唐鳳娟，許三鵬，王國平,2，況 東

Wnt5a和Wnt11在肺癌中的表達及意義

唐鳳娟1，許三鵬1，王國平1,2，況 東1

目的探討Wnt5a和Wnt11在肺癌組織中的表達及與肺癌類型的關系，并評估兩者表達與臨床病理特征的關系。方法采用免疫組化EnVision法檢測120例肺癌和20例正常肺組織中Wnt5a和Wnt11蛋白表達，并分析兩者表達的相關性及與臨床病理特征的關系。結果84例非小細胞肺癌中，Wnt5a陽性率為36%，Wnt11陽性率為38%。36例小細胞肺癌中Wnt5a和Wnt11陽性率均低，分別為8.3%和0。兩者在非小細胞肺癌中的表達顯著高于小細胞癌。腺癌中Wnt11陽性率較高，為56%，Wnt5a為9%，鱗狀細胞癌中Wnt5a陽性率較高，為50%，Wnt11為25%。兩者表達與患者性別、年齡、分化程度以及淋巴結轉移無明顯相關性(P>0.05)。結論Wnt5a和Wnt11表達與肺癌類型有關，Wnt5a和Wnt11在非小細胞肺癌中的陽性率顯著高于小細胞癌，Wnt5a在鱗狀細胞癌中的表達較高，而Wnt11在腺癌中的表達較高。兩者表達與肺癌患者年齡、淋巴結轉移、細胞分化程度無明顯相關性。

肺腫瘤；非小細胞肺癌；Wnt5a；Wnt11；免疫組織化學

原發(fā)性肺癌(以下簡稱肺癌)在20世紀末已成為癌癥死亡的首要原因，發(fā)展中國家的女性肺癌病死率達11%，與子宮頸癌并重[1]。Wnt信號的失調在胚胎發(fā)育中可導致夭折或發(fā)育缺陷，在成體中則可引起細胞異常增殖及分化而導致腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[2-3]。非經典Wnt通路介導的Wnt/Ca2+通路和Wnt/PCP通路[4]均與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后密切相關，在肺癌中均有潛在研究價值[5]。有學者對非小細胞肺癌的基因表達模式進行分析，證實在鱗狀細胞癌發(fā)展過程中存在非經典Wnt信號通路的激活[6]。2013年，Bartis等[7]證實腺癌細胞系A549中Wnt11基因表達顯著增強，而鱗狀細胞癌細胞系中Wnt5a基因表達顯著增強。Wnt5a和Wnt11調節(jié)cadherin的表達以及增強β-catenin進入細胞核是降低細胞黏附的重要步驟。但迄今為止非經典Wnt信號通路的效應因子Wnt5a和Wnt11在肺癌組織中的表達及不同類型肺癌中的表達相關性鮮有報道。本實驗采用免疫組化EnVision法檢測肺癌中Wnt5a和Wnt11蛋白的表達，探討其與肺癌發(fā)生、發(fā)展及與臨床病理特征的關系及意義，并探討各類型肺癌中Wnt5a與Wnt11表達的相關性。

1 材料與方法

1.1臨床資料及標本來源選取華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院病理科2015年1月～2016年3月確診為肺癌且臨床病理資料完整的組織標本120例，20例正常肺組織標本作為對照組。肺癌病例中非小細胞肺癌84例(包括腺癌32例，鱗狀細胞癌32例，大細胞癌20例)，小細胞肺癌36例；男性96例，女性24例，年齡41～76歲，平均58歲；有淋巴結轉移者64例，無淋巴結轉移者56例；64例腺癌和鱗狀細胞癌中細胞學分化程度：高分化5例，中分化32例，低分化27例。

1.2試劑Wnt5a抗體及Wnt11抗體購自美國Santa Cruz公司，免疫組化檢測試劑盒購自上?；蚩萍脊?，其余相關試劑均購自北京中杉金橋公司。

1.3方法采用免疫組化EnVision法檢測Wnt5a和Wnt11在肺癌組織中的表達，使用GTVisionⅢ抗兔/鼠通用型免疫組化檢測試劑盒，結合產品說明書和本實驗室積累的經驗進行操作。正常肺組織為陰性對照；采用PBS緩沖液代替一抗作為空白對照。

