徐小艷 徐正軍 王相子 開(kāi) 妍 周 偉 陳昌海

（江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210036）

2016年江蘇省豬口蹄疫監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

徐小艷 徐正軍 王相子 開(kāi) 妍 周 偉 陳昌海

（江蘇省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，江蘇南京 210036）

為了解江蘇省豬口蹄疫感染和免疫情況，采用熒光RTPCR和ELISA方法，對(duì)收集的8000份豬組織樣品和2718份豬血清樣品分別進(jìn)行口蹄疫病毒核酸和O型口蹄疫抗體檢測(cè)。數(shù)據(jù)顯示，口蹄疫病毒核酸陽(yáng)性率為0；O型口蹄疫抗體合格率為68.95%。結(jié)果表明，江蘇省規(guī)模場(chǎng)和屠宰場(chǎng)豬口蹄疫防控情況較好；O型口蹄疫抗體合格率略低于70%，說(shuō)明仍有個(gè)別場(chǎng)戶的口蹄疫免疫工作存在瑕疵。

口蹄疫；監(jiān)測(cè)；分析

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮膚發(fā)生水泡和潰瘍?yōu)橹饕卣?，主要侵害豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物[1]。該病傳播迅速，發(fā)病率高，可引起幼畜死亡，成年畜生產(chǎn)性能下降，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，并嚴(yán)重影響動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的流通貿(mào)易，是世界上危害最嚴(yán)重的豬病之一[2]。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病，是國(guó)家強(qiáng)制免疫動(dòng)物疫病之一。

按照《2016年江蘇省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查工作方案》要求，為了解江蘇省豬口蹄疫感染和免疫情況，開(kāi)展了口蹄疫病毒核酸、O型口蹄疫抗體檢測(cè)，以便準(zhǔn)確了解當(dāng)前口蹄疫防控效果，為科學(xué)防控豬口蹄疫提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

2016年采集并保存的豬組織樣品（豬扁桃體或淋巴結(jié)）8000份，豬血清樣品2718份，覆蓋全省13個(gè)市70個(gè)縣（市、區(qū)）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

高通量組織破碎儀（QIAGEN Tissuelyser Ⅱ）；全自動(dòng)核酸提取工作站（QIAsymphony SP）；熒光定量PCR儀（ABI 7500）；全自動(dòng)洗板機(jī)（Bio-Rad 1575）；酶標(biāo)儀（ELX808IU）。

1.3 檢測(cè)試劑

QIAsymphony Virus/Bacteria Mini Kit，購(gòu)自上海賽嘉生物科技有限公司；口蹄疫病毒核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法），購(gòu)自深圳生科原生物股份有限公司；口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所；豬口蹄疫病毒O型IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法），購(gòu)自深圳芬德生物技術(shù)有限公司。

1.4 檢測(cè)方法

采用磁珠法提取病毒核酸；采用熒光RT-PCR方法檢測(cè)口蹄疫病毒核酸；采用液相阻斷ELISA方法檢測(cè)O型口蹄疫抗體，合成肽疫苗則采用VP1結(jié)構(gòu)蛋白ELISA進(jìn)行檢測(cè)。具體步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)豬扁桃體樣品564份、豬淋巴結(jié)樣品7436份，檢出口蹄疫病毒核酸陽(yáng)性樣品0份，陽(yáng)性率為0（表1）。

表1 不同場(chǎng)點(diǎn)類型豬口蹄疫病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

2.2 O型口蹄疫血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)豬血清樣品2718份，O型口蹄疫免疫抗體合格1874份，合格率為68.95%。

2.2.1 不同季度檢測(cè)結(jié)果。一至四季度O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為83.37%、77.68%、65.78%和52.92%（表2）。四個(gè)季度的檢測(cè)結(jié)果差異極顯著（X2=189.77，P＜0.01）。

表2 不同季度豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.2 不同地區(qū)檢測(cè)結(jié)果。13個(gè)地市中，豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果差異較大（表3），合格率最高的為80.45%，最低的為32.16%；達(dá)到國(guó)家規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)70%以上的有8個(gè)市，占61.54%（8/13）。

