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        5株非釀酒酵母的耐受性及發(fā)酵特性研究

        2017-11-17 09:41:25劉燦珍董書甲姜?jiǎng)P凱趙新節(jié)孫玉霞
        中國釀造 2017年10期
        關(guān)鍵詞:伊薩陸生耐受性

        劉燦珍,董書甲,姜?jiǎng)P凱,趙新節(jié),孫玉霞*

        (1.齊魯工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院 山東省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 濟(jì)南 250353;2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品研究所,山東 濟(jì)南 250100)

        5株非釀酒酵母的耐受性及發(fā)酵特性研究

        劉燦珍1,董書甲1,姜?jiǎng)P凱1,趙新節(jié)1,孫玉霞2*

        (1.齊魯工業(yè)大學(xué) 生物工程學(xué)院 山東省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 濟(jì)南 250353;2.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品研究所,山東 濟(jì)南 250100)

        以陸生伊薩酵母(Issatchenkia terricola)、淺白隱球酵母(Cryptococcus albidus)、葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniaspora uvarum)、美極梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、戴爾有孢圓酵母(Torulaspora delbruecki)為試材,分析了5株非釀酒酵母的生長特性、耐受性和碳源氮源同化能力及發(fā)酵速率。結(jié)果表明,戴爾有孢圓酵母的生長量較大,耐受的葡萄糖質(zhì)量濃度為500 g/L、酒精體積分?jǐn)?shù)為18%、SO2質(zhì)量分?jǐn)?shù)為420 mg/L,可同化氮源3種、碳源11種;陸生伊薩酵母的生長量較小,耐受的葡萄糖質(zhì)量濃度為350 g/L、酒精體積分?jǐn)?shù)為6%、SO2質(zhì)量分?jǐn)?shù)為120 mg/L,可同化氮源4種、碳源10種;其余3株非釀酒酵母的耐受及發(fā)酵特性優(yōu)于陸生伊薩酵母低于戴爾有孢圓酵母;陸生伊薩酵母發(fā)酵速率在第2天達(dá)到最大值,其余4株酵母均在第3天達(dá)到發(fā)酵高峰。

        非釀酒酵母;耐受性;碳源、氮源同化;發(fā)酵速率

        葡萄酒的釀造過程中,釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)對葡萄酒質(zhì)量的影響極為重要,能將約4%的糖轉(zhuǎn)化為其他副產(chǎn)物,包括醇類、酯類、有機(jī)酸類物質(zhì)等[1]。酒精發(fā)酵過程中接種的酵母種類顯著影響大部分揮發(fā)性產(chǎn)物的濃度[2],不同的釀酒酵母發(fā)酵同種葡萄汁產(chǎn)生的揮發(fā)性產(chǎn)物不同[3],而非釀酒酵母菌種如葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniaspora uvarum)、星形假絲酵母(Candida stellata)、美極梅奇酵母(Metschnikowiapulcherrima)、檸檬型克勒克酵母(Kloeckera apiculata)、戴爾有孢圓酵母(Torulaspora delbrueckii)、耐熱克魯維酵母(Kluyveromyces thermotolerans)對葡萄酒的質(zhì)量也有影響[4],能分泌對葡萄酒結(jié)構(gòu)、質(zhì)量影響較大的多種胞外酶,如漢遜酵母(Hanseniasp.)和美極梅奇酵母(M.pulcherrima)分泌β-葡糖苷酶、檸檬型克勒克酵母(K.apiculata)分泌果膠酶[5]。戴爾有孢圓酵母是一種非釀酒酵母,AZZOLINI M等[6]研究發(fā)現(xiàn),該酵母與釀酒酵母順序發(fā)酵或共發(fā)酵,對果酒的感官特性均有積極影響。同時(shí),CHEN D等[7]研究發(fā)現(xiàn)戴爾有孢圓酵母有較高的生長速率和糖消耗速率。SADINENI V等[8]研究發(fā)現(xiàn),非釀酒酵母與釀酒酵母混合發(fā)酵比釀酒酵母單純發(fā)酵葡萄酒有更濃郁的果香氣味,而與美極梅奇酵母共發(fā)酵比與戴爾有孢圓酵母共發(fā)酵的葡萄酒感官評價(jià)更高。PARAPOULIM等[9]研究發(fā)現(xiàn),美奇酵母屬酵母與商業(yè)酵母共發(fā)酵時(shí)生成的酯類物質(zhì)含量高、高級醇含量低。但是釀造環(huán)境的變化(如發(fā)酵前期糖濃度較高、SO2的添加和發(fā)酵中酒精度的增加等)對非釀酒酵母的種類和數(shù)量影響較大。

