張 穎，任 波，田 楓

(北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，北京 100191)

移液槍在小鼠內(nèi)眥取血中的應(yīng)用

張 穎，任 波，田 楓*

(北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部，北京 100191)

目的介紹移液槍用于小鼠內(nèi)眥取血的方法。方法20只C57BL/6J雄性小鼠，分為移液槍組和毛細管組，分別用移液槍和毛細管進行小鼠內(nèi)眥定量取血3次，記錄兩組采血完成時間和采血成功率。結(jié)果兩組采血成功率為100%，但移液槍組采血完成時間快于毛細血管組，且差異有顯著性(P< 0.05)。結(jié)論直接應(yīng)用移液槍為小鼠內(nèi)眥取血提供了一種簡便易行且相對安全的方法。

小鼠；內(nèi)眥取血；移液槍

小鼠采血是動物實驗中常用的操作技術(shù)之一，常見的小鼠采血方法有內(nèi)眥采血、下頜靜脈采血、斷頭采血、心臟采血、斷尾采血等[1]，其中內(nèi)眥采血是動物在活體情況下，能夠采到相對多的血量且操作簡便的方法，采血時一般采用毛細管刺破小鼠內(nèi)眥取血。在實際工作中，我們嘗試使用移液槍和槍頭替代毛細管進行內(nèi)眥取血，取得了較好的效果。本文以C57BL/6J小鼠為例，探討移液槍及槍頭在內(nèi)眥取血中的應(yīng)用。

1 材料和方法

1.1實驗動物

SPF級C57BL/6J小鼠，20只，雄性，6～8周，18～22 g，購自北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部[SCXK (京) 2016-0010],飼養(yǎng)于北京大學醫(yī)學部實驗動物科學部屏障環(huán)境中[SYXK (京) 2016-0041],飼喂全價SPF級大、小鼠繁殖飼料(北京科澳協(xié)力飼料有限公司生產(chǎn))[SCXK (京) 2014-0010]。

1.2主要儀器

20 μL移液槍(大龍興創(chuàng)實驗儀器公司生產(chǎn))，無菌槍頭，無菌毛細管(華西醫(yī)科大學生產(chǎn))。

1.3實驗方法

注：A：采血前；B：采血中。圖1 移液槍用于內(nèi)眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.1 Blood collection from the inner canthus using a pipettor

實驗分為移液槍組和毛細管組兩組，每組10只小鼠。應(yīng)用移液槍取血時，左手抓取、保定小鼠，將一側(cè)眼球突出，右手持20 μL移液槍將槍頭約水平角度插入小鼠內(nèi)眼瞼(感覺有落空感)，即拔出槍頭，血液自行流入EP管內(nèi)(圖1)。應(yīng)用毛細管取血時，左手抓取、保定小鼠，將一側(cè)眼球突出，右手持已備好的毛細管沿45°角插入小鼠內(nèi)眼瞼(感覺有落空感)，后捻轉(zhuǎn)毛細管，血液延管壁流入EP管內(nèi)(圖2)。小鼠每隔7 d采血一次，共采血3次。本實驗研究經(jīng)由實驗動物使用與管理委員會批準(IACUC：LA2013-18)，實驗操作過程中按實驗動物使用的3R原則給予人道主義關(guān)懷，取血前眼部滴加普魯卡因局麻藥，取血結(jié)束用干棉球壓迫止血。每次取血記錄完成的時間，并觀察取血成功率。單次取血量> 0.1 mL，且無溶血，經(jīng)離心獲得清亮血清即為采血成功。

1.4統(tǒng)計學方法

注：A：采血前；B：采血中。圖2 毛細管用于內(nèi)眥取血Note. A: Before blood sampling; B: Blood sampling.Fig.2 Blood collection from the inner canthus using a glass capillary

2 結(jié)果

2.1內(nèi)眥取血所用時間及成功率

實驗結(jié)果顯示，使用移液槍和毛細管均能100%成功完成小鼠內(nèi)眥取血，移液槍組完成時間快于毛細管組，且差異有顯著性(P< 0.05)，見表1。

Tab.1Time consumption and success rate of blood collection from the inner canthus of mice

組別Groups取血所用時間/sTimeconsumption成功率/%Successrate移液槍組Pipettor10.2±0.6*100毛細管組Glasscapillary10.9±0.8100

注：與毛細管組相比，*P< 0.05。

Note. Compared with the capillary group,*P< 0.05.

