武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022

不同海拔生長的寬葉纈草GC指紋圖譜研究

胡麗霞

武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，湖北 武漢 430022

目的建立不同海拔生長的寬葉纈草揮發(fā)油指紋圖譜，分析其主要成分及含量差異。方法采用GC對不同海拔生長寬葉纈草的揮發(fā)油進(jìn)行檢定，應(yīng)用相似度評價系統(tǒng)對所得的不同海拔生長的寬葉纈草GC指紋圖譜進(jìn)行分析。結(jié)果通過GC指紋圖譜分析，可見不同海拔生長寬葉纈草主要組分基本相同，但其相對含量有差異；高海拔的寬葉纈草與模式指紋圖譜內(nèi)在化學(xué)成分和含量更為接近些；4批樣品中乙酸龍腦酯的含量有顯著性差異，隨海拔的升高，乙酸龍腦酯的含量逐漸增加。結(jié)論相對于低海拔，高海拔生境更適于寬葉纈草成長及有效成分的積累。

寬葉纈草；不同海拔；GC指紋圖譜

寬葉纈草為敗醬科纈草屬植物寬葉纈草(ValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiq)的干燥根及根莖，產(chǎn)于我國南部湖北省、湖南省、貴州省等地區(qū)，具有鎮(zhèn)痛解痙、解表散寒、活血調(diào)經(jīng)、祛風(fēng)除濕的功效[1]。寬葉纈草分布較廣，受土壤、氣候等自然條件的影響，其地理分布極不平衡，呈連續(xù)而間斷的分布狀態(tài)。為此，我們對生長在不同海拔帶的寬葉纈草進(jìn)行了指紋圖譜研究，旨在闡明藥材質(zhì)量與生態(tài)環(huán)境的關(guān)系，并為山地栽培寬葉纈草的生產(chǎn)區(qū)劃的確定提供參考[2]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫氣相色譜儀6890(美國安捷倫公司)，氫火焰(FID)檢測器。

1.2 材料 寬葉纈草藥材于2014年6月采挖于湖北省恩施州地區(qū)，經(jīng)武漢大學(xué)藥學(xué)院王有為教授鑒定為敗醬科纈草屬寬葉纈草ValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiq的干燥根莖，詳細(xì)資料見表1。所用試劑均為分析純；參照物乙酸龍腦酯對照品(批號：110759201405)購于中國藥品生物制品檢定所。

表1 寬葉纈草藥材樣品來源資料

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：DB-WAX石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm)；柱溫：起始溫度60 ℃，以每分鐘4 ℃的速率升至70 ℃，保持2.5 min，然后以每分鐘12 ℃的速率升至115 ℃，保持6.25 min，再每分鐘4 ℃的速率升至230 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；檢測器溫度為250 ℃；載氣為氮?dú)?純度0.9999)，1.3 mL/min；分流比30∶1；進(jìn)樣量1.0 μL。

2.2 供試品溶液的制備 將不同海拔高度采集的寬葉纈草樣品放置陰干后，粉碎后過20目篩，按中國藥典2010年版揮發(fā)油測定甲法[3]，提取、收集揮發(fā)油。用無水硫酸鈉脫水，加入20倍乙醚稀釋，進(jìn)樣分析。

2.3 方法學(xué)考察 根據(jù)樣品GC指紋圖譜，計算出相對含量不少于1.5%的8個單峰相對保留時間和相對含量。以乙酸龍腦酯為參照物，算出各主要峰的相對保留時間；用面積歸一法計算相對含量。

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取1900m采集的寬葉纈草樣品供試液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果8個主要峰的相對保留時間RSD均小于0.088%，相對含量RSD均小于2.307%。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取1900m采集的寬葉纈草樣品供試液，分別在0、1、3、6、9、12、24 h進(jìn)樣。結(jié)果8個主要峰相對保留時間RSD均小于0.070%，相對含量RSD均小于2.405%。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取1900m采集的寬葉纈草樣品6份，分別提取揮發(fā)油，處理后進(jìn)樣分析。結(jié)果8個主要峰相對保留時間RSD均小于0.057%，相對含量RSD均小于1.454%。

2.4 不同海拔高度生長寬葉纈草GC指紋圖譜的建立及分析 將4批樣品分別處理，按照實(shí)驗(yàn)所確定的色譜條件進(jìn)樣，見圖2；由所得的圖譜數(shù)據(jù)建立不同海拔高度生長寬葉纈草樣品的GC-相對保留值指紋(GC-FPS)，見表2。由匹配數(shù)目可判斷有21個共有峰。

表2 不同海拔寬葉纈草樣品的GC相對保留值指紋譜

續(xù)表 表2 不同海拔寬葉纈草樣品的GC相對保留值指紋譜

2.4.1 相似度 通過“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版”軟件，采用中位數(shù)法計算相似度，結(jié)果見表3。