        本實(shí)驗(yàn)以5株非釀酒酵母葡萄汁有孢漢遜酵母(H.uvarum)、淺白隱球酵母(C.albidus)、陸生伊薩酵母(I.terricola)、美極梅奇酵母(M.pulcherrima)、戴爾有孢圓酵母(T.delbruecki)為研究對象,測定它們的生長曲線,糖、酒精、SO2的耐受性,及碳源、氮源的同化能力和發(fā)酵速率,以期為其深入研究和合理利用奠定基礎(chǔ)。鑒定及研究非釀酒酵母的發(fā)酵特性,篩選性能良好的非釀酒酵母菌株并應(yīng)用于葡萄酒生產(chǎn)具有重要意義。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        葡萄汁有孢漢遜酵母(Hanseniaspora uvarum):篩選自河北昌黎產(chǎn)區(qū)赤霞珠葡萄;陸生伊薩酵母(Issatchenkia Terricola):篩選自云南彌勒產(chǎn)區(qū)玫瑰蜜葡萄;戴爾有孢圓酵母(Torulaspora delbrueckii):篩選自云南德欽產(chǎn)區(qū)赤霞珠葡萄;美極梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)和淺白隱球酵母(Cryptococcus albidus):篩選自新疆天山北麓產(chǎn)區(qū)赤霞珠葡萄;已通過26S r DNAD1D2區(qū)域序列分析及鑒定。

        酵母浸出粉胨葡萄糖(yeast extract peptone dextrose,YEPD)液體培養(yǎng)基、酵母浸出粉胨葡萄糖(YEPD)固體培養(yǎng)基、氮源和碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基參照文獻(xiàn)[10]的配制方法。

        葡萄糖、酵母浸粉、蛋白胨、瓊脂:北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;組氨酸、蛋氨酸、色氨酸、L-賴氨酸(均為分析純):上海藍(lán)季生物科技有限公司;生物素、泛酸鈣、葉酸、肌糖、煙酸、對氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醇、硫胺素、核黃素、硼酸、CuSO4、KI、MnSO4、ZnSO4、KH2PO4、K2HPO4、MgSO4、NaCl、CaCl2(均為分析純):國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;半乳糖、D-木糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、纖維二糖、海藻糖、棉子糖、可溶性淀粉、赤蘚糖醇、核糖醇、D-甘露糖醇、肌醇、琥珀酸、檸檬酸(均為分析純):索萊寶生物科技有限公司;亞硫酸(分析純):天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        AMR-1000酶標(biāo)儀:杭州奧盛儀器有限公司;SW-CJ-2D型超凈工作臺(tái):上海樹立有限公司;ZQPW-70全溫振蕩培養(yǎng)箱、SPL-250生化培養(yǎng)箱:天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司;QL-901漩渦混合器:海門市其林貝爾儀器制造有限公司;Nikon E100光學(xué)生物顯微鏡:上海澤仕光電科技有限公司、XB.K.25血球計(jì)數(shù)板:上海安信光學(xué)儀器制造有限公司。

        1.3 方法

        1.3.1 種子液培養(yǎng)

        將保存菌種劃線于YEPD固體培養(yǎng)基,28℃培養(yǎng)24h。挑取單菌落接種新鮮YEPD液體培養(yǎng)基,28℃、150 r/min搖床培養(yǎng)24 h[10]。

