張保，張萌，李立天，鄭朋朋，敖新宇

（西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院，云南昆明650224）

拐棗枝多酚提取工藝優(yōu)化及其抗氧化活性研究

張保，張萌，李立天，鄭朋朋，敖新宇*

（西南林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)院，云南昆明650224）

采用響應(yīng)面法優(yōu)化拐棗枝多酚提取工藝，并研究其抗氧化活性，為拐棗枝多酚的應(yīng)用提供理論依據(jù)。以拐棗枝為試驗(yàn)材料，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上選取浸提溶劑、料液比、浸提溫度、浸提時(shí)間4個(gè)影響因素進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)；同時(shí)通過(guò)測(cè)定拐棗枝多酚對(duì)羥自由基、ABTS自由基、DPPH自由基的清除率來(lái)評(píng)估其抗氧化性。結(jié)果表明：拐棗枝多酚的最佳提取工藝為以無(wú)水乙醇為浸提劑，在料液比為1∶84（g/mL），浸提溫度為60℃的條件下，浸提2.56 h，拐棗枝多酚的提取率為7.089%；拐棗枝多酚對(duì)羥自由基、ABTS自由基、DPPH自由基的最大清除率分別為90.97%、93.99%、97.19%。

拐棗枝；多酚；響應(yīng)面法；抗氧化活性

植物多酚（plant polyphenol）又稱為植物單寧（vegetable tannin），是一類具有酚羥基結(jié)構(gòu)且廣泛存在于植物體內(nèi)的天然植物化學(xué)成分[1-3]。近年來(lái)，不斷有國(guó)內(nèi)外的研究員從茶葉、水果、中草藥等植物體中提取到多酚類物質(zhì)[4]。研究表明植物多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、抗骨質(zhì)疏松等多種生物學(xué)活性[5-8]。

拐棗（Hovenia acerba Lindl）學(xué)名枳椇，屬于鼠李科枳椇屬（Rhamnaceae hovenia），其富含蛋白質(zhì)、維生素、生物堿和有機(jī)酸等活性物質(zhì)[9-11]。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，拐棗汁和醋能夠顯著降低谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase；ALT）和谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（Glutamyl transferase，gamma-GT），對(duì)飲酒造成肝損傷的小鼠有較好的緩解效果[12]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)拐棗果梗和拐棗子的研究報(bào)道較多，而對(duì)拐棗枝的研究報(bào)道極少。鄭朋朋等[13]發(fā)現(xiàn)拐棗枝乙醇浸提物的抗氧化能力比拐棗子強(qiáng)，微弱于拐棗果梗，但未做進(jìn)一步的研究。因此，本研究采用拐棗枝為試驗(yàn)材料，以多酚提取率為指標(biāo)，采用響應(yīng)面分析法優(yōu)化拐棗枝多酚提取工藝，并通過(guò)清除ABTS自由基、DPPH自由基和羥自由基試驗(yàn)評(píng)價(jià)拐棗枝多酚的抗氧化性作用，為拐棗枝多酚的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

拐棗枝：采購(gòu)于云南省昆明市西南林業(yè)大學(xué)東三環(huán)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的帶枝拐棗，新鮮的拐棗除去拐棗果梗后放入烘箱中60℃烘至恒重，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩，收集樣品放置于干燥器中備用。

1.1.2 試劑

水楊酸、硫酸亞鐵、抗環(huán)血酸、過(guò)硫酸鉀、碳酸鈉（均為分析純）、福林酚（BR）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；丙酮、正丁醇、甲醇、乙醇、30%雙氧水（均為分析純）：汕滇藥業(yè)有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）、2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（2，2'-azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate，ABTS）：美國(guó) Sigma公司；茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品（茶多酚含量>98%，CAS號(hào)：84650-60-2）：上海時(shí)代生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

BS224S電子天平：德國(guó)SARTORIUS公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、HWS-12水浴鍋：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；M20粉碎機(jī)：德國(guó)KIKAWERKE公司；AS20500B超聲波清洗儀：臺(tái)灣信達(dá)電子儀器有限公司；DHG-9240A型5430R離心機(jī)：德國(guó)Eppendorf公司；TU-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；B490真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：瑞士BUCHI公司；FD5-8冷凍干燥器：美國(guó)GoldSim公司。

