李 強,肖 娜,楊 超，劉小寶,趙興華,劉聚祥,何 欣*

(1.河北農業(yè)大學動物醫(yī)學院,河北保定 071000；2.河北定州市動物防疫監(jiān)督總站，河北定州 073000;3.保定職業(yè)技術學院,河北保定 071000)

枳術粉對雛雞生長性能和腸道微生態(tài)及免疫功能的影響

李 強1,肖 娜2,楊 超2，劉小寶3,趙興華1,劉聚祥1,何 欣1*

(1.河北農業(yè)大學動物醫(yī)學院,河北保定 071000；2.河北定州市動物防疫監(jiān)督總站，河北定州 073000;3.保定職業(yè)技術學院,河北保定 071000)

為了研究傳統(tǒng)方劑枳術粉[枳實(炒)∶白術(炒) 1∶2，ZHF]對蛋雛雞生長性能、免疫功能和腸道微生態(tài)的影響，選擇海塞克蛋雛雞180只，隨機分為3組，即對照組(CON)和枳術粉添加組(10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF)，每組3個重復，每個重復20只，試驗期42 d。結果顯示，在生長性能上，21 d～42 d，10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF組平均日增質量顯著高于CON組(P<0.05)，料重比分別比CON組降低了1.6%和4.1%(P<0.05)。添加ZHF組的腸道大腸埃希菌數量減少而雙歧桿菌和乳酸桿菌的數量顯著增加(P<0.05)，在免疫指標上，血清IFN-γ和IL-2的含量顯著高于CON組(P<0.05)，NDV抗體效價提高(P<0.05)。結果表明，枳術粉可顯著提高蛋雛雞的生長性能,優(yōu)化腸道微生態(tài)結構，提高免疫性能。

枳實；白術；生長性能；免疫；雛雞

枳術粉(Zhizhu fomulation,ZHF)，源于張元素創(chuàng)制的脾胃病代表方劑——枳術丸，枳實(炒)和白術(炒)的比例為1∶2，該方具有治痞、消食、強胃之功效，按照該比例粉碎中藥制得枳術粉。現代藥理學研究表明，枳術丸可促進正常小鼠胃排空和腸推進速度，改善脾虛便秘模型小鼠的消化功能紊亂，并顯著增強食欲，提高胃動力[1-2]。另外有研究顯示，枳術丸(粉)重用白術，具有增強機體免疫的作用[3]。中藥作為新型的飼料添加劑資源，可有效替代抗菌藥物，減少因濫用抗菌藥物引發(fā)的畜禽耐藥性及藥物殘留問題。但是，目前尚未見到枳術丸(粉)應用于畜禽養(yǎng)殖當中的報道，本試驗旨在研究枳術粉對蛋雛雞生長性能及免疫功能的影響，為其在家禽生產上的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗動物和試驗設計 按照單因素隨機分組方式，選取180只1日齡健康海塞克蛋雛雞，隨機分為3組，每組3個重復，每重復20只。Ⅰ組為對照組(control group，CON)，飼喂基礎日糧，Ⅱ、Ⅲ組為試驗組，在基礎日糧的基礎上分別添加10 g/kg、20 g/kg的枳術粉(10 g/kg ZHF、20 g/kgZHF)，所有雞只自由采食和飲水，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1[4]。

試驗雞采用籠養(yǎng)，24 h光照，自由采食及飲水，通風采用排氣扇換氣，常規(guī)免疫程序免疫。

1.1.2 試驗用藥 枳實(炒)和白術(炒)購于安國藥材市場，按照1∶2的比例粉碎，過40目篩，備用。

1.2 方法

1.2.1 盲腸內容物大腸埃希菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌的檢測 參照文獻[5]，于21 d和42 d隨機在各重復中取3只試驗雞處死，在無菌實驗臺內無菌采集其盲腸內容物0.5 g，置于盛有9 mL稀釋液的試管中，渦旋混勻30 s，取適當稀釋濃度的稀釋液接入3種培養(yǎng)基中，每個稀釋度每種培養(yǎng)基各做3個重復，大腸埃希菌采用麥康凱培養(yǎng)基有氧培養(yǎng)24 h，雙歧桿菌和乳酸桿菌分別采用BBL、LBS培養(yǎng)基在厭氧條件下培養(yǎng)48 h，37℃恒溫培養(yǎng)，進行活菌計數。

1.2.2 生長性能的測定 以重量為單位，于試驗開始、第21天和第42天的清晨稱空腹雞只的體質量，每周記錄給料量和料槽中的剩余飼料質量，用于計算飼料轉化率(料重比)。

