李澤 葉玉勤 賀曉生 張志銀 劉志剛 袁興 李華

(1陜西省第四人民醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710043; 2解放軍第163醫(yī)院神經(jīng)外科，湖南 長沙 410003; 3第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710032)

·論著·

髓母細(xì)胞瘤患者血漿Ras相關(guān)區(qū)域家族1A基因甲基化的意義

李澤1*葉玉勤2,3賀曉生3張志銀1劉志剛1袁興1李華1

(1陜西省第四人民醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710043;2解放軍第163醫(yī)院神經(jīng)外科，湖南 長沙 410003;3第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科，陜西 西安 710032)

目的探討髓母細(xì)胞瘤(MB)患者血漿逆轉(zhuǎn)錄病毒相關(guān)序列(RAS)家族1A(RASSF1A)基因啟動子甲基化的臨床意義。方法收集82例MB患者的血漿和腫瘤標(biāo)本，采用甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)方法，檢測血漿和腫瘤組織的RASSF1A啟動子甲基化狀況，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系。同期收集43例幕下良性病變患者的腫瘤組織和血液標(biāo)本以及19例健康體檢者的血漿作為對照。結(jié)果49份MB瘤組織中呈RASSF1A基因甲基化陽性，檢出率為59.76%。40份血漿呈RASSF1A基因啟動子甲基化陽性，檢出率為48.78%。血漿中甲基化頻率與MB組織中甲基化頻率顯著相關(guān)(r=0.868,Plt;0.001)。檢測血漿中RASSF1A基因甲基化的敏感性為97.50%，特異性為76.19%，RASSF1A基因甲基化與MB分子生物學(xué)分型、臨床分期相關(guān)(Plt;0.01)，與患者年齡、性別、腫瘤部位和病理類型無相關(guān)性(Pgt;0.05)。同期收集的幕下良性病變患者的腫瘤組織與血漿中、以及健康體檢者的血漿中均為未檢出該基因甲基化。結(jié)論血漿中RASSF1A基因甲基化頻率不僅與MB組織中的甲基化頻率顯著相關(guān)，還與MB分子生物學(xué)分型、臨床分期具有相關(guān)性。

髓母細(xì)胞瘤; Ras相關(guān)區(qū)域家族1A基因; 甲基化

髓母細(xì)胞瘤(medulloblastoma, MB)屬高度惡性的神經(jīng)外胚層腫瘤，好發(fā)于小腦蚓部近中線部位，常突向第四腦室生長，也可位于小腦半球或橋腦小腦角區(qū)，易經(jīng)腦脊液沿蛛網(wǎng)膜下腔播散或經(jīng)血流到遠(yuǎn)隔部位種植轉(zhuǎn)移。MB約占顱內(nèi)腫瘤的1.5%，占兒童顱內(nèi)腫瘤的25%～30%，發(fā)病率高，極易復(fù)發(fā)[1]。近年來，表觀遺傳學(xué)在MB形成中的作用逐漸被揭示，其中，基因啟動子區(qū)的胞嘧啶磷酸鳥嘌呤(cytosine-phosphate diester-guanine, CpG)島的高甲基化是重要機(jī)制之一[2-4]。 逆轉(zhuǎn)錄病毒相關(guān)序列(retrovirus-associated sequences, RAS)家族1A(RAS-association domain family 1A, RASSF1A)基因作為一種抑癌基因，位于染色體3p21.3，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、凋亡和微管穩(wěn)定的作用[5-6]。新近的研究發(fā)現(xiàn)，RASSF1A基因啟動子甲基化是該基因失活的主要原因，其在神經(jīng)外胚層腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[7-8]。本實(shí)驗(yàn)通過甲基化特異性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(methylation-specific polymerase chain reaction, MSPCR)方法，檢測MB患者血漿與腫瘤組織中的RASSF1A基因啟動子甲基化狀態(tài)，分析它們之間的相關(guān)性，并探討其相關(guān)臨床意義。

材料與方法

一、一般資料

收集第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院神經(jīng)外科2013年6月至2016年6月收治的82例MB患者資料，全部腫瘤經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確認(rèn)(圖1)。本組病例的年齡、性別、腫瘤部位、病理分型、分子生物學(xué)分型和臨床分期見表1。病理分型參考2007年WHO分類標(biāo)準(zhǔn)，分子生物學(xué)分型參考2010年Boston分型共識，臨床分期參考Chang氏分期系統(tǒng)，根據(jù)原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶情況進(jìn)行分期。

