劉志偉，楊永平，李東，談宇晴，方向東，阮征

（湖北省武漢市動物疫病預(yù)防控制中心，武漢 430016）

奶牛結(jié)核病的防控與凈化

劉志偉，楊永平，李東，談宇晴，方向東，阮征

（湖北省武漢市動物疫病預(yù)防控制中心，武漢 430016）

隨著生活水平的提高，牛奶及其制品已成為人們?nèi)粘Ｉ畈豢苫蛉钡氖澄?。然而，奶牛結(jié)核病不但影響牛奶及其制品的品質(zhì)，甚至危脅人類健康。隨著人們食品安全意識的進一步提高，奶牛養(yǎng)殖企業(yè)及畜牧獸醫(yī)從業(yè)者的奶牛結(jié)核病的防控意識也應(yīng)進一步強化，加快奶牛結(jié)核病的凈化工作，確保牛奶及其制品的品質(zhì)和安全。

奶牛；結(jié)核?。环揽?；凈化

奶牛結(jié)核病是由牛分枝桿菌引起的一種人畜共患的慢性消耗性傳染病，是世界衛(wèi)生組織明文規(guī)定必須通報的疫病，被我國列為二類動物傳染病。奶牛結(jié)核病不但嚴重影響畜牧業(yè)的發(fā)展，而且還威脅食品安全及人類健康。因此，必須對該病進行有效地防控和凈化，讓消費者獲得綠色合格的產(chǎn)品，保證食品安全及消費者健康。本文就奶牛結(jié)核病的病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床癥狀、診斷及確診、防控及凈化等方面進行闡述，以期對奶業(yè)的健康發(fā)展有所幫助。

1 流行現(xiàn)狀

目前，世界上大多數(shù)國家均存在牛結(jié)核病的流行，只有少數(shù)發(fā)達國家凈化了牛結(jié)核病。我國還沒有對該病凈化，流行率約為15%。結(jié)核病能夠感染多種哺乳動物和禽類，牛是最易感動物，尤其是奶牛。牛結(jié)核病和人結(jié)核病相互之間可以交叉感染[1,2]。

患病奶牛是該病的主要傳染源，奶牛是該病的宿主之一，白尾鹿、羚羊、大象、犀牛等均是該病的宿主[3,4]。該病一年四季均可發(fā)生，沒有明顯的季節(jié)性。該病主要通過消化道和呼吸道進行傳播，比如通過鼻液、痰液和乳汁排出體外，導(dǎo)致環(huán)境中帶菌，而環(huán)境中的菌通過空氣、飼料、飲水等感染其他奶牛。飲用未經(jīng)巴氏消毒或煮沸的患有結(jié)核病奶牛的牛奶及其制品，均可能造成飲用者感染?？諝鈧鞑ナ窃摬∽钪饕膫鞑シ绞?，空氣氣溶膠污染在該類傳播中扮演重要角色。

2 臨床癥狀及病理變化

奶牛結(jié)核病潛伏期長短不一，短的只有10～45d，長的可達數(shù)月甚至數(shù)年。該病通常呈慢性經(jīng)過，急性感染較為少見。感染早期，臨床上沒有明顯癥狀，隨著病情的發(fā)展，到感染晚期，臨床癥狀較為明顯。動物感染后，器官和組織出現(xiàn)結(jié)核結(jié)節(jié)是該病的典型癥狀。這些結(jié)節(jié)通常為黃色，并出現(xiàn)干酪樣壞死、鈣化等情況，偶爾會出現(xiàn)膿性分泌物。干酪樣壞死灶大小不一，形似珍珠，切開后可以看到黃色豆腐渣樣物質(zhì)，切開時有砂礫感。有些壞死灶會出現(xiàn)組織溶解和軟化，切開后會流出膿性分泌物而形成空洞狀。組織形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，結(jié)核結(jié)節(jié)是一種增生性肉芽腫，可以發(fā)生在肺臟、咽喉、腸系膜淋巴結(jié)、肝臟、脾臟等組織器官，其中肺臟結(jié)核最為常見，其次為乳房結(jié)核、腸結(jié)核等[5]。

