～5.262 μg/kg?？梢?jiàn)，6 種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥均有較好的線性關(guān)系及較高的靈敏度。

圖1 6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥混合對(duì)照品色譜圖Fig.1 6 pyrethroid pesticide standard samples chromatogram

圖2 樣品加標(biāo)色譜圖Fig.2 Chromatogram of sample after adding standard

表2 6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥回歸方程及檢出限（n=3）Table 2 Standard curves and detection limits of 6 pyrethroid pesticide

2.3 精密度與穩(wěn)定性

精密量取混合對(duì)照品母液 0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 mL共6個(gè)體積，至10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度并搖勻，作為對(duì)照品溶液，臨用現(xiàn)配。精確量取上述對(duì)照品溶液各1 mL，每個(gè)濃度平行3份，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；準(zhǔn)確吸取質(zhì)量濃度為500 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液依“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，連續(xù)進(jìn)樣6次，檢測(cè)儀器的精密度。在 0、2、4、6、8、10、12 h 時(shí)間段對(duì)濃度為 50 μg/mL 的混合對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)穩(wěn)定性。精密度試驗(yàn)結(jié)果測(cè)得各種農(nóng)藥的RSD為1.82%～3.55%，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥在12個(gè)小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，能滿足含量測(cè)定的要求。

2.4 加樣回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱(chēng)取同一樣品9份，分3水平加入濃度分別為 0.05、0.125、0.25μg/g 混合對(duì)照品溶液，按“1.3.2”項(xiàng)制備樣品，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜方法測(cè)定分析，計(jì)算回收率。加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。

6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥的加樣平均回收率為83.5%～106.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～6.5%。本測(cè)定方法的準(zhǔn)確度和精密度能滿足測(cè)定的需要。

2.5 樣品分析

按“1.3”項(xiàng)處理羅漢果，每個(gè)產(chǎn)地樣品取2份，按“1.3.1”項(xiàng)下色譜方法每份測(cè)3次，測(cè)得5個(gè)產(chǎn)地羅漢果中除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量見(jiàn)表4。

表3 樣品中3個(gè)加標(biāo)水平下6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥加樣回收率（n=6）Table 3 Recoveries of six pyrethroid pesticides determined at three spiked levels（n=6）

表4 5個(gè)產(chǎn)地羅漢果樣品中擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留量檢測(cè)結(jié)果Table 4 Test results of pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii from five places mg/kg

結(jié)果表明永福百壽、永福堡里、龍勝飄里、臨桂茶垌四個(gè)地區(qū)的羅漢果分別含氯氰菊酯為0.860、0.085、0.461、0.905 mg/kg。臨桂中庸羅漢果含氯菊酯0.109 mg/kg，其它均未檢出。

3 結(jié)論

與文獻(xiàn)[15]相比，該方法對(duì)6種擬除蟲(chóng)菊酯農(nóng)藥殘留的檢測(cè)的靈敏度更高，能滿足羅漢果中擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求。為了測(cè)定桂林不同產(chǎn)地羅漢果的擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留分布情況，我們利用所建立的羅漢果中6種擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留GCMS分析方法，考察了永福百壽、永福堡里、龍勝飄里、臨桂茶垌和臨桂中庸5個(gè)產(chǎn)區(qū)的羅漢果擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥的殘留情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)這5個(gè)產(chǎn)地的羅漢果都含有擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)農(nóng)藥殘留，但主要為氯氰菊酯。該研究結(jié)果，對(duì)提高羅漢果品質(zhì)，促進(jìn)羅漢果的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有一定價(jià)值。

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Determination of 6 Kinds of Pyrethroid Pesticides in Siraitia Grosvenorii by GC-MS

ZHOU Xian-li1，WANG Peng-cheng1，LI Yuan-yuan1，CHENG Liu2，LUO Qin1，LIANG Cheng-qin1，F(xiàn)U Ming-lei1，*
（1.Guangxi Key Laboratory of Pharmacognosy in University，Guilin Medical University，Guilin 541004，Guangxi，China；2.China Nonferrous Metals（Guilin）Geology and Mining Co.，Ltd.，Guilin 541004，Guangxi，China）

The method for determination of six pyrethroid pesticides in Siraitia Grosvenorii by gas chromatography-mass spectrometry was established.The samples were extracted with organic solvent by ultrasound，and pyrethroid pesticides were cleaned-up by solid-phase extraction column，determined by GC-MS with HP-5MS chromatographic column.The contents were calculated by the external standard method.The results showed that the linear range was from 0.1 μg/mL to 1.0 μg/mL with correlation coefficients（r=0.999 1-0.999 9）.The limits of detection were 0.139 μg/kg-5.262 μg/kg，and the average recoveries ranged from 83.5%to 106.1%，with the relative standard deviations from 0.9%to 6.5%.The proposed method is effective，quick，sensitive and reproducible，and can be applied to determine pyrethroid pesticide residues in Siraitia Grosvenorii.

Siraitia Grosvenorii；pyrethroid；gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS）

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.029

廣西科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科能1598025-18、桂科能14123006-21）

周先麗（1979—），女（漢），副教授，博士，主要從事天然藥物研究。

*通信作者：付明磊（1965—），男（漢），主管藥師，學(xué)士，主要從事天然藥物活性成分發(fā)現(xiàn)與開(kāi)發(fā)。

2017-07-26