本組患者無心血管功能不全、肝腎功能障礙、出血性疾病和免疫系統(tǒng)疾病等其它系統(tǒng)疾病，均具備手術(shù)指征和手術(shù)條件。術(shù)前均未行放、化療，全部行開顱腫瘤切除術(shù)治療，全切59例，次全切16例，部分切除7例。術(shù)后均根據(jù)實(shí)際情況予以放療或化療，除影像學(xué)復(fù)查結(jié)果證實(shí)MB復(fù)發(fā)者，其余患者均在術(shù)后行放、化療，均接受腰椎穿刺，留取腦脊液，行細(xì)胞學(xué)檢查，以明確轉(zhuǎn)移灶分期。

二、標(biāo)本采集

術(shù)前采集晨起空腹靜脈血5.0 mL，置于乙二胺四乙酸二鈉抗凝管，4 ℃條件下800 r/min離心15 min，分離上清，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｐg(shù)中取腫瘤組織，-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩Ｍ谑占?3例幕下良性病變(聽神經(jīng)瘤、腦膜瘤)患者的腫瘤組織和血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，并收集陜西省第四人民醫(yī)院19例健康體檢者的血液標(biāo)本作為對照。

三、標(biāo)本DNA提取

對腫瘤組織，采用酚/氯仿抽提法抽提DNA。充分研磨50 mg腫瘤和50 mg瘤旁組織，加入組織裂解液500 L，置于50 ℃水浴箱裂解1 h，加入蛋白酶K至終濃度100 mg/L，50 ℃條件下水浴消化3 h。酚/氯仿和氯仿/異戊醇分別抽提DNA一次，混合2倍體積的冰乙醇和1/10體積的乙酸鈉沉淀DNA后，加入氨基丁三醇與乙二胺四乙酸二鈉配制的溶解液，分光光度計(jì)測定DNA純度和濃度。對血漿標(biāo)本，采用QIAamp Blood Mini Kit(德國Qiagen公司)抽提DNA，具體步驟按照試劑盒說明操作，提取產(chǎn)物置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

圖1 一例4歲男性髓母細(xì)胞瘤患者的顱腦MRI檢查結(jié)果與病理檢查結(jié)果(HE,×200)
Fig 1 MRI imaging and pathology of a 4-year-old boy with medulloblastoma (HE,×200)
A: Axial T1-weighted MRI showed the medulloblastoma was hypointense signal relative to brain parenchyma; B: Axial T2-weighted MRI showed the signal intensity was heterogeneous within tumor; C: Axial contrast MRI revealed obviously disproportional enhancement of the tumor; D: Sagittal MRI revealed the tumor originated from cerebellar vermis and spread in the fourth ventricle; E: Pathological examination indicated that the tumor classification was desmoplastic/nodular medulloblastoma.

表1 髓母細(xì)胞瘤患者臨床病理特征與RASSF1A基因啟動子甲基化關(guān)系 [n(%)]
Tab 1 The correlation between clinical characteristics and RASSF1A gene promoter methylation in plasma and tumor of patients with medulloblastoma [n(%)]

VariablenPlasmaMUTumorMU Gender Male47(57．3)31(65．0)16(34．0)34(72．4)13(27．6) Female35(42．7)18(51．4)17(48．6)26(74．2)9(25．8) Age ≤3yearsold11(13．4)7(63．6)4(36．4)9(81．8)2(18．2) 3～18yearsold37(45．1)20(54．1)17(45．9)25(67．6)12(32．4) gt;18yearsold34(41．5)21(61．8)13(38．2)19(55．9)15(44．1) Location Cerebellarvermis51(62．2)33(64．7)18(35．3)40(78．4)11(21．6) Cerebellarhemisphere26(31．7)19(73．1)7(26．9)16(61．5)10(38．5) CPA5(6．1)3(60．0)2(40．0)4(80．0)1(20．0) Pathologicaltype Classic37(45．1)24(64．9)13(35．1)28(75．7)9(24．3) D/N25(30．5)16(64．0)9(36．0)17(68．0)8(32．0) MBEN11(13．4)8(72．7)3(27．3)9(81．8)2(18．2) LC/A9(11．0)4(44．4)5(55．6)6(33．3)3(67．7) Moleculartype Wnt31(37．8)16(51．6)15(48．4)17(54．8)14(45．2) SHH16(19．5)7(43．8)9(56．3)11(68．8)5(31．2) TypeC21(25．6)18(85．7)a3(14．3)20(95．2)a1(4．8) TypeD14(17．1)11(78．6)a3(21．4)13(92．9)a1(7．1) Primarytumorstage T121(25．6)9(42．9)12(57．1)11(52．4)10(47．6) T236(43．9)20(55．6)16(44．4)17(47．2)19(52．8) T313(15．8)12(92．3)b1(7．7)12(92．3)b1(7．7) T412(14．6)11(91．7)b1(8．3)10(83．3)b2(16．7) Metastasesstage M043(52．4)23(53．5)20(46．5)24(55．8)19(44．2) M117(20．7)16(94．1)c1(5．9)15(88．2)c2(11．7) M215(18．3)13(86．7)c2(13．3)14(93．3)c1(6．7) M37(8．6)5(71．4)c2(28．6)6(85．7)c1(14．3)