1.4免疫組化結果判讀Wnt5a與Wnt11陽性均表現(xiàn)為胞質染色[8]，且著色強度高于背景(間質結締組織等)的非特性染色強度。不著色或與背景無差異者判為陰性。

1.5統(tǒng)計學分析采用SPSS 20.0進行統(tǒng)計數(shù)據(jù)分析，組間差異性分析采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義；相關性分析采用Spearman等級相關檢驗進行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1Wnt5a、Wnt11在肺癌中的表達120例肺癌中，Wnt5a陽性率為28.3%，Wnt11陽性率為28.3%。其中84例非小細胞肺癌中，Wnt5a陽性率為36%，Wnt11陽性率為38%，小細胞肺癌中Wnt5a和Wnt11陽性率均低，分別為8.3%和0。腺癌中Wnt11和Wnt5a的陽性率分別為56%、9%，鱗狀細胞癌中Wnt5a的陽性率分別為50%、25%，大細胞肺癌中Wnt5a和Wnt11的陽性率相對接近，分別為45%和30%(表1，圖1、2)。

2.2不同類型肺癌中Wnt5a、Wnt11表達與臨床病理特征的關系120例肺癌組織中，Wnt5a表達與肺癌患者性別、年齡、淋巴結轉移無相關性(P>0.05)，而在4種類型肺癌中的表達差異有顯著性(P<0.01)，在非小細胞肺癌(鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌)中陽性率顯著高于小細胞肺癌(P<0.01，表2)；Wnt11表達與肺癌患者性別、年齡、淋巴結轉移均無相關性(P>0.05)，而在4種類型肺癌中的表達差異有顯著性(P<0.01)，在非小細胞肺癌(鱗狀細胞癌、腺癌、大細胞癌)中陽性率顯著高于小細胞肺癌(P<0.01，表2)。

在32例腺癌、32例鱗狀細胞癌組織中，Wnt5a在鱗狀細胞癌中的表達顯著高于腺癌(P<0.01)，而在患者年齡、淋巴結轉移、細胞分化程度不同分組間差異均無顯著性(P>0.05，表3)；Wnt11在腺癌中的表達顯著高于鱗狀細胞癌(P<0.05)，而在患者年齡、淋巴結轉移、細胞分化程度不同分組間差異均無顯著性(P>0.05，表3)。

3 討論

Wnt基因介導的Wnt信號轉導通路異?；顒颖蛔C明是腫瘤發(fā)生的關鍵信號通路之一，該轉導通路在人類不同腫瘤中廣泛激活并調節(jié)細胞的生長、遷移和分化，在腫瘤生物學和干細胞生物學的研究中越來越顯現(xiàn)出其潛在的價值。Wnt信號通路的異常已被證實在多系統(tǒng)多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮作用，如黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宮頸癌[9]、前列腺癌、肝細胞癌[10]等。最新研究證實非小細胞肺癌中的腺癌涉及經典Wnt7b和非經典Wnt11信號上調，可能存在Wnt11/Wnt7b組合模式，而鱗狀細胞癌則涉及非經典Wnt5a信號上調和經典Wnt途徑抑制因子DKK-1上調[11]，均涉及非經典Wnt通路和經典Wnt通路共同作用。

表1 Wnt5a、Wnt11在肺癌中的表達

表2 Wnt5a、Wnt11表達與肺癌臨床病理特征的關系

表3 Wnt5a、Wnt11表達與肺腺癌和鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

①A①B①C①D②A②B②C②D

圖1Wnt5a在肺癌中的表達：A.鱗狀細胞癌；B.腺癌；C.大細胞癌；D.小細胞癌，EnVision法圖2Wnt11在肺癌中的表達：A.鱗狀細胞癌；B.腺癌；C.大細胞癌；D.小細胞癌，EnVision法