1.3 方法

1.3.1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精確稱取40 mg的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)品，置于50 mL的小燒杯中，加入適量的蒸餾水溶解并潤(rùn)洗，將溶液轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中用蒸餾水定容，配制成400 μg/mL茶多酚標(biāo)準(zhǔn)液。分別吸取 0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL的標(biāo)準(zhǔn)液置于試管中，分別配制成0、50、100、200、300、400 μg/mL的茶多酚標(biāo)準(zhǔn)待測(cè)液，補(bǔ)加蒸餾水至體積為1.0 mL，分別加入1.0 mL福林酚，搖勻后靜置5 min，再加入質(zhì)量濃度為10%的碳酸鈉溶液2 mL，搖勻后置于黑暗處?kù)o置反應(yīng)1 h，反應(yīng)結(jié)束后補(bǔ)加5 mL蒸餾水。于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，繪制茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.2 拐棗枝多酚的提取

稱取0.500 0 g拐棗枝干粉，置于100 mL的小燒杯中，按照預(yù)設(shè)的浸提溶劑，在不同的料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間的條件下進(jìn)行水浴浸提。浸提完成后轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，在6000r/min的條件下離心10min，取上清液并轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中定容待測(cè)。

1.3.3 拐棗枝多酚含量的測(cè)定

準(zhǔn)確量取1.0 mL多酚樣品待測(cè)液，置于試管中，依次加入1.0 mL福林酚、2 mL質(zhì)量濃度為10%的碳酸鈉溶液，搖勻后置于黑暗處?kù)o置反應(yīng)1 h，暗反應(yīng)結(jié)束后補(bǔ)加5 mL蒸餾水，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值，對(duì)照茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算多酚含量。多酚提取率計(jì)算公式如下：

式中：W為多酚提取率，%；C為計(jì)算后所得樣品多酚質(zhì)量濃度，μg/mL；V為樣品多酚體積，mL；m為拐棗枝樣品質(zhì)量，g。

1.3.4 單因素試驗(yàn)

1.3.4.1 浸提溶劑對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

在料液比為 1∶30（g/mL）、浸提溫度為 55℃、浸提時(shí)間為60 min的條件下分別加入不同的浸提溶劑（水、甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮），每組3個(gè)平行試驗(yàn)，按照1.3.2和1.3.3方法提取拐棗枝多酚并測(cè)定拐棗枝多酚提取率。

1.3.4.2 料液比、浸提溫度、浸提時(shí)間對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

以乙醇為浸提溶劑，分別設(shè)置料液比1∶10、1∶20、1 ∶30、1 ∶40、1 ∶50、1 ∶60、1 ∶70、1 ∶80、1 ∶90（g/mL）、浸提溫度 40、45、50、55、60、65、70 ℃和浸提時(shí)間 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h 3個(gè)單因素試驗(yàn)。初始試驗(yàn)條件為料液比 1∶40（g/mL）、浸提時(shí)間 60 min、浸提溫度 60 ℃，每組3個(gè)平行試驗(yàn)，利用1.3.2和1.3.3方法提取拐棗枝多酚并測(cè)定拐棗枝多酚提取率。

1.3.5 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，采用Box-Behnken試驗(yàn)，優(yōu)化拐棗枝多酚提取條件。選取液料比（A）、浸提溫度（B）、浸提時(shí)間（C）3個(gè)自變量（影響因素），以拐棗枝多酚提取率（Y）為響應(yīng)值，并以-1、0、+1分別代表自變量3個(gè)水平見(jiàn)表1。

1.3.6 拐棗枝多酚制備

稱取50 g拐棗枝干粉，按響應(yīng)面分析法優(yōu)化的最佳提取工藝條件進(jìn)行浸提，浸提結(jié)束后在6 000 r/min的條件下離心10 min，移取上清液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至200 mL，將樣品濃縮液與蒸餾水1∶1（體積比）比例混合，樣品混合液經(jīng)真空冷凍干燥（-40℃，48 h）得到拐棗枝多酚樣品，-20℃保存待用。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)Table 1 Independent factors and their levels of response surface experiments