aPlt;0.01,vsWnt or SHH group;bPlt;0.01,vsT1or T2group;cPlt;0.01,vsM0group.

M: methylation; U: unmethylation; CPA: cerebellopontine angle; D/N: desmoplastic /nodular; MBEN: medulloblastoma with extensive nodularity; LC/A: large cell/ anaplastic; SHH: sonic hedgehog.

四、DNA的亞硫酸氫鈉處理

取腫瘤組織DNA 20 L和血漿標(biāo)本DNA 50 L，溶于45 L TE溶液中，加入3 mol/L NaOH至終濃度 3 mol/L，37 ℃條件下變性10 min。再分別加入 10 mmol/L苯二酚30 L和3 mol/L亞硫酸氫鈉520 L (pH=5.2)，55 ℃避光反應(yīng)過夜。采用Wizard DNA Clean-up System(美國Promega公司)純化處理，溶于30 L滅菌去離子水，置于-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

五、MSPCR

RASSF1A基因啟動子區(qū)經(jīng)亞硫酸鈉處理后，可將CpG島中非甲基化的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?，而甲基化的胞嘧啶不發(fā)生轉(zhuǎn)變。根據(jù)甲基化和非甲基化DNA序列之間的這種差異，RASSF1A基因啟動子甲基化和非甲基化特異性引物由大連寶生生物工程有限公司設(shè)計(jì)合成。甲基化引物上游序列為：5-GTCGTTGTGGTCGTTCGG-3，下游序列為：5-GAAACTAAACGCGCTCTCG-3，目的產(chǎn)物為95 bp。非甲基化引物上游序列為：5-GGTTGTATTTGGTTGGAGTG-3，下游序列為：5-CTACAAACCTTTACACACAACA-3，目的產(chǎn)物為102 bp。

MSPCR反應(yīng)體系為25 L，10×RCP緩沖液(166 mmol/L硫酸銨；67 mmol/L氯化鎂；10 mmol/L 2-巰基乙醇；670 mmol/L Tris pH=8.8) 2.5 L，經(jīng)亞硫酸氫鈉修飾的DNA模板2.0 L，引物2.0 L，Hotstar Taq聚合酶(美國Promega 公司)0.1 L，1.25 mmol/L脫氧核糖核苷三磷酸0.2 L，25 mmol/L氯化鎂2.0 L，去離子水18.1 L。充分混勻后置DNA擴(kuò)增儀中擴(kuò)增，步驟如下：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，59 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，共55個循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。3 mol/L乙酸鈉和無水乙醇沉淀擴(kuò)增產(chǎn)物，純化后取10 L上樣，8%聚丙烯酰胺凝膠電泳，紫外凝膠成像系統(tǒng)觀察，照相。采用CpGenome完全甲基化DNA (美國Intergen公司)作為陽性對照。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

六、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用Graphpad 6.01軟件處理數(shù)據(jù)，采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行分析，血漿和腫瘤組織的RASSF1A基因甲基化相關(guān)性采用相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，Plt;0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、RASSF1A基因啟動子甲基化狀態(tài)與MB患者臨床病理特征的關(guān)系

血漿和腫瘤組織的RASSF1A基因啟動子甲基化與本組患者臨床病理特征的關(guān)系詳見表1。RASSF1A基因甲基化與MB患者年齡、性別、腫瘤部位和病理類型無相關(guān)性(Pgt;0.05)，但與MB分子生物學(xué)分型、臨床分期顯著相關(guān)。Type C與Type D型腫瘤RASSF1A基因甲基化頻率高于Wnt型與音猬因子(sonic hedgehog, SHH)型(Plt;0.01)；T3與T4期腫瘤RASSF1A基因甲基化頻率高于T1與T2期(Plt;0.01)；M3、M2和M1期腫瘤RASSF1A基因甲基化頻率顯著高于M0期(Plt;0.01)。