臨床癥狀和該菌侵害組織器官相對應(yīng)。當臨床上出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽和消瘦時，說明該菌侵害了呼吸系統(tǒng)，特別是肺臟；當臨床上出現(xiàn)乳房結(jié)節(jié)、泌乳量減少或停止泌乳、乳腺萎縮等情況時，說明該菌侵害了乳房組織；當臨床表現(xiàn)出便秘、腹瀉、消化吸收功能紊亂，患畜逐漸消瘦時，說明該菌侵害了腸道。患病動物不斷向外界環(huán)境中排出結(jié)核菌，污染環(huán)境、飼料、水源等，引起其他個體或群體感染。

3 診斷與確診

結(jié)核病的診斷與確診需要結(jié)合臨床癥狀、病理剖檢、病理組織學(xué)診斷、細菌學(xué)診斷、免疫學(xué)診斷、分子生物學(xué)診斷等進行綜合分析和判斷。臨床上奶牛結(jié)核病診斷通常采用牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)。該方法是國家規(guī)定的法定方法和經(jīng)典方法，而細菌培養(yǎng)分離鑒定被稱為奶牛結(jié)核病確診的金標準。目前，分子生物學(xué)診斷方法在奶牛結(jié)核病的診斷中扮演著重要角色。

3．1 病理組織學(xué)診斷

奶牛結(jié)核病的病理組織學(xué)診斷主要是觀察三種基本的病理變化：增殖、滲出、變質(zhì)。

增殖性變化主要體現(xiàn)在結(jié)核結(jié)節(jié)上，單個的結(jié)核結(jié)節(jié)很小，只有在顯微鏡下才能清楚地看到，肉眼很難看到[6]。結(jié)核結(jié)節(jié)是動物體內(nèi)的巨噬細胞吞噬和殺滅結(jié)核菌過程中形成的局部肉芽組織，可以防止結(jié)核菌的擴散，在該結(jié)節(jié)中沒有結(jié)核菌的存在。

滲出性變化主要體現(xiàn)在感染早期或急性感染，可能導(dǎo)致肺部、漿膜和腦膜等出現(xiàn)滲出性變化。其機理主要是血管通透性的增加導(dǎo)致炎性細胞和蛋白質(zhì)滲出血管外，表現(xiàn)為組織充血。一般情況下，在滲出性病變組織中可以找到結(jié)核菌。當機體的抵抗力較強時，滲出性病變將會向增殖性病變轉(zhuǎn)化，以防止病原菌的進一步擴散，此時病情可以得到有效控制；當機體抵抗力較差時，滲出性病變將會導(dǎo)致組織或器官的實質(zhì)性病變，病情會進一步惡化，難以控制。

變質(zhì)性病變主要是器官或組織的干酪樣壞死，出現(xiàn)組織或器官的干酪樣壞死時，該組織或器官無法行使其正常功能。在干酪樣壞死組織或器官中，結(jié)核桿菌無法生存，在該壞死組織或器官中很難找到結(jié)核桿菌。隨著病情的發(fā)展，如果沒有得到有效控制，干酪樣壞死組織將會液化，形成空洞，在空洞中將會存在大量的結(jié)核桿菌，導(dǎo)致結(jié)核桿菌的進一步擴散。

3．2 細菌學(xué)診斷

細菌學(xué)診斷是一種相對較為簡單的實驗室診斷方法，可通過采集臨床病料，如病變組織、患病動物的糞尿、乳等制作抹片、抗酸染色、鏡檢，同時也可以進行病原菌分離培養(yǎng)和動物接種試驗來進行診斷。由于奶牛結(jié)核病的臨床表現(xiàn)不明顯，加之結(jié)核菌培養(yǎng)時間長、檢出率低、敏感性差等缺點[7]，目前很少用該方法對結(jié)核病進行診斷和確診。

3．3 免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)診斷包括奶牛結(jié)核菌素皮膚試驗、奶牛結(jié)核菌素比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)、奶牛γ-干擾素體外釋放檢測法、奶牛結(jié)合抗體檢測法。其中奶牛結(jié)合抗體檢測法又包括ELISA檢測法和膠體金試紙條檢測法。以上檢測方法各有優(yōu)缺點，目前常用的免疫學(xué)檢測方法主要是奶牛結(jié)核菌素皮膚試驗、奶牛γ-干擾素體外釋放檢測法和ELISA檢測法[8]。其中奶牛結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)是世界動物衛(wèi)生組織目前唯一推薦的牛結(jié)核病診斷方法。

