包 驥，李 麗，陳 菲，鄧 楊，步 宏

邁新·技術(shù)交流

一種用于病理切片封固劑快速干燥的方法

包 驥，李 麗，陳 菲，鄧 楊，步 宏

病理切片；封固劑；快速干燥；真空加熱；紫外線

封固也叫封片，是制做常規(guī)組織切片標(biāo)準(zhǔn)步驟的最后一道工序[1]，封片的過程是將染色好的切片用封固劑封固起來，即把蓋玻片與載玻片用封固劑粘合在一起。切片完全干燥的衡量標(biāo)準(zhǔn)是在用兩手指較用力搓時(shí)，蓋玻片與載玻片間不應(yīng)有滑動(dòng)。此后可將切片豎立，前后疊放，相互不會(huì)粘連。目前國(guó)內(nèi)病理實(shí)驗(yàn)室多采用常溫自然干燥法，需將切片單層平放7～14天，封固劑才能完全干透，這種做法比較費(fèi)時(shí)，而且會(huì)占用許多空間。在其完全干透之前，該病理切片既不利于用來進(jìn)行全片數(shù)字掃描(容易滑動(dòng)或卡片)，也不利于存放(容易和其他切片相互粘連)。因此，使用新的方法和設(shè)備縮短病理切片制作過程中封固劑的干燥時(shí)間，對(duì)于病理切片的制作來說有著重要的意義。而在目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)文獻(xiàn)中，有關(guān)封片步驟的研究報(bào)道極少，更極少有報(bào)道研究加快封固劑干燥的方法或設(shè)備[2-4]。本文現(xiàn)介紹一種簡(jiǎn)單快速的干燥方法，其設(shè)備是本團(tuán)隊(duì)自主研發(fā)、供病理切片干燥專用。

1 材料與方法

1.1材料HE染色切片；中性快干膠封固劑(江源中性快干膠，100 mL，批號(hào)14102202)；紫外真空加熱干燥箱(病理切片快干箱；主要部件包括箱體、顯示屏、切片載板、抽氣管、紫外光燈(圖1)；型號(hào)PSFD-01；接入電源220～240 V；冷臺(tái)(賽默飛公司；Histostar Cold Module；220～240 V～50/60 Hz，230 VA)；烘箱(賽默飛公司；Heratherm OMS100；230 V，13.3 A，3.06 kW)。

1.2方法(1)封固：將已經(jīng)染色完成的病理切片用中性快干膠封固劑封片。(2)干燥：將剛封固好的病理切片放入紫外真空加熱干燥箱中進(jìn)行真空加熱干燥+人工紫外光照射25 min(50 ℃，氣壓500 Pa，人工紫外光燈功率36 W)。(3)冷卻：將該切片置于冷臺(tái)上進(jìn)行冷卻5 min。(4)回溫：將該切片放置常溫下干燥30 min。對(duì)照組分別使用常溫自然干燥法或烘箱加熱(50 ℃)干燥法。

圖1病理切片紫外真空加熱干燥箱結(jié)構(gòu)圖：A.真空干燥區(qū)域(病理切片干燥的區(qū)域，內(nèi)置氣壓感應(yīng)計(jì)與溫度計(jì))；B.加熱區(qū)域(封閉的水加熱區(qū)域，內(nèi)置電熱絲)；C.顯示屏(顯示和設(shè)置箱內(nèi)的溫度、氣壓以及干燥時(shí)間)；D.切片載板(裝載病理切片)；E.抽氣管(與真空泵相連)；F.紫外光燈

2 結(jié)果

經(jīng)上述步驟處理的切片，封固劑在1 h內(nèi)完全干透(圖2)，之后可用于全片數(shù)字化切片掃描。此后也可將切片豎立，前后疊放，相互不會(huì)粘連，長(zhǎng)期保存，顏色亦不受影響。便于儲(chǔ)存、提高效率、降低成本、改善環(huán)境。對(duì)照組切片封固劑均在7天后完全干透。