二、血漿與腫瘤組織中RASSF1A基因啟動子甲基化狀態(tài)

本組82例MB患者中，49例腫瘤組織RASSF1A基因啟動子區(qū)CpG島甲基化，檢出率為59.76%。同期收集的幕下良性腫瘤組織中未檢出RASSF1A基因甲基化。兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。40例MB患者血漿RASSF1A基因啟動子區(qū)CpG島甲基化，檢出率為48.78%。43例幕下良性腫瘤患者和19例健康體檢者的血漿未檢出RASSF1A基因啟動子甲基化。兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。MB患者血漿中RASSF1A基因甲基化的敏感性為97.50%，特異性為76.19%。進(jìn)一步相關(guān)性分析提示，血漿中RASSF1A基因甲基化水平與MB組織中甲基化狀態(tài)顯著相關(guān)(r=0.857,Plt;0.001, 表2)。

表2 血漿與腫瘤組織中RASS1A基因啟動子甲基化的相關(guān)性 [n(%)]
Tab 2 The correlation of RASSF1A gene promoter methylation between plasma and tumor tissues [n(%)]

PlasmaTumorMUTotal M39140(48．8) U103242(51．2) Total49(59．7)a33(40．3)82

aPlt;0.01,vsthe methylation of plasma.

Note: M: methylation; U: unmethylation.

討 論

目前，MB的臨床主要治療措施是手術(shù)聯(lián)合放化療，這種綜合治療方式在一定程度上提高了MB患者的生存率，但因MB具有惡性程度高、復(fù)發(fā)周期短和轉(zhuǎn)移范圍廣等特點(diǎn)，其臨床療效和預(yù)后仍不能令人滿意。因此，從腫瘤三級預(yù)防的角度，尋求有效易行的檢測手段，實(shí)現(xiàn)對腫瘤發(fā)生、發(fā)展的早期監(jiān)測，對改善MB患者的預(yù)后具有重要意義。

表觀遺傳學(xué)通過DNA化學(xué)修飾，不改變堿基對序列，實(shí)現(xiàn)對遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的調(diào)控。 DNA甲基化修飾作為基因組表觀遺傳的主要調(diào)控方式，對生物個體發(fā)育、基因組印跡和染色體穩(wěn)定性具有重要調(diào)控作用[9]。越來越多的研究表明，腫瘤的發(fā)生與癌基因激活和抑癌基因失活密切相關(guān)，DNA甲基化是抑癌基因失活的主要機(jī)制之一，抑癌基因啟動子區(qū)CpG島的異常高甲基化在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色[3-4,10]。

RASSF1A是Ras凋亡家族成員，也稱為蛋白激酶C保守區(qū)1，其基因cDNA全長1873 bp，包含2個啟動子和6個外顯子，啟動子區(qū)存在16個CpG位點(diǎn)。研究表明，RASSF1A基因作為一種抑癌基因，在多種腫瘤中存在廣泛的表達(dá)缺失和其啟動子區(qū)域的異常高甲基化，提示RASSF1A基因啟動子CpG島甲基化可能是其失活的主要機(jī)制，這一過程在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中可能具有重要作用[6,8,11-12]。Misawa等[6]對日本68例神經(jīng)母細(xì)胞瘤中甲基化RASSF1A片段進(jìn)行定量分析，發(fā)現(xiàn)64例(94%)患者腫瘤組織中該基因啟動子甲基化陽性，進(jìn)一步生存分析提示，RASSF1A基因甲基化是神經(jīng)母細(xì)胞瘤預(yù)后的獨(dú)立影響因素。Inda等[8]對西班牙21例神經(jīng)外胚層腫瘤標(biāo)本RASSF1A基因甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)19例(91%)標(biāo)本均有該基因啟動子區(qū)CpG島甲基化。國內(nèi)學(xué)者常青等[12]對25例髓母細(xì)胞瘤標(biāo)本進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)全部25例標(biāo)本均有RASSFIA基因的甲基化；相反，在全部正常腦組織(5例大腦，2例小腦)和正常血漿中均未檢測到該基因甲基化。上述研究表明，RASSF1A基因啟動子甲基化是神經(jīng)外胚層腫瘤的重要表觀遺傳學(xué)改變。然而，MB患者血漿中是否有腫瘤來源的異常甲基化RASSFIA基因，其與MB的早期發(fā)生、發(fā)展有無潛在關(guān)聯(lián)，目前未見相關(guān)報道。