1.3.7 拐棗枝多酚抗氧化性研究

1.3.7.1 清除羥自由基能力測(cè)定[14-15]

用蒸餾水溶解1.3.6中獲得的多酚樣品，配制成不同質(zhì)量濃度梯度[0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0（mg/mL）]。準(zhǔn)確量取1.0 mL不同質(zhì)量濃度的多酚樣品溶液（不同質(zhì)量濃度的VC作為陽(yáng)性對(duì)照），依次加入9 mmol/L FeSO4溶液 1.0 mL，9 mmol/L H2O2溶液 1.0 mL，9 mmol/L 水楊酸—乙醇溶液1.0 mL，在37℃下水浴30 min后，取出試管并在波長(zhǎng)510 nm處測(cè)定吸光度值，羥自由基清除效率計(jì)算式如下：

式中：C1為·OH清除率，%；A1為不同樣品溶液吸光度值；A2為蒸餾水替代水楊酸的樣品本底吸光度值；A3為蒸餾水替代樣品的對(duì)照溶液吸光度值。

1.3.7.2 清除DPPH自由基能力測(cè)定[15-16]

用蒸餾水溶解1.3.6中獲得的多酚樣品，配制成不同質(zhì)量濃度梯度[0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0（mg/mL）]，準(zhǔn)確量取1.0 mL不同質(zhì)量濃度的多酚樣品溶液（不同質(zhì)量濃度的VC作為陽(yáng)性對(duì)照），分別加入2.0 mL DPPH溶液（精確稱取0.004 0 g DPPH溶液，甲醇溶解定容至100 mL，避光放置于4℃冰箱待用），混勻，暗反應(yīng)40 min。暗反應(yīng)結(jié)束后在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)定吸光度值，DPPH自由基清除率計(jì)算公式如下：

式中：C2為DPPH自由基清除率，%；A1為樣品吸光度值；A2為本底吸光度值；A3對(duì)照溶液吸光度值。

1.3.7.3 清除ABTS自由基能力測(cè)定[15，17]

用蒸餾水溶解1.3.6中獲得的拐棗枝多酚樣品，配制成不同質(zhì)量濃度梯度[0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0（mg/mL）]，準(zhǔn)確量取 1.0 mL 不同質(zhì)量濃度的多酚樣品溶液（不同質(zhì)量濃度的VC作為陽(yáng)性對(duì)照），再加入2.0 mL的ABTS自由基工作液（ABTS和過(guò)硫酸鉀用蒸餾水分別溶解，使ABTS濃度為14 mmol/L，過(guò)硫酸鉀的濃度為4.90 mmol/L，將ABTS和過(guò)硫酸鉀1∶1（體積比）混合，將混合溶液在室溫下避光反應(yīng)16 h。然后用甲醇適當(dāng)稀釋ABTS自由基溶液，使其吸光度值在波長(zhǎng)734 nm處為（0.700±0.002）范圍內(nèi)，即得到ABTS自由基工作液），混勻后于室溫下反應(yīng)10 min，在734 nm處測(cè)定其吸光度值。ABTS自由基清除率計(jì)算公式如下：

式中：C3為ABTS自由基清除率，%；A1為樣品吸光度值；A2為樣品本底吸光度值；A3對(duì)照溶液吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線

采用Origin 8.0軟件對(duì)760 nm處測(cè)定不同質(zhì)量濃度茶多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1。線性回歸方程y=0.003 96x+0.039 74，R2=0.998；表明茶多酚質(zhì)量濃度與吸光度值具有良好的線性關(guān)系。

圖1 茶多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of tea polyphenols

2.2 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 浸提溶劑對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

浸提溶劑對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響見(jiàn)圖2。

由圖2可知，不同溶劑對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響有明顯差異，提取率大小依次為：甲醇（9.49%）＞乙醇（5.93%）＞水（4.73%）＞丙酮（3.48%）＞正丁醇（1.45%）。然而，甲醇對(duì)人體有一定的毒副作用，在食品工業(yè)應(yīng)用中受限。因此，選擇乙醇作為浸提溶劑對(duì)拐棗枝進(jìn)行多酚提取試驗(yàn)。

