方 琦 龐恩橋 韋宜峰 王麗祥

(廣西柳州市柳鐵中心醫(yī)院耳鼻喉科，柳州市 545007)

鼻咽癌分化程度與CD80和CD86表達(dá)的相關(guān)性研究

方 琦 龐恩橋 韋宜峰 王麗祥

(廣西柳州市柳鐵中心醫(yī)院耳鼻喉科，柳州市 545007)

目的研究CD80和CD86在鼻咽癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義。方法應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)26例鼻咽癌組織(低分化13例，未分化13例)和11例正常鼻咽組織中CD80和CD86的表達(dá)水平。結(jié)果鼻咽癌組織和正常鼻咽組織的CD80和CD86陽性率分別為61.54%(16/26)和100.00%(11/11) ，陽性組織用PISA-2000圖像分析，測(cè)得其不同的平均陽性灰度值A(chǔ)GV：CD80為(41.53±5.81)、(73.93 ±6.45) ；CD86為(42.44±4.12)、(73.60±6.42)，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0. 05)。低分化鼻咽癌組織和未分化鼻咽癌組織CD80和CD86的陽性率分別為84.62%(11/13)和38.46% (5/13)(Plt;0.05)。結(jié)論CD80和CD86在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯低于正常組織，表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)，隨分化程度下降而下降。

鼻咽癌；CD80；CD86

CD80和CD86是表達(dá)在抗原提呈細(xì)胞(APC)上的重要協(xié)同刺激分子,激活特異性的T細(xì)胞時(shí)，與T細(xì)胞上的CD28分子結(jié)合，發(fā)揮免疫效應(yīng)。近年來的研究表明，非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌、肝癌、腎細(xì)胞癌、食管癌以及宮頸癌組織中CD80(B7-1)和CD86(B7-2)的表達(dá)明顯低于正常組織，發(fā)生腫瘤細(xì)胞免疫逃避。 為進(jìn)一步探討CD80和CD86在鼻咽癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義，我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)了26例鼻咽活檢的鼻咽癌組織(低分化13例，未分化13例)及11例鼻咽正常組織標(biāo)本中CD80和CD86的表達(dá)水平，報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 材料 鼻咽癌標(biāo)本26例、正常鼻咽組織標(biāo)本11例均取自柳州市柳鐵中心醫(yī)院2012年至2015 年就診患者的鼻咽活檢組織，并經(jīng)病理學(xué)確診。CD80和CD86單克隆抗體均為武漢博士德生物有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法 組織標(biāo)本經(jīng)福爾馬林固定，脫水，常規(guī)石蠟包埋，制備成3 μm厚連續(xù)切片，石蠟切片常規(guī)脫蠟至水后PBS振洗，按博士德APA免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒說明書染色。抗CD80單抗與抗CD86單抗?jié)舛?，CD80 ∶蒸餾水1 ∶1 000；CD86 ∶蒸餾水1 ∶400。石蠟切片經(jīng)Bench Mark XT全自動(dòng)免疫組(IHC)獨(dú)立溫控液體封蓋膜法處理后在光鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判斷 以胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕色顆粒或均一棕色為陽性。無陽性細(xì)胞記為-， 有陽性細(xì)胞記為+。 圖像分析：每張切片隨機(jī)錄入5個(gè)視野圖像， 測(cè)定視野內(nèi)的陽性細(xì)胞陽性產(chǎn)物強(qiáng)度，用PISA-2000圖像分析，以平均陽性物質(zhì)灰度值表示，將5個(gè)視野的陽性灰度平均值作為每一張片的平均陽性物灰度值A(chǔ)GV, AGV越大陽性反應(yīng)物的染色強(qiáng)度越大。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.00統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%表示，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn),計(jì)量數(shù)據(jù)以(x±s)表示，組間比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 染色強(qiáng)度表達(dá)情況 正常鼻咽組織中CD80、CD86陽性率高于鼻咽組織(Plt;0.05)；鼻咽癌組織CD80平均陽性物灰度值A(chǔ)GV、CD86平均陽性物灰度值A(chǔ)GV均低于正常鼻咽組織(Plt;0.01)。詳見表1。

表1 鼻咽癌標(biāo)本及正常鼻咽組織中CD80 、CD86的表達(dá)

2.2 免疫組化染色 鼻咽癌組織CD80、CD86的免疫組化染色，其表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。詳見圖1、圖2。

圖1 未分化鼻咽癌CD80表達(dá)(×400)

圖2未分化鼻咽癌CD86表達(dá)(×400)

2.3 陽性頻度表達(dá)情況 低分化鼻咽癌組織中CD80、CD86陽性明顯高于未分化鼻咽癌(Plt;0.05)。見表2。

表2 低分化、未分化鼻咽癌組織中CD80、CD86的表達(dá)