        1.3.2 生長曲線的繪制

        將上述種子液以1.0×106個(gè)/mL接種新鮮YEPD液體培養(yǎng)基,28℃培養(yǎng)36 h,每隔2 h混勻取樣200 μL于96孔板中,以未接種的YEPD液體培養(yǎng)基為對照,測定OD600nm值,每株菌均重復(fù)3次。以時(shí)間(h)和OD600nm值繪制生長曲線。

        1.3.3 菌株耐受性實(shí)驗(yàn)

        糖耐受性:將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種于含有100g/L、150g/L、200g/L、250g/L、300g/L、350g/L、400 g/L、450 g/L、500 g/L葡萄糖質(zhì)量濃度的YEPD液體培養(yǎng)基中,28℃靜置培養(yǎng)24 h,酶標(biāo)儀測定OD600nm值,每株菌均重復(fù)3次,繪制5株非釀酒酵母的葡萄糖耐受性曲線。

        酒精耐受性:將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種于含有體積分?jǐn)?shù)分別為3%、6%、9%、12%、15%、18%酒精的YEPD液體培養(yǎng)基中,28℃靜置培養(yǎng)24 h,酶標(biāo)儀測定OD600nm值,每株菌均重復(fù)3次,繪制5株非釀酒酵母的酒精耐受性曲線。

        SO2耐受性:將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種于含有60mg/L、120mg/L、180mg/L、240mg/L、300mg/L、360mg/L、420mg/LSO2(SO2以H2SO3形式添加)質(zhì)量濃度的YEPD液體培養(yǎng)基中,28℃靜置培養(yǎng)24h,酶標(biāo)儀測定OD600nm值,每株菌均重復(fù)3次[11],繪制5株非釀酒酵母的SO2耐受性曲線。

        1.3.4 同化能力實(shí)驗(yàn)

        同化氮源實(shí)驗(yàn):將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種含有硫酸銨、天冬門素、硝酸鉀、亞硝酸鈉、L-賴氨酸的氮源底物濃度為2~5mmol/L的碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。另外硝酸鉀加入量為0.078%,并調(diào)節(jié)pH值為6.5。25℃培養(yǎng)7 d,每株菌均重復(fù)3次,以不加氮源的碳源基礎(chǔ)培養(yǎng)基作對照。

        同化碳源實(shí)驗(yàn):將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種含有半乳糖、D-木糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、纖維二糖、海藻糖、棉子糖、可溶性淀粉、赤蘚糖醇、核糖醇、D-甘露糖醇、肌醇、琥珀酸、檸檬酸的碳源底物濃度為50 mmol/L的氮源基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,25℃培養(yǎng)21 d,每株菌均重復(fù)3次,以不加氮源的基礎(chǔ)碳源培養(yǎng)基作對照[10]。

        結(jié)果觀察:在漩渦振蕩器上混勻后,通過畫有3/4 mm寬黑線的白色紙張,對光觀察,若完全看不到黑線記為“+++”,看到模糊的黑線記為“++”,看到臨界黑線記為“+”,完全看到黑線記為“-”。

        1.3.5 發(fā)酵速率測定

        將對數(shù)生長期的菌株分別以1.0×106個(gè)/mL接種YEPD液體培養(yǎng)基,25℃,靜置培養(yǎng),每天稱質(zhì)量并計(jì)算凈質(zhì)量,即為CO2的失質(zhì)量,凈質(zhì)量穩(wěn)定時(shí)停止稱質(zhì)量。以時(shí)間(d)和CO2失質(zhì)量(g/d)繪制發(fā)酵速率曲線[12]。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 非釀酒酵母的生長曲線