圖2 浸提溶劑對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響Fig.2 Effect of extraction solvent on extraction yield of Hovenia acerba sticks polyphenols

2.2.2 料液比對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

料液比對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 料液比對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響Fig.3 Effect of ratios of water to the raw material on extraction yield of Hovenia acerba sticks polyphenols

由圖3可知，隨著料液比的增加，多酚提取率逐漸提高。當(dāng)料液比增大到1∶80（g/mL）時(shí)，其提取率達(dá)到最大值7.09%，繼續(xù)增加料液比，多酚提取率趨于平緩，不再升高。因此，料液比選擇在1∶80（g/mL）為宜。

2.2.3 浸提溫度對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

浸提溫度對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 浸提溫度對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響Fig.4 Effect of extraction temperature on extraction yield of Hovenia acerba sticks polyphenols

由圖4可知，在浸提溫度達(dá)到60℃前，隨著浸提溫度的升高，拐棗枝多酚提取率也逐漸提高。浸提溫度在60℃時(shí)，多酚提取率最大（6.45%）。當(dāng)浸提溫度在60℃～70℃時(shí)，多酚提取率隨著浸提溫度的升高而趨于平緩且略有下降。因此浸提溫度選擇在60℃為宜。

2.2.4 浸提時(shí)間對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響

浸提時(shí)間對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 浸提時(shí)間對(duì)拐棗枝多酚提取率的影響Fig.5 Effect of extraction time on extraction yield of Hovenia acerba sticks polyphenols

由圖5可知，拐棗枝多酚提取率隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷提高。當(dāng)浸提時(shí)間在2.5 h時(shí)，多酚提取率最大（6.66%），之后多酚提取率隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng)而趨于平緩。因此，浸提時(shí)間選擇在2.5 h為宜。

2.3 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化結(jié)果

2.3.1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

選擇料液比、浸提溫度、浸提時(shí)間3個(gè)影響因素，多酚提取率為響應(yīng)值。根據(jù)Box-Behnken中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，利用Design-Expert 8.0.6軟件設(shè)計(jì)三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)方案，試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果Table 2 Results of response surface experiments

2.3.2 模型方差分析

對(duì)響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果（表2）進(jìn)行多元回歸方程擬合，構(gòu)建回歸模型，方差分析見(jiàn)表3，得到二次多項(xiàng)式回歸方程：

表3 回歸模型方差分析Table 3 Variance analysis of regression model

此回歸模型達(dá)到極顯著水平（P<0.01），對(duì)多酚提取率影響程度依次為料液比（A）＞浸提時(shí)間（C）＞浸提溫度（B）。模型中的 A、C、A2、B2、C2對(duì)響應(yīng)值影響極顯著（P＜0.01），表明試驗(yàn)因素對(duì)響應(yīng)值的影響不是偶然的隨機(jī)事件，不可忽略。失擬項(xiàng)P=0.065 5>0.05，差異不顯著。該模型的R2Adj=0.953，說(shuō)明該模型能夠解釋95.3%的響應(yīng)值變化，僅有總變異的4.7%不能用此模型來(lái)解釋，決定系數(shù)R2=0.983，說(shuō)明該方程與實(shí)際情況擬合良好，試驗(yàn)誤差小，能夠正確分析和預(yù)測(cè)不同提取工藝條件與多酚提取率之間的關(guān)系。

2.3.3 響應(yīng)面圖分析

料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間對(duì)多酚提取率影響的3D響應(yīng)面見(jiàn)圖6。

由圖6可知，在所選的各因素的取值范圍內(nèi)，響應(yīng)值（多酚提取率）呈現(xiàn)極大值。對(duì)響應(yīng)值的影響極顯著的因素有料液比和浸提時(shí)間，表現(xiàn)為曲線較陡；浸提溫度對(duì)響應(yīng)值的影響不顯著，表現(xiàn)為曲線平緩。