表3 不同地區(qū)豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.3 不同場(chǎng)點(diǎn)類型檢測(cè)結(jié)果。規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶、屠宰場(chǎng)豬O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為：68.67%、67.95%和84.44%（表4）。三種不同場(chǎng)點(diǎn)類型的檢測(cè)結(jié)果差異極顯著（X2=138.59，P＜0.01）。

表4 不同場(chǎng)點(diǎn)類型豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.4 不同監(jiān)測(cè)形式檢測(cè)結(jié)果。采用定點(diǎn)監(jiān)測(cè)和飛行監(jiān)測(cè)的形式對(duì)豬O型口蹄疫進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測(cè)，合格率分別為72.52%和65.81%（表5），差異極顯著（X2=14.21，P＜0.01）。

表5 不同監(jiān)測(cè)形式豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.5 不同免疫情況檢測(cè)結(jié)果。對(duì)免疫情況明確的樣品按照使用的疫苗種類和接種次數(shù)進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，不同免疫情況下，豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果差異較大（表6、表7）。免疫O型合成肽苗和O型滅活苗后，抗體合格率分別為73.27%和62.34%，差異極顯著（X2=31.41，P＜0.01）；免疫1次和免疫2次及以上的合格率分別為65.03%和69.78%，差異顯著（X2=5.60，P＜0.05）。

表6 不同疫苗種類豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

表7 不同免疫次數(shù)豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 結(jié)果分析

3.1 病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果分析

病原學(xué)檢測(cè)中，無(wú)論是規(guī)模場(chǎng)，還是屠宰場(chǎng)，均未檢出口蹄疫病毒核酸陽(yáng)性樣品，說(shuō)明江蘇省規(guī)模場(chǎng)和屠宰場(chǎng)豬口蹄疫防控情況較好。

3.2 O型口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果分析

O型口蹄疫免疫抗體合格率為68.95%，略低于70%，說(shuō)明仍有個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)戶的口蹄疫免疫工作存在瑕疵。該數(shù)據(jù)較孫玉霜[3]等報(bào)道的天津地區(qū)2014年豬O型口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測(cè)84.97%的合格率低，較陳曦等[4]報(bào)道的安徽省2015年豬口蹄疫定點(diǎn)監(jiān)測(cè)32.87%的合格率高，說(shuō)明不同年份、不同地區(qū)間，O型口蹄疫免疫抗體合格率差別很大。

時(shí)間上，一至四季度，O型口蹄疫免疫抗體合格率呈現(xiàn)逐步顯著下降的態(tài)勢(shì)，這可能與樣品來(lái)源有關(guān)，一季度的樣品均來(lái)自規(guī)模場(chǎng)，其余三個(gè)季度的樣品來(lái)自規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶，且散養(yǎng)戶的樣品數(shù)量占比較大；三季度開(kāi)始，合格率低于70%，四季度為最低點(diǎn)，僅為52.92%，分析原因可能與養(yǎng)殖模式有關(guān)，散養(yǎng)戶大多在一季度引進(jìn)仔豬，育肥后四季度出售，臨近出售時(shí)，有的養(yǎng)殖戶存在僥幸心理，能不免疫就不免疫，出現(xiàn)疫苗已過(guò)了有效保護(hù)期還未加強(qiáng)免疫的情況，導(dǎo)致四季度免疫抗體合格率最低。

地市間，省內(nèi)13個(gè)地市的O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果呈現(xiàn)顯著的地區(qū)差異。蘇南范圍內(nèi)的市1、市8、市13，蘇中范圍內(nèi)的市11，蘇北范圍內(nèi)的市3合格率均低于70%，提示合格率高低與當(dāng)?shù)氐慕?jīng)濟(jì)發(fā)展水平無(wú)明顯相關(guān)性，各地對(duì)該病是否足夠重視、是否將各項(xiàng)防控措施落到實(shí)處才是重中之重。

不同監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)中，養(yǎng)殖環(huán)節(jié)涉及的規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶的合格率均低于70%，說(shuō)明養(yǎng)殖環(huán)節(jié)是該病防控的關(guān)鍵點(diǎn)；流通環(huán)節(jié)中的屠宰場(chǎng)合格率較高，可能與監(jiān)測(cè)場(chǎng)點(diǎn)的選擇有關(guān)，本年度監(jiān)測(cè)中涉及的屠宰場(chǎng)均為大型屠宰場(chǎng)，各項(xiàng)管理措施比較規(guī)范。

