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        毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性和均一性性能測(cè)試方法及分析

        2017-12-01 01:42:44
        福建質(zhì)量管理 2017年21期
        關(guān)鍵詞:出峰標(biāo)準(zhǔn)偏差毛細(xì)管

        周 參

        (公安部第一研究所 北京 102200)

        毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性和均一性性能測(cè)試方法及分析

        周 參

        (公安部第一研究所 北京 102200)

        本文針對(duì)用于DNA檢測(cè)的毛細(xì)管電泳儀,設(shè)計(jì)了重復(fù)性及均一性測(cè)試方法,并對(duì)測(cè)試結(jié)果進(jìn)行分析,結(jié)果顯示重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%,均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%,滿足DNA電泳需求。

        毛細(xì)管電泳儀;重復(fù)性;均一性

        毛細(xì)管電泳儀是自20世紀(jì)70年代以來在生物領(lǐng)域廣泛使用的分析儀器,由于毛細(xì)管電泳所需樣品量少、可以施加高壓進(jìn)而縮短電泳時(shí)間、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、可以實(shí)現(xiàn)對(duì)批量樣品的分析等優(yōu)點(diǎn),毛細(xì)管電泳在生物高分子特別是DNA檢測(cè)方面發(fā)揮了巨大作用。本文以課題組自主研制的毛細(xì)管電泳儀為研究對(duì)象,對(duì)其電泳重復(fù)性和均一性進(jìn)行了測(cè)試。

        一、實(shí)驗(yàn)試劑

        LIZ500、甲酰胺、POP4膠、緩沖液、16通道毛細(xì)管陣列(均由ABI公司提供)。

        二、實(shí)驗(yàn)方法

        1. 取5ul LIZ500與195ul甲酰胺混合,分裝到96孔板A1-A2行,每孔加入10ul樣品。

        2. 將毛細(xì)管安裝到毛細(xì)管電泳儀上,毛細(xì)管兩端分別浸入到緩沖液中,并向毛細(xì)管中灌注POP4膠。

        3. 采用電進(jìn)樣方式將LIZ500引入毛細(xì)管通道中。

        4. 毛細(xì)管電泳儀對(duì)LIZ500進(jìn)行20次重復(fù)檢測(cè),采集LIZ500各片段出峰時(shí)間,選取部分位點(diǎn)的數(shù)據(jù)對(duì)毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性和均一性進(jìn)行分析。

        三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析:

        1. 重復(fù)性

        選取毛細(xì)管陣列中的第1根毛細(xì)管作為研究對(duì)象,選取75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的20次電泳的出峰幀數(shù)進(jìn)行分析,結(jié)果如圖1及圖2所示,第1根毛細(xì)管在20次電泳中,選取的每個(gè)DNA片段的出峰位置相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.6%,表明毛細(xì)管電泳儀重復(fù)性效果很好。

        2. 均一性

        對(duì)同一組電泳中16根毛細(xì)管中 75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的出峰幀數(shù)進(jìn)行分析,結(jié)果如圖3及圖4所示,同一組電泳中,每根毛細(xì)管中選取的每個(gè)DNA片段的出峰位置相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.65%,表示毛細(xì)管電泳儀均一性效果很好。

        四、總結(jié)

        本文采用ABI的LIZ500試劑對(duì)毛細(xì)管電泳儀的重復(fù)性和均一性進(jìn)行測(cè)試,重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%,均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%,低于儀器分析相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)方差應(yīng)在2.0%以下的要求,表明課題組自主研制的毛細(xì)管電泳儀能夠滿足重復(fù)性及均一性測(cè)試要求,可以對(duì)DNA片段進(jìn)行分析。

        圖1 重復(fù)性測(cè)試結(jié)果

        圖2 重復(fù)性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

        圖3 均一性測(cè)試結(jié)果

        圖4 均一性測(cè)試相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

        [1]郭懷忠,畢開順,孫毓慶. 影響毛細(xì)管電泳分析結(jié)果重現(xiàn)性的因素及其控制[J]. 分析儀器, 2005,2: 42-45.

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