3．4 分子生物學(xué)診斷

分子生物學(xué)診斷采取的方法主要有PCR技術(shù)、DNA圖譜和DNA探針技術(shù)等。分子生物學(xué)技術(shù)具有快速、簡便、高效的特點，可以對病原進行種屬鑒定[9]。目前，PCR技術(shù)已非常成熟，可以快速地對病原進行診斷，從而判斷動物是否感染該病，以及對動物體感染該病的嚴重程度做出預(yù)估，從而采取相應(yīng)措施進行防控。

筆者通過多次試驗發(fā)現(xiàn)，需要綜合結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測法、間接ELISA檢測法、γ-干擾素體外釋放檢測法等不同方法，同時結(jié)合臨床癥狀才能較為準確地診斷奶牛結(jié)核病。

4 防控及凈化

4．1 防控措施

對奶牛結(jié)核病的防控必須堅持預(yù)防為主的方針，認真貫徹中華人民共和國動物防疫法，依據(jù)法律法規(guī)進行疫病防治。需采取監(jiān)測、檢疫、撲殺、消毒相結(jié)合的綜合性防治措施，有效控制奶牛結(jié)核病的發(fā)生，逐步凈化奶牛結(jié)核病[10,11]。同時，需加強生產(chǎn)管理、改善衛(wèi)生條件、落實凈化措施，最終建立奶牛結(jié)核病陰性群。

4.1.1 依據(jù)法律法規(guī)，加大政府支持和經(jīng)費投入

要加大對結(jié)核病防控工作的支持力度和經(jīng)費投入，加強對奶牛結(jié)核病防控的重視程度，嚴格執(zhí)行牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范，有效落實奶牛結(jié)核病陽性牛的撲殺補償機制和監(jiān)測，嚴厲打擊奶牛結(jié)核病陽性牛及其產(chǎn)品的買賣活動。一經(jīng)發(fā)現(xiàn)陽性牛及其產(chǎn)品，應(yīng)就近做無害化處理，追查陽性牛及其產(chǎn)品來源地，并采取相應(yīng)措施，防止疫情蔓延。對于私自從國外或異地引進奶牛而沒有報檢和隔離的，要加大處罰力度，并強制對引進奶牛進行檢疫和隔離，進行小范圍控制，嚴防異常情況的發(fā)生。

4.1.2 生產(chǎn)管理專業(yè)化，技能操作規(guī)范化

牛場應(yīng)分隔成不同區(qū)域，如生產(chǎn)區(qū)、生活區(qū)、飼料存放區(qū)、糞污處理區(qū)、隔離區(qū)等，各區(qū)之間都要有相應(yīng)的隔離帶和緩沖帶。要加強奶牛結(jié)核病防控工作的宣傳和教育，提高人們對奶牛結(jié)核病危害的認識，對從事奶牛養(yǎng)殖業(yè)的從業(yè)人員要進行專業(yè)化的培訓(xùn)，提高奶牛從業(yè)人員的防疫觀念；要規(guī)范技能操作，制定消毒計劃并嚴格執(zhí)行[12]；要加強奶牛日常生產(chǎn)管理工作，做好細節(jié)管理，如做好牛舍內(nèi)的保溫與通風(fēng)管理，加強滅鼠、滅蚊、滅蠅工作，嚴禁奶牛場內(nèi)有其他家畜家禽、犬和貓等動物等。做好奶牛養(yǎng)殖業(yè)從業(yè)人員的健康體檢工作，嚴格控制結(jié)核病在人與奶牛之間的傳播[13]。同時根據(jù)場內(nèi)實際情況及當?shù)匾卟×餍星闆r，制定科學(xué)合理的免疫程序和驅(qū)蟲方案，并嚴格執(zhí)行。