Wnt5a是Wnt蛋白家族重要成員之一，主要介導激活非經典Wnt信號通路。目前已證實，Wnt5a參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[12]，但在不同的腫瘤中Wnt5a所扮演的角色可能截然相反[13]。Wnt5a可抑制肝癌細胞MHCC97L的增殖和遷移能力[10]，而在子宮頸癌中Wnt5a可能促進子宮頸浸潤性鱗狀細胞癌的發(fā)生、發(fā)展。日本學者[14]發(fā)現(xiàn)在非小細胞肺癌尤其是鱗狀細胞癌中Wnt5a表達增高，并影響肺癌的轉歸和預后。Wnt11與Wnt5a一樣，均是非經典Wnt蛋白的一員。Wnt11在肝細胞癌中的表達明顯低于正常肝細胞，而在前列腺癌、乳腺癌、胃癌、大腸腺癌和腎細胞癌中表達上調。最新研究表明在肺腺癌細胞系中Wnt11基因表達水平顯著上調[15]。本組實驗結果顯示，Wnt5a及Wnt11在非小細胞肺癌中表達顯著高于小細胞肺癌，且Wnt5a在鱗狀細胞癌中表達顯著高于腺癌，Wnt11在腺癌中的表達顯著高于鱗狀細胞癌。但兩者表達與患者性別、年齡、細胞分化程度以及淋巴結轉移均無顯著相關性。

本組實驗結果未顯示，Wnt5a與Wnt11與淋巴結轉移、細胞分化程度等預后相關因素的相關性，可能與不同類型腫瘤中Wnt5a和Wnt11所扮演角色不同有關，另一方面可能與樣本量不足以及免疫組化實驗本身缺陷導致實驗結果偏差有關。鑒于Wnt5a與Wnt11在不同類型非小細胞肺癌中的表達存在差異，推測Wnt5a和Wnt11表達對判斷腫瘤類型存在一定意義，且在不同類型非小細胞肺癌中可能存在不同的促腫瘤生成作用。因此，進一步分析兩者的下游信號機制對于闡明肺癌的發(fā)生機制，為改善肺癌的治療及預后提供重要線索。

綜上所述，Wnt5a和Wnt11在肺癌中具有潛在的研究價值，其介導的非經典Wnt信號通路可能為不同類型肺癌靶向治療及預后判斷提供重要線索。

[1] Torre L A, Bray F, Siegel R L,etal. Global cancer statistics, 2012[J]. CA Cancer J Clin, 2015,65(2):87-108.

[2] Ouyang H, Zhuo Y, Zhang K. WNT signaling in stem cell differentiation and tumor formation[J]. J Clin Invest, 2013,123(4):1422-1424.

[3] Yamamoto H, Awada C, Hanaki H,etal. The apical and basolateral secretion of Wnt11 and Wnt3a in polarized epithelial cells is regulated by different mechanisms[J]. J Cell Sci, 2013,126(Pt 13):2931-2943.

[4] Angers S, Moon R T. Proximal events in Wnt signal transduction[J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2009,10(7): 468-477.

[5] Puvirajesinghe T M, Bertucci F, Jain A,etal. Identification of p62/SQSTM1 as a component of non-canonical Wnt VANGL2-JNK signalling in breast cancer[J]. Nat Commun, 2016，7:10318.

[6] Hu Y, Galkin A V, Wu C,etal. CAFET algorithm reveals Wnt/PCP signature in lung squamous cell carcinoma[J]. PLoS One, 2011,6(10):e25807.

[7] Bartis D, Csongei V, Weich A,etal. Down-regulation of canonical and up-regulation of non-canonical Wnt signalling in the carcinogenic process of squamous cell lung carcinoma[J]. PLoS One, 2013,8(3):e57393.

[8] Huang Y, Liu G, Zhang B,etal. Wnt-5a regulates proliferation in lung cancer cells[J]. Oncol Rep, 2010,23(1):177-481.

[9] 平 靜, 田 杰, 陳 瑩, 等. 子宮頸鱗狀細胞癌及其癌前病變中Wnt5a的表達[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2016,32(7):796-798.