表3 4批樣品相似度評價

2.4.2 八強(qiáng)峰 通過分析比較八強(qiáng)峰的數(shù)據(jù)可以從量的角度對比不同海拔高度生長寬葉纈草樣品之間的差異，分析結(jié)果見表4。

通過分析比較表中的數(shù)據(jù)可以歸納出如下結(jié)論：α值為1.000、2.360、1.027、1.217、2.017的5個色譜峰在4個樣品中都進(jìn)入了八強(qiáng)峰；α值為1.190的峰在3個樣品中都進(jìn)入了八強(qiáng)峰。表明此6個組分為不同海拔高度生長寬葉纈草主要和基本成分，其它八強(qiáng)峰無明顯特點(diǎn)。各樣品八強(qiáng)峰積分面積和比較接近，最大為第3批號樣品(82.882%)，最小的為第1批號樣品(72.683%)。

表4 4批樣品的8強(qiáng)峰

3 討論

藥用植物的生長受多方面因素影響，其中海拔是影響因素之一，可以影響植物的生長形態(tài)和發(fā)育。筆者采用水蒸氣蒸餾法提取寬葉纈草揮發(fā)油，比較了不同海拔高度樣品中揮發(fā)油化學(xué)成分差別。而不同海拔寬葉纈草各揮發(fā)性成分，暫時無對應(yīng)圖譜庫相關(guān)信息。從GC-FPS可知不同海拔高度生長的寬葉纈草樣品揮發(fā)油指紋圖譜有21個共有峰，樣品相互之間的相似度為0.945～0.989，說明其大致成分基本相同，與薛存寬等[4]的研究結(jié)果相同。

從與模式圖譜的相似度看，不同海拔高度生長的寬葉纈草指紋圖譜的相似度均大于90%，說明化學(xué)成分信息符合寬葉纈草藥材的指紋特征，且高海拔的寬葉纈草與模式圖譜內(nèi)在化學(xué)成分和含量更為接近些。研究表明隨海拔升高，地形地貌的改變，土壤肥力的不同，氣溫降低，日照增強(qiáng)等特征，形成了垂直差異，高海拔地區(qū)的生態(tài)條件變化可能利于寬葉纈草揮發(fā)油的產(chǎn)生和積累。

八強(qiáng)峰分析表明，不同海拔高度生長的寬葉纈草樣品主要組分基本相同；但是主成分的含量稍有差異，隨海拔升高樣品中乙酸龍腦酯峰[5]的相對含量逐漸增高。乙酸龍腦酯屬于單萜類化合物，而揮發(fā)油的主要成分就是單萜及其含氧衍生物和部分倍半萜類化合物。根據(jù)前期研究表明乙酸龍腦酯在寬葉纈草揮發(fā)油中的含量最高，植物化學(xué)成分的含量與海拔高度有顯著相關(guān)，表明相對于低海拔，高海拔生境更適于寬葉纈草成長及有效成分的積累。

[1]Du X W，Wu J K. Chemical constituents and their pharmacological reseach progress in medicinal plants of Valerian[J]. World Phytomedicines，2006，21(1)：10.

[2]代澤琴，錢志瑤，周道堂，等. 海拔高度對黔產(chǎn)寬葉纈草中揮發(fā)油及乙酸龍腦酯含量的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21(17)：56-58.

[3]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄XD.

[4]薛存寬，蔣鵬，沈凱. 纈草揮發(fā)油成分分析及其含量影響因素探討[J]. 中草藥，2003，34(9)：779-781.

[5]胡麗霞，王曉仙，趙明. 氣相色譜法測定寬葉纈草揮發(fā)油中乙酸龍腦酯含量[J]. 中國民族民間醫(yī)藥，2016，25(21)：23-25.

GCFingerprintStudyofVolatileOilfromValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiqinDifferentHeightAboveSeaLevel

HU Lixia

Wuhan Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine, Wuhan 430022，China

ObjectiveTo establish the fingerprint analysis for volatile oil fromValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiq in different height above sea level and to determine the characteristic components.MethodsThe chromatogram fingerprint of volatile oil fromValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiq were established to be analysised.ResultsDifferent height above sea level had close main components with content diversity. The determination of bornyl acetate was increased from low to high height above sea level.ConclusionThe higher height above sea level is better.

ValerianaofficinalisL.var.latifoliaMiq；Different Height Above Sea Level；GC Fingerprint

胡麗霞(1981-)，女，漢族，碩士研究生，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴庂Y源學(xué)。E-mail：huli-23@163.com

R284.1

A

1007-8517(2017)21-0016-03

2017-09-17 編輯：鄧佳麗)