        5株非釀酒酵母的生長情況結(jié)果見圖1。由圖1可知,除陸生伊薩酵母經(jīng)歷8 h的延滯期進(jìn)入對數(shù)生長期外,其余4株非釀酒酵母均經(jīng)歷約6 h的延滯期后,進(jìn)入對數(shù)生長期,且穩(wěn)定期持續(xù)時(shí)間不同。其中葡萄汁有孢漢遜酵母與戴爾有孢圓酵母對數(shù)生長期持續(xù)時(shí)間較短,在14 h左右進(jìn)入穩(wěn)定期,前者穩(wěn)定期持續(xù)時(shí)間最長約15 h,均在28 h進(jìn)入衰亡期。淺白隱球酵母與美極梅奇酵母在對數(shù)生長期的長勢基本一致,進(jìn)入穩(wěn)定期的時(shí)間較晚約17 h左右,其中前者穩(wěn)定期持續(xù)時(shí)間較長約13 h。陸生伊薩酵母進(jìn)入穩(wěn)定期時(shí)間最晚約22 h左右,且持續(xù)時(shí)間也最短,經(jīng)歷穩(wěn)定期后很快進(jìn)入衰亡期。

        圖1 非釀酒酵母在YEPD液體培養(yǎng)基中的生長曲線Fig.1 Growth curves of non-Saccharomycesstrains in YEPD liquid medium

        2.2 非釀酒酵母菌株的耐受性

        2.2.1 非釀酒酵母葡萄糖耐受性

        5株實(shí)驗(yàn)菌株的糖耐受性情況結(jié)果見圖2。由圖2可知,陸生伊薩酵母生長量最低,且在葡萄糖質(zhì)量濃度為350 g/L時(shí)菌體完全不生長。其他4株非釀酒酵母的生長量隨糖質(zhì)量濃度的增加有波動(dòng),但OD600nm值較高均>0.3,在葡萄糖質(zhì)量濃度為400 g/L時(shí)生長情況較好,在500 g/L時(shí)不生長。石明楊等[13-14]對篩選的戴爾有孢圓酵母進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),該菌能耐受300 g/L的糖范圍,在糖質(zhì)量濃度為500 g/L時(shí)生長完全受到抑制;與本研究結(jié)果一致[10-12]。

        2.2.2 非釀酒酵母酒精耐受性

        5株實(shí)驗(yàn)菌株的酒精耐受性結(jié)果見圖3。由圖3可知,菌株生長量隨酒精體積分?jǐn)?shù)增加而呈現(xiàn)下降的趨勢。陸生伊薩酵母在酒精體積分?jǐn)?shù)為6%時(shí)生長量為0,生長完全受到抑制;淺白隱球酵母與葡萄汁有孢漢遜酵母在在酒精體積分?jǐn)?shù)為6%時(shí)的生長量驟然下降,在酒精體積分?jǐn)?shù)為18%時(shí)生長完全受到抑制;戴爾有孢圓酵母隨酒精體積分?jǐn)?shù)的增加,生長量呈下降趨勢,在酒精體積分?jǐn)?shù)為18%時(shí)生長完全受到抑制,耐受性能較好。其中陸生伊薩酵母的酒精耐受度與王汝瑱[15]篩選出的陸生伊薩酵母BS-12能耐受酒精度<10%vol的研究結(jié)果存在相似性。

        2.2.3 非釀酒酵母SO2耐受性

        圖4 非釀酒酵母對SO2的耐受性Fig.4 Tolerance of non-Saccharomycesstrains to SO2

        5株實(shí)驗(yàn)菌株的SO2耐受性結(jié)果見圖4。由圖4可知,除陸生伊薩酵母外,其他4株非釀酒酵母對SO2的耐受趨勢基本一致,隨著SO2質(zhì)量濃度的增加菌株生長量呈現(xiàn)的趨勢為先增長后下降,在低于350 mg/L的范圍內(nèi)生長很好,趙靜靜[16]研究發(fā)現(xiàn),葡萄汁有孢漢遜酵母最高耐受SO2的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為100 mg/L,這與本研究存在差異。陸生伊薩酵母最高耐受的SO2質(zhì)量分?jǐn)?shù)為120mg/L,美極梅奇酵母能耐受SO2質(zhì)量濃度為420 mg/L。