[10] 畢利泉, 劉曉紅, 陳英劍, 等. Wnt5a基因對肝癌細胞增殖及遷移能力的影響[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2012,28(8):857-861.

[11] Nguyen D X, Chiang A C, Zhang X H,etal. WNT/TCF signaling through LEF1 and HOXB9 mediates lung adenocarcinoma metastasis[J]. Cell, 2009,138(1):51-62.

[12] Tang Q, Zhao H, Yang B,etal. WIF-1 gene inhibition and Wnt signal transduction pathway activation in NSCLC tumorigenesis[J]. Oncol Lett, 2017,13(3):1183-1188.

[13] Asem M S, Buechler S, Wates R B,etal. Wnt5a signaling in cancer[J]. Cancers (Basel), 2016,8(9).pii: E79. doi: 10.3390/cancers8090079.

[14] Nakashima N, Liu D, Huang C L,etal. Wnt3 gene expression promotes tumor progression in non-small cell lung cancer[J]. Lung Cancer, 2012,76(2):228-234.

[15] Bartis D, Csongei V, Weich A,etal. Down-regulation of canonical and up-regulation of non-canonical Wnt signalling in the carcinogenic process of squamous cell lung carcinoma[J]. PLoS One, 2013,8(3):e57393.

ExpressionofWnt5aandWnt11inlungcancerandtheirsignificance

TANG Feng-juan1, XU San-peng1, WANG Guo-ping1,2, KUANG Dong1

(1DepartmentofPathology,TongjiHospital,TongjiMedicalCollegeHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China;2InstituteofPathology,TongjiMedicalCollegeHuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China)

PurposeTo detect Wnt5a and Wnt11 expres-sion in lung cancer, to explore the relationship between their ex-pression and the types of lung cancer, and to assess the relationships between their expression and clinicopathologic factors (such as gender, age, degree of cell differentiation, lymph node metastasis).MethodsThe 120 cases of lung cancer were se-lected as the experimental group. In addition, 20 cases of normal lung tissue were selected as the control group. Immunohistochemistry EnVision method was used to detect the expression of Wnt5a and Wnt11. The results were analyzed by the statistical software.ResultsThe positive expression rate of Wnt5a and Wnt11 was 36% and 38% in 84 cases of non-small cell lung carcinoma. While the expression rate of Wnt5a and Wnt11 were low (8.3% and 0, respectively)in 36 cases of small cell lung carcinoma. Both expression in non-small cell lung carcinoma was significantly higher than that of small cell carcinoma. The expression rate of Wnt11 in adenocarcinoma was higher (56%, while Wnt5a was 9%), and the expression rate of Wnt5a in squamous cell carcinoma was higher (50%, while Wnt11 was 25%). However, there was no significant difference between the two groups in the sex, age, differentiation and lymph node metastasis.ConclusionBoth Wnt5a and Wnt11 expression was associated with lung cancer types. The positive expression rate of Wnt5a and Wnt11 in non-small cell lung carcinoma is significantly higher than that of small cell lung carcinoma. The expression level of Wnt5a is higher in squamous cell carcinoma, while Wnt11 is higher in adenocarcinoma. Both of their expression show no significant correlation with the lung cancer clinicopathological indicators (including the gender, age, degree of differentiation and lymph node metastasis in patients).

lung neoplasms; non-small cell lung carcinoma; Wnt5a; Wnt11; immunohistochemistry

R 734.2

A

1001-7399(2017)10-1082-05

時間：2017-10-23 13:30 網絡出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20171023.1330.005.html

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.10.005

接受日期：2017-07-31

國家自然科學基金(8100048)

1華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院病理科，武漢 430030

2華中科技大學同濟醫(yī)學院基礎醫(yī)學院病理學系，武漢 430030

唐鳳娟，女，碩士，醫(yī)師。E-mail: tangfengjuan0703@163.com

況 東，男，博士，主治醫(yī)師，通訊作者。E-mail: tjkdpathology@hust.edu.cn