圖6 料液比、浸提溫度和浸提時(shí)間對(duì)多酚提取率影響的3D響應(yīng)面Fig.6 The 3D response surface of extraction yield of polyphenols affected by ratio of solid to solution，extraction temperature，extraction time

2.3.4 最佳工藝條件驗(yàn)證

應(yīng)用響應(yīng)面尋優(yōu)分析方法對(duì)回歸模型進(jìn)行分析得到最優(yōu)結(jié)果：當(dāng)料液比（A）為 1∶83.66（g/mL）、浸提溫度（B）為59.63℃、浸提時(shí)間（C）為2.56 h時(shí)，理論最佳拐棗枝多酚提取率為7.089%?？紤]到實(shí)際情況與試驗(yàn)操作的方便性，將各因素修正為：浸提溫度60℃、浸提時(shí)間2.56 h、料液比1∶84（g/mL）。然后在此工藝條件下進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，得到多酚提取率為（7.048±0.103）%，且RSD為1.5%。因此，采用響應(yīng)面法對(duì)拐棗枝多酚浸提條件進(jìn)行優(yōu)化是可行的。

2.4 拐棗枝多酚抗氧化結(jié)果分析

2.4.1 羥自由基清除率的測(cè)定

羥自由基可以在還原性過(guò)渡金屬（Fe2+）和H2O2的存在下通過(guò)芬頓反應(yīng)形成，是已知分子氧的所有還原形式中最具活性的，同時(shí)也被認(rèn)為是生物體內(nèi)細(xì)胞損傷的開(kāi)始[18]。

圖7 多酚對(duì)羥自由基的清除作用Fig.7 Scavenging activity of polyphenols on hydroxyl radical

由圖7可知，在試驗(yàn)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，拐棗枝多酚和VC對(duì)羥自由基均有明顯的清除作用；在0.5mg/mL～3.0 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)羥自由基的清除作用隨著多酚濃度的增大而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度在3.0 mg/mL～5.0 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)羥自由基的清除作用隨著濃度的增大而緩慢增強(qiáng)，之后趨于平緩，最大清除率達(dá)到90.97%。VC在0.5 mg/mL～2.0 mg/mL 時(shí)，VC對(duì)羥自由基的清除作用隨著VC質(zhì)量濃度的增加而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度大于2.0 mg/mL后，清除率趨于穩(wěn)定，維持在99.92%。與VC相比較，拐棗枝多酚對(duì)羥自由基的清除能力稍弱。

2.4.2 DPPH自由基清除率的測(cè)定

DPPH自由基在517 nm下有最大吸收峰，是一種穩(wěn)定的自由基，很容易被抗氧化劑清除[19]。現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于評(píng)估食物或植物提取物的抗氧化性能力[20]見(jiàn)圖8。

圖8 多酚對(duì)DPPH自由基的清除作用Fig.8 Scavenging activity of polyphenols on DPPH radical

由圖8可知，在試驗(yàn)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，拐棗枝多酚和VC對(duì)DPPH自由基均有明顯的清除能力，在0.005 mg/mL～0.05 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)DPPH自由基的清除能力隨著多酚濃度的增大而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度在0.05 mg/mL～3.0 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)DPPH自由基的清除能力隨著濃度的增大而緩慢增強(qiáng)，表現(xiàn)為曲線平緩，當(dāng)質(zhì)量濃度大于0.5 mg/mL時(shí)，其對(duì)DPPH自由基的清除率達(dá)到最大值97.19%。VC在0.01 mg/mL～0.05 mg/mL時(shí)，VC對(duì)DPPH自由基的清除作用隨著VC質(zhì)量濃度的增加而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度大于0.05 mg/mL后，清除率趨于穩(wěn)定，維持在96.05%。與VC相比較，雖然拐棗枝多酚在DPPH最大清除率上略高于VC，但是在低質(zhì)量濃度范圍內(nèi)VC對(duì)DPPH自由基的清除能力比拐棗枝多酚強(qiáng)。

