周 參
(公安部第一研究所 北京 102200)
毛細管電泳儀重復(fù)性和均一性性能測試方法及分析
周 參
(公安部第一研究所 北京 102200)
本文針對用于DNA檢測的毛細管電泳儀,設(shè)計了重復(fù)性及均一性測試方法,并對測試結(jié)果進行分析,結(jié)果顯示重復(fù)性測試相對標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%,均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%,滿足DNA電泳需求。
毛細管電泳儀;重復(fù)性;均一性
毛細管電泳儀是自20世紀(jì)70年代以來在生物領(lǐng)域廣泛使用的分析儀器,由于毛細管電泳所需樣品量少、可以施加高壓進而縮短電泳時間、易于實現(xiàn)自動化、可以實現(xiàn)對批量樣品的分析等優(yōu)點,毛細管電泳在生物高分子特別是DNA檢測方面發(fā)揮了巨大作用。本文以課題組自主研制的毛細管電泳儀為研究對象,對其電泳重復(fù)性和均一性進行了測試。
LIZ500、甲酰胺、POP4膠、緩沖液、16通道毛細管陣列(均由ABI公司提供)。
1. 取5ul LIZ500與195ul甲酰胺混合,分裝到96孔板A1-A2行,每孔加入10ul樣品。
2. 將毛細管安裝到毛細管電泳儀上,毛細管兩端分別浸入到緩沖液中,并向毛細管中灌注POP4膠。
3. 采用電進樣方式將LIZ500引入毛細管通道中。
4. 毛細管電泳儀對LIZ500進行20次重復(fù)檢測,采集LIZ500各片段出峰時間,選取部分位點的數(shù)據(jù)對毛細管電泳儀重復(fù)性和均一性進行分析。
1. 重復(fù)性
選取毛細管陣列中的第1根毛細管作為研究對象,選取75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的20次電泳的出峰幀數(shù)進行分析,結(jié)果如圖1及圖2所示,第1根毛細管在20次電泳中,選取的每個DNA片段的出峰位置相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.6%,表明毛細管電泳儀重復(fù)性效果很好。
2. 均一性
對同一組電泳中16根毛細管中 75、100、139、150、160、200、250、300、340、350、400bp片段的出峰幀數(shù)進行分析,結(jié)果如圖3及圖4所示,同一組電泳中,每根毛細管中選取的每個DNA片段的出峰位置相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1.65%,表示毛細管電泳儀均一性效果很好。
本文采用ABI的LIZ500試劑對毛細管電泳儀的重復(fù)性和均一性進行測試,重復(fù)性測試相對標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.6%,均一性標(biāo)準(zhǔn)方差小于1.65%,低于儀器分析相對標(biāo)準(zhǔn)方差應(yīng)在2.0%以下的要求,表明課題組自主研制的毛細管電泳儀能夠滿足重復(fù)性及均一性測試要求,可以對DNA片段進行分析。
圖1 重復(fù)性測試結(jié)果
圖2 重復(fù)性測試相對標(biāo)準(zhǔn)偏差
圖3 均一性測試結(jié)果
圖4 均一性測試相對標(biāo)準(zhǔn)偏差
[1]郭懷忠,畢開順,孫毓慶. 影響毛細管電泳分析結(jié)果重現(xiàn)性的因素及其控制[J]. 分析儀器, 2005,2: 42-45.