不同監(jiān)測(cè)形式中，定點(diǎn)監(jiān)測(cè)在全省選擇規(guī)模場(chǎng)作為定點(diǎn)監(jiān)測(cè)點(diǎn)，多為飼養(yǎng)管理和疫病防控水平較高的場(chǎng)，每個(gè)季度進(jìn)行一次采樣監(jiān)測(cè)；飛行監(jiān)測(cè)在全省隨機(jī)選擇規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶，在春季、夏季和秋冬季集中防疫期間分別開(kāi)展一次采樣監(jiān)測(cè)。因遵循“隨機(jī)”的采樣原則，飛行監(jiān)測(cè)中被采樣場(chǎng)戶的飼養(yǎng)管理和疫病防控水平參差不齊，而且其中散養(yǎng)戶的樣品數(shù)量較多，占飛行監(jiān)測(cè)樣品總數(shù)的72.73%。與規(guī)模場(chǎng)相比，散養(yǎng)戶的疫病防控意識(shí)明顯薄弱很多。因此，散養(yǎng)戶樣品比重大的飛行監(jiān)測(cè)與全部是規(guī)模場(chǎng)樣品的定點(diǎn)監(jiān)測(cè)相比，兩者檢測(cè)結(jié)果差異極其顯著，飛行監(jiān)測(cè)的合格率明顯偏低。

在疫苗免疫次數(shù)相同的情況下，O型合成肽苗免疫后抗體檢測(cè)結(jié)果比O型滅活苗好。在選擇同一種疫苗的情況下，免疫2次及以上的抗體檢測(cè)結(jié)果比免疫1次好，與黃寶學(xué)等[5]報(bào)道的廣西省田東縣豬群O型口蹄疫抗體水平監(jiān)測(cè)結(jié)果、高權(quán)利等[6]報(bào)道的同種口蹄疫疫苗免疫次數(shù)對(duì)比試驗(yàn)中的結(jié)果一致。為了使豬群獲得較好的免疫抗體水平，應(yīng)對(duì)豬群進(jìn)行至少2次口蹄疫疫苗免疫。

陳曦等[4]報(bào)道的安徽省2015年豬口蹄疫定點(diǎn)監(jiān)測(cè)中，對(duì)豬A型口蹄疫抗體進(jìn)行了檢測(cè)，陽(yáng)性率為25.95%。分析認(rèn)為雖然出現(xiàn)了抗體陽(yáng)性的情況，但并未發(fā)現(xiàn)臨床病例，說(shuō)明存在隱性帶毒現(xiàn)象。2014年6月，江蘇省宿遷市泗洪縣一生豬屠宰場(chǎng)發(fā)生A型口蹄疫輸入性疫情，國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室分離出了A型口蹄疫病毒，說(shuō)明江蘇省應(yīng)對(duì)豬A型口蹄疫給予高度重視，密切跟蹤監(jiān)測(cè)。同時(shí)，需要對(duì)豬場(chǎng)使用的口蹄疫疫苗現(xiàn)狀進(jìn)行調(diào)研，對(duì)目前豬群中A型口蹄疫的流行情況進(jìn)行評(píng)估，從而明確豬口蹄疫免疫及監(jiān)測(cè)相關(guān)策略和措施。

[1]蔡寶祥.家畜傳染病學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001：149-156.

[2]謝慶閣.口蹄疫[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004：12-15.

[3]孫玉霜，李穎，李秀梅，等.天津地區(qū)豬口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測(cè)及分析[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2016，37（7）：127-130.

[4]陳曦，王軍，占松鶴，等.安徽省2015年豬口蹄疫定點(diǎn)監(jiān)測(cè)分析[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2016，33（7）：4-6.

[5]黃寶學(xué)，蒙振畝，班雪花.豬群O型口蹄疫抗體水平監(jiān)測(cè)與免疫接種[J].畜牧與獸醫(yī)，2016，48（4）：104-106.

[6]高權(quán)利，劉陽(yáng)，張智鵬，等.豬O型口蹄疫政府統(tǒng)購(gòu)苗和市場(chǎng)高效商品苗免疫效果比較分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2016，52（5）：47-49.

徐小艷（1980—），女，碩士研究生，主要從事動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查工作。