研究表明，腫瘤細(xì)胞有絲分裂旺盛，腫瘤特異性DNA表達(dá)增加和細(xì)胞大量增殖后，局部微環(huán)境缺血缺氧可引起腫瘤細(xì)胞大量壞死或凋亡[13]。這些細(xì)胞破裂后可釋放DNA進(jìn)入血液循環(huán)，成為血漿或血漿中的腫瘤循環(huán)DNA，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)異常甲基化的DNA在外循環(huán)體液中也能被檢測到[10,14]。因此，利用DNA甲基化特異性分析技術(shù)，檢測MB細(xì)胞釋放到體液中RASSF1A基因甲基化狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)對腫瘤發(fā)生發(fā)展的預(yù)警或生長復(fù)發(fā)的監(jiān)測，對MB早期診斷、療效評估和預(yù)后判斷具有重要臨床意義。

本研究采用MSPCR檢測82例MB患者血漿及腫瘤組織中DNA甲基化狀態(tài)，腫瘤標(biāo)本中RASSF1A基因甲基化率為59.76%，對應(yīng)的血液標(biāo)本中RASSF1A基因甲基化為48.78%。在甲基化呈陰性的其它類別腫瘤患者和健康體檢者中，外周血漿均未檢測到RASSF1A基因甲基化陽性。采用相關(guān)分析進(jìn)行檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)血漿中RASSF1A基因甲基化水平與MB組織中甲基化狀態(tài)顯著相關(guān)，提示血漿中異常甲基化的RASSF1A基因可能來自于MB腫瘤組織。本研究中，血漿RASSF1A基因啟動子甲基化的敏感性為97.50%，特異性為76.19%，這可能與樣本數(shù)量和人群來源有關(guān)。雖然MSPCR檢測特定基因的甲基化狀態(tài)具有良好的敏感性和特異性，但由于腫瘤患者的血漿中游離甲基化DNA含量較少，易出現(xiàn)檢測偏倚。因此，對MB患者血漿RASSF1A基因甲基化狀態(tài)的進(jìn)一步評估和認(rèn)識，仍需更大規(guī)模的樣本量和深入研究。

值得注意的是，血漿和腫瘤組織中RASSF1A基因甲基化狀況與患者年齡、性別、腫瘤部位和病理類型均無關(guān)，但與MB分子生物學(xué)分型、臨床分期顯著相關(guān)。分子分型中，危險度較高的類型甲基化陽性率顯著高于低危的類型。臨床分期中，晚期MB甲基化陽性率顯著高于早期病變，發(fā)生神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移的MB甲基化陽性率顯著高于無轉(zhuǎn)移病變。這些結(jié)果一方面提示，MB患者的RASSF1A基因甲基化可在一定程度上反映患者的預(yù)后狀況；另一方面也表明，在腫瘤分子標(biāo)記物的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用中，近年來新提出的MB分子生物學(xué)分型與傳統(tǒng)的組織病理學(xué)分型相比，可以更好地顯示腫瘤的危險度和生物學(xué)行為。

綜上所述，本研究通過對MB患者血漿和腫瘤組織中RASSF1A基因甲基化狀態(tài)檢測，發(fā)現(xiàn)血漿RASSF1A基因甲基化與MB組織中該基因的甲基化具有相關(guān)性，并且與MB的分子生物學(xué)亞型和臨床分期顯著相關(guān)，提示有可能通過檢測血漿RASSF1A基因甲基化來監(jiān)測MB的發(fā)生發(fā)展，為MB的早期篩查或診斷提供新的研究思路與方向。

1MASSIMINO M, BIASSONI V, GANDOLA L, et al. Childhood medulloblastoma [J]. Crit Rev Oncol Hematol, 2016, 105: 35-51.

2CANTONE I, FISHER A G. Epigenetic programming and reprogramming during development [J]. Nat Struct Mol Biol, 2013, 20(3): 282-289.

3HOVESTADT V, JONES D T, PICELLI S, et al. Decoding the regulatory landscape of medulloblastoma using DNA methylation sequencing [J]. Nature, 2014, 510(7506): 537-541.

4BATORA N V, STURM D, JONES D T, et al. Transitioning from genotypes to epigenotypes: why the time has come for medulloblastoma epigenomics [J]. Neuroscience, 2014, 264(15): 171-185.