        2.3 非釀酒酵母對氮源和碳源的同化特性

        2.3.1 氮源同化特性

        表1 5株非釀酒酵母對氮源同化現(xiàn)象Table 1 Assimilation of nitrogen sources of 5 non-Saccharomyces strains

        由表1可知,天冬氨酸、硫酸銨、L-賴氨酸是所有菌株均能利用的氮源,亞硝酸鈉是所有菌株均不能利用的氮源,只有陸生伊薩酵母能利用硝酸鉀??赡艿脑蚴牵簛喯跛猁}在pH<6時(shí)形成亞硝酸,對酵母細(xì)胞產(chǎn)生毒性,而使酵母不能利用亞硝酸鹽。由此可知,陸生伊薩酵母的氮源同化能力最強(qiáng),能夠利用4種不同氮源,葡萄汁有孢漢遜酵母的氮源同化能力次之,可完全利用硫酸銨、天冬氨酸、L-賴氨酸3種不同氮源。淺白隱球酵母與戴爾有孢圓酵母的氮源同化能力一致,均能完全利用2種氮源。美極梅奇酵母的氮源同化能力稍差,能同化3種氮源,但只能完全利用天冬氨酸1種氮源。

        2.3.2 碳源同化特性

        表2 5株非釀酒酵母對碳源同化現(xiàn)象Table 2 Assimilation of carbon sources of 5 non-Saccharomyceststrains

        由表2可知,5株非釀酒酵母除乳糖、可溶性淀粉、肌醇、檸檬酸外4種碳源外,均能同化其余11種碳源。由此可看出非釀酒酵母不能利用多糖,這是由于微生物優(yōu)先利用簡單的營養(yǎng)物質(zhì),因此多糖是最難利用的碳源。而糖類、醇類、酸類共存的情況下,酵母優(yōu)先利用消耗能量最少的物質(zhì),這可能是酵母不能利用肌醇及檸檬酸的原因。其中從纖維二糖、核糖醇2種碳源的利用情況來看,出現(xiàn)了陸生伊薩酵母、淺白隱球酵母、葡萄有孢漢遜酵母3株菌株初期不能利用的碳源,而后期卻能利用的現(xiàn)象以及對D-木糖、海藻糖、棉子糖、赤蘚糖醇、D-甘露糖醇、琥珀酸同化能力逐漸增強(qiáng)的現(xiàn)象。這2種現(xiàn)象的原因可能是由于幾株非釀酒酵母對上述8種碳源的適應(yīng)性不同,而導(dǎo)致最終的同化能力有差異。美極梅奇酵母與戴爾有孢圓酵母對不同碳源的同化力最強(qiáng),基本能完全同化11種碳源;陸生伊薩酵母的碳源同化能力最差,僅能完全同化蔗糖、海藻糖2種碳源;其余2株非釀酒酵母同化能力次之,分別完全同化4種、6種碳源。

        2.4 非釀酒酵母的發(fā)酵速率

        發(fā)酵速率曲線反應(yīng)了菌株對培養(yǎng)基的適應(yīng)性及發(fā)酵強(qiáng)度的動(dòng)態(tài)變化,5株非釀酒酵母的發(fā)酵速率曲線見圖5。由圖5可知,陸生伊薩酵母在發(fā)酵第2天發(fā)酵速率達(dá)到最大,隨后開始下降,在第5天后呈下降趨勢并緩慢達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài),但CO2的失質(zhì)量最小,發(fā)酵力最小??赡苁怯捎谠摼攴€(wěn)定期持續(xù)時(shí)間較短直接進(jìn)入衰亡期所致。其余4株實(shí)驗(yàn)菌株均在發(fā)酵第3天達(dá)到最大發(fā)酵速率,但CO2的失質(zhì)量不同,葡萄有孢漢遜酵母與戴爾有孢圓酵母的CO2失質(zhì)量最大達(dá)到0.13 g/d,發(fā)酵能力較強(qiáng),這表明對模擬培養(yǎng)基的適應(yīng)能力強(qiáng),發(fā)酵強(qiáng)度大;其余2株非釀酒酵母發(fā)酵能力次之。