ABCD

圖2使用烘箱加熱干燥(50 ℃)和本組實(shí)驗(yàn)中的紫外真空加熱干燥箱干燥1 h后的結(jié)果對(duì)比：A.使用烘箱加熱干燥(50 ℃)的切片；B.用手指推蓋玻片后，蓋玻片明顯傾斜；C.使用紫外真空加熱干燥箱干燥的切片；D.用手指推蓋玻片后，蓋玻片不能被推動(dòng)

3 討論

封固劑干燥的過程主要是溶劑的蒸發(fā)以及膠體的凝固，本實(shí)驗(yàn)?zāi)軌驅(qū)崿F(xiàn)快速干燥主要有以下幾方面的原因：一方面，真空+加熱能夠使得膠體內(nèi)的水分受熱后迅速向周圍的準(zhǔn)真空環(huán)境滲透蒸發(fā)；另一方面，由于紫外光是一種電磁波，在其穿透溶劑時(shí)會(huì)帶動(dòng)分子震動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)，從而產(chǎn)生熱量，加速水分的蒸發(fā)，由于是直接作用到分子級(jí)內(nèi)部，所以該方法比單純的加熱干燥效果更好、更省時(shí)間。而封固劑凝固本是一個(gè)放熱的過程，膠體水分基本蒸發(fā)后，放到冷臺(tái)上冷卻，能夠加速凝固過程。

本組實(shí)驗(yàn)使用3種方法進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)：(1)傳統(tǒng)干燥法：讓病理切片在常溫下自然干燥，使用這種方法中性快干膠需要7天時(shí)間才能完全干透。(2)用烘箱加熱(50 ℃)法：然而實(shí)驗(yàn)表明單純的加熱不能有效縮短封固劑干燥時(shí)間，使用該方法讓中性快干膠完全干透仍需要約7天時(shí)間。(3)本組新方法：中性快干膠干燥花費(fèi)的時(shí)間在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度。注意事項(xiàng)：紫外真空加熱干燥箱溫度過低<45 ℃時(shí)，干燥時(shí)間會(huì)大為延長(zhǎng)；溫度>55 ℃時(shí)，中性快干膠內(nèi)易出現(xiàn)小泡；溫度如再增高>75 ℃，中性快干膠黏性反而降低，甚至冒出煙霧，切片會(huì)損毀。而加熱使用中真空度如果過高，氣壓<500 Pa，中性快干膠內(nèi)易出現(xiàn)小的氣泡；而加熱使用中真空度如果過低，氣壓>10 000 Pa，干燥時(shí)間明顯延長(zhǎng)，超過1 h，中性快干膠易出現(xiàn)收縮，致蓋玻片移位。

而使用上述方法的條件，在保證切片質(zhì)量的前提下，從一開始的真空加熱干燥一直到最后的自然干燥，中性快干膠干燥總花費(fèi)時(shí)間控制在1 h左右，大大地加快了切片干燥的速度，達(dá)到了預(yù)期目的。使病理切片可以盡快的用于全片數(shù)字化切片掃描，也更便于儲(chǔ)存、提高了效率、降低了人工成本及改善室內(nèi)環(huán)境。

[1] 付先利, 吳建農(nóng). 一種解決切片干燥的方法[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2013,29(7):807.

[2] 陸敏華, 錢夢(mèng)曄, 印永祥, 張煒明. 浸染式全自動(dòng)HE染色封片一體機(jī)的使用和維護(hù)保養(yǎng)體會(huì)[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(5):592-593.

[3] 朱育連, 張麗芳, 鄭巧靈, 等. Leica全自動(dòng)染色封片一體化工作站在病理常規(guī)制片中的應(yīng)用體會(huì)[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2014,30(11):1324-1325.

[4] 朱小蘭, 駱新蘭, 武鴻美, 等. Symphony全自動(dòng)染色封片工作站在常規(guī)病理中的應(yīng)用[J]. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2015,31(4):473-474.

R 361+.2

B

1001-7399(2017)10-1165-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.10.029

時(shí)間：2017-10-23 13:30 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20171023.1330.029.html

接受日期：2017-06-19

四川省衛(wèi)生計(jì)生委科研課題(16PJ336)

四川大學(xué)華西醫(yī)院病理研究室，成都 610041

包 驥，男，副研究員。E-mail: baoji@scu.edu.cn

步 宏，男，博士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，教授