2.4.3 ABTS自由基清除率的測(cè)定

ABTS自由基是通過(guò)ABTS與過(guò)硫酸鉀的氧化反應(yīng)生成[21]。當(dāng)ABTS自由基與樣品中的抗氧化劑反應(yīng)時(shí)，其特征顏色（藍(lán)綠色）將會(huì)褪去[22]，在734 nm處的特征吸收峰將會(huì)減弱。因此，通過(guò)檢測(cè)734 nm處反應(yīng)體系的吸光度值，可以定量分析ABTS自由基清除率大小，結(jié)果見(jiàn)圖9。

圖9 多酚對(duì)ABTS自由基的清除作用Fig.9 Scavenging activity of polyphenols on ABTS radical

由圖9可知，在試驗(yàn)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，拐棗枝多酚和VC對(duì)ABTS自由基均有明顯的清除能力，質(zhì)量濃度在0.005 mg/mL～0.05 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)ABTS自由基的清除能力隨著多酚濃度的增大而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度在0.05 mg/mL～5.0 mg/mL時(shí)，拐棗枝多酚對(duì)ABTS自由基的清除能力隨著濃度的增大而趨于平緩，最大清除率達(dá)到93.99%。VC0.01 mg/mL～0.05 mg/mL時(shí)，VC對(duì)ABTS自由基的清除作用隨著VC質(zhì)量濃度的增加而迅速增強(qiáng)，質(zhì)量濃度大于0.05 mg/mL后，清除率達(dá)到最大值，維持在97.53%。與VC相比較，拐棗枝多酚對(duì)ABTS自由基的清除能力稍弱。

3 結(jié)論

本研究利用響應(yīng)面分析法對(duì)拐棗枝多酚的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，回歸模型方差分析后得出最佳提取工藝條件：在料液比為1∶84（g/mL），浸提溫度為60℃的條件下，浸提2.56 h，拐棗枝多酚的理論提取率為7.089%，實(shí)際提取率為（7.048±0.103）%。因此，響應(yīng)面分析法優(yōu)化得到的拐棗枝多酚提取工藝參數(shù)是準(zhǔn)確可靠的?？寡趸栽囼?yàn)研究結(jié)果表明，在試驗(yàn)的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著拐棗枝多酚的質(zhì)量濃度增加，其對(duì)羥自由基、ABTS自由基和DPPH自由基的清除作用增強(qiáng)，最大清除率分別達(dá)到90.97%、93.99%、97.19%。因此，拐棗枝多酚具有較強(qiáng)的抗氧化能力，是潛在的天然抗氧化劑，有待進(jìn)一步研究和利用。

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Optimization of Extraction Technology of Hovenia acerba Sticks Polyphenols and Its Antioxidant Activity

ZHANG Bao，ZHANG Meng，LI Li-tian，ZHENG Peng-peng，AO Xin-yu*
（College of Life Science，Southwest Forestry University，Kunming 650224，Yunnan，China）

In order to provide theoretical basis for rationally developing and utilizing Hovenia accrba sticks polyphenols，the extraction technology of polyphenols from Hovenia accrba sticks was optimized by response surface methodology and studying its antioxidant activity.Using Hovenia accrba sticks as experimental materials，the effects of extraction solvent，material-liquid ratio，extraction temperature and extraction time on extraction rates of polyphenols were studied based on single factor experiment with response surface methodology.The antioxidant activities were investigated on the basis of hydroxyl radical，ABTS free radical and DPPH free radical assay．Result showed that the optimal extraction conditions were using anhydrous alcohol as extraction solvent with conditions of material-liquid ratio 1∶84 （g/mL），extraction temperature 60℃，extraction time 2.56 h，and the optimum extraction rate was up to 7.089%.The antioxidant activity tests revealed that polyphenols exhibited antioxidant activities in a concentration-dependent manner，and maximum scavenging rate were 90.97%，93.99%and 97.19%，respectively.

Hovenia accrba sticks；polyphenols；response surface methodology；antioxidant activity

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.23.009

云南省優(yōu)勢(shì)特色重點(diǎn)學(xué)科生物學(xué)一級(jí)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目（50097505）；西南林業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新基金（15125）

張保（1992—），男（漢），碩士研究生，研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)。

*通信作者：敖新宇（1978—），男（漢），副教授，碩士，主要從事于生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究工作。

2017-04-20