        圖5 非釀酒酵母發(fā)酵速率曲線Fig.5 Ferment ation rate curves of 5 non-Saccharomycesstrains

        3 結(jié)論

        對5株非釀酒酵母的生長特性、耐受性、同化特性、發(fā)酵速率的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在生長特性方面,葡萄汁有孢漢遜酵母、戴爾有孢酵母的延滯期最短而穩(wěn)定期維持時(shí)間最長,菌體量也始終保持在較高水平,生長能力最好;美極梅奇酵母、淺白隱球酵母較前2種非釀酒酵母的延滯期長,但菌量水平、穩(wěn)定期維持時(shí)間均較好;而陸生伊薩酵母的在五株非釀酒酵母菌中延滯期最長而穩(wěn)定期時(shí)間最短,因此其生長能力最弱。在耐受性方面,戴爾有孢圓酵母酵母在不同濃度的糖、酒精、SO2耐受性均較強(qiáng);陸生伊薩酵母與美極梅奇酵母的耐受性較差,其余2株非釀酒酵母的耐受性次之;在同化碳源氮源的能力方面,陸生伊薩酵母的氮源同化能力最強(qiáng),其余4種非釀酒酵母的同化能力基本一致;美極梅奇酵母與戴爾有孢圓酵母的碳源同化能力較好;陸生伊薩酵母的碳源同化能力最差。在發(fā)酵速率方面,葡萄汁有孢漢遜酵母與戴爾有孢圓酵母發(fā)酵強(qiáng)度較好;陸生伊薩酵母的發(fā)酵強(qiáng)度最差;其余2株非釀酒酵母的發(fā)酵強(qiáng)度次之。

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        Tolerance and fermentation characteristics of 5 non-Saccharomyces

        LIU Canzhen1,DONG Shujia1,JIANG Kaikai1,ZHAO Xinjie1,SUN Yuxia2*
        (1.Shandong Province Key Laboratory of Microbial Engineering,College of Biotechnology,Qilu University of Technology,Jinan 250353,China;2.Institute of Agricultural Products,Shandong Academy of Agricultural Sciences,Jinan 250100,China)

        Using theIssatchenkia terricola,Cryptococcus albidus,Hanseniaspora uvarum,Metschnikowia pulcherrimaandTorulaspora delbrueckias experimental materials,the growth characteristics,tolerance,carbon source assimilation capacity and fermentation rate of 5 non-Saccharomyceswere analyzed.The results showed that the growth ofT.delbrueckiwas the largest,and was able to tolerate 500 g/L glucose,18%alcohol,420 mg/L SO2and could assimilate 3 kinds of nitrogen sources and 11 kinds of carbon sources.The growth ofI.terricolawas able to tolerate 350 g/L glucose,6%alcohol,120 mg/L SO2,and could assimilate 4 kinds of nitrogen sources and 10 kinds of carbon sources.The tolerance and fermentation characteristics of other 3 strains of non-Saccharomyceswere higher than that ofI.terricoland lower than that ofT.delbruecki.The fermentation rate ofI.terricol reached the maximum in the second day,and the other 4 strains reached the peak of fermentation on the third day.

        non-Saccharomyces;tolerance;carbon and nitrogen source assimilation;fermentation rate

        TS261.1

        0254-5071(2017)10-0042-05

        10.11882/j.issn.0254-5071.2017.10.010

        2017-08-03

        山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系果品創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(SDAIT-06-14);山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2015GNC113010);泰山學(xué)者工程專項(xiàng);山東省微生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放課題資助項(xiàng)目

        劉燦珍(1991-),女,碩士研究生,研究方向?yàn)榫N選育及代謝調(diào)控。

        *通訊作者:孫玉霞(1973-),女,副研究員,碩士,研究方向?yàn)獒劸萍夹g(shù)和酒類風(fēng)味物質(zhì)。

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