3 討 論

CD80和CD86均為跨膜糖蛋白,是免疫球蛋白超家族(immunoglobulins supeffamily，IgSF)成員, 以寡聚體形式表達(dá)于大多數(shù)APC表面,如樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)、活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等[1-2]。在人體的抗腫瘤免疫機(jī)制中，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫是主要方式。初始T淋巴細(xì)胞的活化既需要由T淋巴細(xì)胞抗原受體(TCR)與抗原提呈細(xì)胞(APC)上的抗原肽-主要組織相容性復(fù)合體(MHC)結(jié)合提供的第一信號(hào)，又需要由APC上的協(xié)同刺激分子與T淋巴細(xì)胞上的相應(yīng)配體結(jié)合提供的第二信號(hào)協(xié)同刺激[3]。 CD80、CD86在組織中的表達(dá) ,主要由T細(xì)胞上的CD28與抗原提呈細(xì)胞(APC)上的 CD80(B7-1)和CD86(B7-2)結(jié)合所提供。[4]大多數(shù)腫瘤細(xì)胞表達(dá)MHC-I類分子和腫瘤抗原，是潛在的APC;然而，研究表明,如腎細(xì)胞癌[5]、小細(xì)胞肺癌[6]、卵巢癌[7]、肝癌組織中[8]CD80和CD86在癌組織中的表達(dá)明顯低于癌周組織和正常組織。表明B7在腫瘤的不表達(dá)是其逃避殺傷性 T 淋巴細(xì)胞(CTL)的攻擊,是惡性增殖的主要機(jī)制[9]。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)鼻咽癌組織及鼻咽正常組織標(biāo)本CD80和CD86的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)CD80和CD86在鼻咽癌組織和正常組織的表達(dá)率為38.46%、100%。CD80和CD86陽性表達(dá)用圖像分析測(cè)得正常組織、鼻咽癌組織其不同的平均陽性灰度值(AGV)分別為(41.53±5.81)、(73.93±6.45)和(42.44±4.12)、(73.60±6.42)。鼻咽癌組織和正常組織的表達(dá)差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯低于正常組織，表達(dá)主要在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。證實(shí)鼻咽癌細(xì)胞并不是沒有合成CD80和CD86分子的功能，只是CD80和CD86在細(xì)胞中的表達(dá)明顯減少，且不能表達(dá)在細(xì)胞膜上,鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)可能存在CD80和CD86分子運(yùn)送至細(xì)胞膜上有缺陷,造成協(xié)同刺激分子缺乏，致使鼻咽癌癌細(xì)胞逃避殺傷性T淋巴細(xì)胞(CTL)的攻擊,惡性增殖。是否可通過運(yùn)用于鼻咽癌的免疫治療，減少腫瘤細(xì)胞這種逃避能力。黃光武等[10]通過對(duì)鼻咽癌病人外周血樹突狀細(xì)胞的表型及功能檢測(cè)，初步顯示從鼻咽癌患者的外周血分離出的DC，通過體外的誘導(dǎo)分化，是可以培養(yǎng)成熟，具有較強(qiáng)呈遞抗原能力的。這為今后DC運(yùn)用于鼻咽癌的免疫治療提供一個(gè)新的方向。

有研究證實(shí)，在甲狀腺癌中CD80和CD86的表達(dá)隨病變程度進(jìn)行性下降[11]。本組研究發(fā)現(xiàn)鼻咽低分化組織和鼻咽未分化組織CD80和CD86表達(dá)的陽性率為84.62%(11/13)和38.46%(5/13)，鼻咽癌CD80和CD86表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示鼻咽癌CD80和CD86表達(dá)隨分化程度下降而下降。

綜上所述，鼻咽癌組織中CD80、CD86的共刺激分子低下，隨分化程度下降而下降，至腫瘤細(xì)胞逃避機(jī)體的免疫攻擊，惡性增殖。這為今后可通過大樣本鼻咽癌組織中的CD80和CD86表達(dá)受損研究，探索與臨床病理分型及預(yù)后的關(guān)系，提供了一個(gè)參考。

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CorrelationofnasopharyngealcarcinomadifferentiationwithCD80andCD86expressions

FANGQi,PANGEnqiao,WEIYifeng,WANGLixiang

(DepartmentofOtorhinolaryngological，LiuzhouMumicipalLiutieContralHospital，Liuzhou，Guangxi545007，China)

ObjectiveTo investigate the expressions and biological significance of CD80 and CD86 in nasopharyngeal carcinoma.MethodsThe expressions of CD80 and CD86 were detected by immunohistochemical stain in 26 cases of nasopharyngeal carcinoma tissues(including 13 poorly differentiated cases and 13 undifferentiated cases) and 11 cases of normal nasopharyngeal tissues.ResultsThe positive rates of CD80 and CD86 in the nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were 61.54%(16/26) and 100.00%(11/11) respectively. The average grey values (AGV) of CD80 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were (41.53±5.81)and (73.93 ±6.45)respectively. According to the analysis of PISA-2000 images, the average grey values (AGV) of CD80 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were(41.53±5.81)and (73.93±6.45)respectively. The AGVs of CD86 in the positive nasopharyngeal carcinoma tissues and normal nasopharyngeal tissues were(42.44±4.12)and(73.60±6.42)respectively. And significant differences in the AGVs were found between the two groups(Plt;0.05).The positive rates of CD80 and CD86 in the poorly differentiated tissues and undifferentiated tissues were 84.61%(11/13)and 38.46% (5/13)respectively(Plt;0.05).ConclusionThe expressions of CD80 and CD86 in the cancer tissues are lower than those in the normal tissue. CD80 and CD86 mainly expressed in cytoplasm and nucleus, and their expressions decreased with the decrease of differentiation.

Nasopharyngeal carcinoma;CD80;CD86

R 739.6

A

1673-6575(2016)05-03

10.11864/j.issn.1673.2017.05.03

2017-06-24

2017-08-18)