2.2移液槍和毛細管用于內(nèi)眥取血的比較

從固定方法、完成時間、反復采血性、小鼠掙扎程度、出血量、對眼部損傷、動物疼痛感七個方面對移液槍和毛細管用于內(nèi)眥取血進行比較(見表2)。移液槍較毛細管應(yīng)用于小鼠內(nèi)眥取血具有一定的優(yōu)勢，可以在小鼠采血時選擇應(yīng)用。

表2 移液槍和毛細管用于內(nèi)眥取血的比較

3 討論

動物實驗中最基本的實驗技術(shù)，如抓取與固定方法、采血方法等，雖然已經(jīng)有較完整的實驗方法，但在實際工作中操作者往往會摸索出更有效、更簡便易行的的實驗技巧[2-4]。

小鼠體積小，血量有限，如果需要在小鼠清醒的情況下，能夠反復采血，采到相對多的血量，而且操作簡便的方法，內(nèi)眥取血法是首選。內(nèi)眥取血法一般選取毛細管進行，但是毛細管較脆，在取血時易折斷在眼球內(nèi)。另外。有時毛細管會掉落在EP管內(nèi)，這種情況下一是使采血時間延長，二是可能造成溶血。同時對于那些內(nèi)眥取血不使用局麻藥的小鼠，毛細管對動物造成的疼痛感較強，動物掙扎現(xiàn)象比較明顯，亦增加了采血難度。另外由于毛細管較硬，易造成小鼠失明、眶周感染等相關(guān)眼部損傷。

王召波等[5]采用自制取血管用于內(nèi)眥取血，取得了較好的效果。該方法是取200 μL的吸頭1支，視具體情況剪去前端長0.3～0.4 cm部分。取直徑約1 mm的毛細玻璃管1支，沿吸頭上端插入并從下端拔出至吸頭與玻璃管套疊部分長0.3～0.5 mm，經(jīng)酒精燈適當燒灼，兩部分可緊密連接。使用小砂輪在適當長度切割，掰斷去除冗長部分毛細管，裸露毛細管長度以2.0～2.5 cm為佳。經(jīng)過實驗分析，其取血效果較佳。我們則直接使用20 μL移液槍進行內(nèi)眥取血，亦取得了較理想的效果。

本文選用C57BL/6J雄性小鼠作為實驗對象，是由于C57BL/6J雄性小鼠性格活潑，易逃脫，抓取、固定較BALB/C、ICR等小鼠更困難，內(nèi)眥取血時有一定的難度，以C57BL/6J雄性小鼠為例介紹移液槍用于內(nèi)眥采血的方法具有一定的代表性和說服力。

由此可見，移液槍直接用于內(nèi)眥取血，方法簡便易行，只要實驗人員掌握內(nèi)眥取血的技術(shù)，不需要訓練，直接應(yīng)用此法即能快速順利完成采血過程。

[1] 陳霆, 李楓棣, 鄧巍, 等. 小鼠內(nèi)眥靜脈叢注射與尾靜脈注射比較 [J]. 中國比較醫(yī)學雜志, 2014, 24(1): 72-73.

[2] 余琛琳, 趙樂, 湯球, 等. 一項小鼠采血新技術(shù)——頜下靜脈叢采血法 [J]. 中國比較醫(yī)學雜志, 2008, 18(12): 53-54.

[3] 崔潔, 朱玲玉, 陳興智, 等. 一種自制的小鼠斷尾采血簡易裝置 [J]. 蚌埠醫(yī)學院學報, 2013, 38(8): 1050-1051, 1055.

[4] 李軼倞, 張娜, 田楓. 一種簡易小鼠尾靜脈注射固定法——籠蓋壓制法 [J]. 中國比較醫(yī)學雜志, 2016, 26(10): 79-81.

[5] 王召波, 董靜. 自制內(nèi)毗采血器用于小鼠采血效果分析 [J]. 齊魯醫(yī)學雜志, 2015, 30(1): 82-83.

Useofapipettorforbloodcollectionfromtheinnercanthusofmice

ZHANG Ying， REN Bo， TIAN Feng*

(Department of Laboratory Animal Science, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China)

ObjectiveTo explore the practical value of a modified method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.MethodsA total of 20 male C56BL/6J mice were divided into two groups, the pipettor group and the capillary group (10 mice in each group). Blood samples were taken 3 times from the inner canthus of the mice with a pipettor or glass capillary, respectively, and the time-consumption and success rate of the two groups were recorded and compared.ResultsThe success rates of both the blood collection methods were 100%. However, in the pipettor group, the blood collection was completed faster than the capillary group with a significant difference (P< 0.05).ConclusionsIt is a relatively simple and safe method for blood collection from the inner canthus of mice using a pipettor.

Mice; Blood collection from the inner canthus; Pipettors

北京高等學校青年英才計劃項目(編號：YETP0057)。

張穎(1994 -)，女，技士，專業(yè)：動物實驗及管理。E-mail: 1146878172@qq.com

田楓(1973 -)，女，博士，副主任技師，研究方向：實驗動物研究與管理方面研究。E-mail: fengtian_38@163.com

R-33

A

1671-7856(2017) 11-0084-03

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.11.017

2017-03-07