4.1.3 建立公共衛(wèi)生體系，杜絕結(jié)核病在人與動物之間的傳播

結(jié)核病是人畜共患傳染病，在人與動物之間、動物與動物之間都具有較強的傳染性，因此，要加強公共衛(wèi)生體系建設(shè)，加強獸醫(yī)部門和醫(yī)療部門的合作力度，并提高其合作的深度，最大限度地控制不同種屬之間及動物與人之間的傳播。

4.1.4 加大新技術(shù)的研究，推進新技術(shù)的應(yīng)用

奶牛結(jié)核病的防控與凈化是一個長期的過程，在這一過程中，需要加大科技研發(fā)力度，不斷創(chuàng)新，探索新技術(shù)、新方法在奶牛結(jié)核病中的應(yīng)用。目前，一些發(fā)達國家已經(jīng)研發(fā)出牛結(jié)核病抗體快速檢測試紙條，這使得獸醫(yī)從業(yè)者能更加快捷、高效地對該病做出診斷，及時做出判斷，采取措施，控制該病，將危害降低到最小。

4．2 凈化方案

奶牛結(jié)核病的凈化是一個循序漸進的過程，這一過程包括不同的階段，如普查階段、撲殺階段、監(jiān)測階段、撲滅階段等[14]。同時，奶牛結(jié)核病的凈化是一個由點到線、由線到面的過程，也就是說該病的凈化需要各地奶牛場和當?shù)卣献?，由局部控制和凈化到全國控制和凈化。當某一區(qū)域凈化該病之后，應(yīng)由官方頒發(fā)無規(guī)定動物疫病證書，同時嚴格控制異地奶牛及其產(chǎn)品的進入，防止再次感染。

表1 全國牛結(jié)核病4區(qū)劃分標準

成年奶牛群每年做兩次監(jiān)測，連續(xù)兩次均為陰性，即為凈化群。初生犢牛在20日齡和100～120日齡做兩次監(jiān)測，兩次均為陰性，即為凈化群。在監(jiān)測過程中，一旦確認是陽性，應(yīng)立即進行撲殺，并按照GB16548-2006《病害動物及其產(chǎn)品安全無害化處理規(guī)程》進行無害化處理。對于初次監(jiān)測為可疑，而復(fù)檢也為可疑的，需再次進行復(fù)檢，仍為可疑的，視為陽性，立即撲殺，并按照GB16548—2006《病害動物及其產(chǎn)品安全無害化處理規(guī)程》進行無害化處理。對于初次監(jiān)測為可疑，而復(fù)檢為陽性的，視為陽性，立即撲殺，并按照GB16548—2006《病害動物及其產(chǎn)品安全無害化處理規(guī)程》進行無害化處理。對于初次監(jiān)測為可疑，而復(fù)檢為陰性的，需要間隔一個月再次進行復(fù)檢，仍為陰性的，視為陰性牛，確認為陰性牛時才能混群。全國牛結(jié)核病4區(qū)劃分標準如表1所示。

通過監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)陽性牛時，應(yīng)加強該牛群的監(jiān)測力度。對陽性牛進行撲殺和無害化處理，對陽性牛生活區(qū)和撲殺區(qū)的場地及用具和物品進行嚴格消毒。對欄舍可以采取熏蒸消毒或燒堿溶液等消毒方式進行消毒，對飼料或墊料可以采取深埋發(fā)酵或焚燒的方式進行處理，對于糞尿可以采取堆積發(fā)酵或其他有效的消毒方式進行消毒[15]。

結(jié)合當前實際情況，在奶牛結(jié)核病的凈化過程中，加大牛結(jié)核病疫苗的研究對于該病的凈化具有重要現(xiàn)實意義。監(jiān)測-撲殺是一種快捷的疾病凈化模式，但在實際操作過程中可能存在較大難度，而疫苗可能在一定程度上更有利于該病的凈化。同時，很多種動物均可感染結(jié)核病，消滅病原等同于把所有感染結(jié)核的動物全部撲殺，這在實際操作中無法做到，并且結(jié)核病是人畜共患病。因此，非常有必要加大牛結(jié)核病疫苗的研究和應(yīng)用。

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S858.23

A

1004-4264（2017）11-0029-04

10.19305/j.cnki.11-3009/s.2017.11.008

2017-01-10

劉志偉，男，碩士，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控和公共衛(wèi)生工作。