5HARADA K, TOYOOKA S, MAITRA A, et al. Aberrant promoter methylation and silencing of the RASSF1A gene in pediatric tumors and cell lines [J]. Oncogene, 2002, 21(27): 4345-4349.

6MISAWA A, TANAKA S, YAGYU S, et al. RASSF1A hypermethylation in pretreatment plasma DNA of neuroblastoma patients: a prognostic marker [J]. Br J Cancer, 2009, 100(2): 399-404.

7HARUTA M, KAMIJO T, NAKAGAWARA A, et al. RASSF1A methylation may have two biological roles in neuroblastoma tumorigenesis depending on the ploidy status and age of patients [J]. Cancer Lett, 2014, 348(1-2): 167-176.

8INDA M M, CASTRESANA J S. RASSF1A promoter is highly methylated in primitive neuroectodermal tumors of the central nervous system [J]. Neuropathology, 2007, 27(4): 341-346.

9SENNER C E. The role of DNA methylation in mammalian development [J]. Reprod Biomed Online, 2011, 22(6): 529-535.

10WARTON K, MAHON K L, SAMIMI G. Methylated circulating tumor DNA in blood: power in cancer prognosis and response [J]. Endocr Relat Cancer, 2016, 23(3): R157-R171.

11DUMITRESCU R G. Epigenetic markers of early tumor development [J]. Methods Mol Biol, 2012, 863(2): 3-14.

12常青, 吳浩強(qiáng). 髓母細(xì)胞瘤與幕上原始神經(jīng)外胚葉腫瘤中RASSF1A基因的甲基化差異 [J]. 中華病理學(xué)雜志, 2007, 36(1): 24-28.

13SU Z, YANG Z, XU Y, et al. Apoptosis, autophagy, necroptosis, and cancer metastasis [J]. Mol Cancer, 2015,14: 48.

14WIDSCHWENDTER M, MENON U. Circulating methylated DNA: a new generation of tumor markers [J]. Clin Cancer Res, 2006, 12(24): 7205-7208.

SignificanceofRAS-associationdomainfamily1Agenemethylationinplasmaofpatientswithmedulloblastoma

LIZe1,YEYuqin2,3,HEXiaosheng3,ZHANGZhiyin1,LIUZhigang1,YUANXing1,LIHua1

1DepartmentofNeurosurgery,TheFourthPeople'sHospitalofShaanxiProvince,Xi'an710043;2DepartmentofNeurosurgery,The163rdHospitalofPLA,Changsha410003;3DepartmentofNeurosurgery,XijingHospital,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi'an710032, China

ObjectiveThe correlation between RAS-association domain family 1A (RASSF1A) gene methylation in plasma and clinicopathological features of medulloblastoma was invesitigated.MethodsPlasma and tumor tissue of 82 medulloblastoma patients and 43 patients with benign infratentorial tumor were included in the study, and the plasma of 19 healthy subjects was served as normal controls. The methylation status of RASSF1A gene in plasma and tumor tissue was detected by methylation-specific polymerase chain reaction (MSPCR).ResultsRASSF1A gene methylation rate was 59.76% in medulloblastoma tissue and 48.78% in paired plasma. The gene methylation in plasma was significantly correlated with that in medulloblastoma tissue(r=0.868,Plt;0.001). The sensitivity and specificity of RASSF1A gene methylation in plasma were 97.50% and 76.19%, respectively. And the methylation of RASSF1A gene was correlated with the tumor molecular classification and tumor clinical stage (Plt;0.05), but had no correlation to gender, age, tumor location and tumor pathological type of patients (Pgt;0.05). In addition, no RASSF1A gene methylation was found in plasma and tumor from benign infratentorial tumor patients and healthy subjects.ConclusionThe methylation rate of RASSF1A gene in plasma is significantly correlated with that in medulloblastoma tissue. Additionally, the gene methylation is also correlated with the molecular classification and clinical stage of medulloblastoma.

Medulloblastoma; RAS-association domain family 1A; Methylation

1671-2897(2017)16-128-05

R 739.41

A

陜西省衛(wèi)生廳科學(xué)研究基金資助項(xiàng)目(D47)

李澤，副主任醫(yī)師，E-mail: lizewyl@163.com

*通訊作者： 李澤，副主任醫(yī)師，E-mail: lizewyl@163.com

2016-08-29；

2016-11-20)