料重比=采食量/體增質量

1.2.3 免疫指標的測定 于21、28、35、42日齡時，每個重復隨機選取5只，翅下靜脈采血，分離血清，并進行倍比稀釋，采用V型血凝板檢測血清中的NDV血凝抑制抗體效價。

于21日齡和42日齡時，每個重復隨機選取5只雞，翅下靜脈采血，分離血清，血清中IFN-γ和IL-2的含量測定按照 ELISA試劑盒操作進行。

1.2.4 數據分析 試驗數據經Excel處理，采用SPSS17.0軟件進行方差分析，結果以平均值±標準差表示，用Duncan法進行數據間的多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結果

2.1 ZHF對蛋雛雞生長性能的影響

在整個試驗過程中，給藥組的體增重都顯著高于陰性對照組(P<0.05)，但是高劑量組和低劑量組之間無顯著差異(P>0.05)。7 d～21 d，試驗組和陰性對照組的飼料轉化率之間無顯著差異(P>0.05)，但是在21 d～42 d，給藥組的飼料轉化率顯著低于陰性對照組(P<0.05)，但是高低劑量組之間無顯著差異(P>0.05)(表2)。

2.2 ZHF對盲腸內容物微生物數量的影響

結果顯示，在整個試驗期間，ZHF組的盲腸內大腸埃希菌的數量顯著低于陰性對照組(P<0.05)，但是兩個ZHF組之間無顯著差異(P>0.05)。在21 d之后，添加藥物組的乳酸桿菌的數量顯著高于陰性對照組(P<0.05)，但是高低劑量的藥物組之間無顯著差異(P>0.05)。而高劑量ZHF組的雙歧桿菌的數量在21 d時顯著高于其他兩個組(P<0.05)，但是在42 d時3個組之間無顯著差異(P>0.05)(表3)。

表1 基礎日糧組成及營養(yǎng)水平Table 1 Ingredients and nutritional composition of the basal pretreatment and treatment diets

注：每千克復合預混料含：維生素A 1 420 IU，維生素D2190 IU，維生素E 9.5 IU, 維生素K 0.38 mg，維生素B11.0 mg， 維生素B23.4 mg，維生素B62.8 mg，維生素B120.009 mg，生物素0.14 mg，葉酸0.52 mg，泛酸9.4 mg，煙酸26 mg，膽堿1 225 mg，鐵75.0 mg，錳56.0 mg，鋅38.0 mg，銅5.0 mg，碘0.35 mg，硒0.14 mg。
Note：Premix provided per kilogram of diet：Vitamin A,1 420 IU;Vitamin D2,190 IU;Vitamin E,9.5 IU;Vitamin K, 0.38 mg;Vitamin B1,1.0 mg;Vitamin B2, 3.4 mg;Vitamin B6, 2.8 mg;Vitamin B12,0.009 mg;Biotin,0.14 mg;Folic acid,0.52 mg;Pantothenic acid,9.4 mg;Niacin,26.0 mg;Choline (as choline chloride),1 225 mg;Iron(FeSO4·H2O),75.0 mg;Manganese(MnSO4·7H2O),56.0 mg;Zinc(ZnSO4·7H2O),38.0 mg;Copper(CuSO4·5H2O), 5.0 mg;Iodine(KI), 0.35 mg;Selenium(Na2SeO3),0.14 mg.

表2 ZHF對蛋雛雞生長性能的影響Table 2 Effects of ZHF on growth performance of chicks

注：角標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

2.3 ZHF對雛雞免疫性能的影響

2.3.1 ZHF對血清NDV抗體效價的影響 在21 d 時，3個試驗組的抗體效價無顯著性差異(P>0.05)，但是在試驗進行至28 d之后，ZHF處理組的NDV抗體效價顯著提高，在35 d時，高劑量的ZHF組的NDV抗體效價顯著高于其他兩組(P<0.05)，在42 d時，兩個ZHF組之間的NDV抗體效價無顯著性差異(P>0.05)，但卻都顯著高于陰性對照組(P<0.05)。在28 d和35 d的時候，20 g/kg ZHF組的ND抗體效價顯著高于10 g/kg劑量組和陰性對照組(P<0.05)(表4)。

2.3.2 ZHF對血清中IL-2 和IFN-γ含量的影響 由結果可知，在試驗的兩個采樣時間，10 g/kg ZHF組和20 g/kg ZHF組的IL-2含量均顯著高于陰性對照組(P<0.05)，但是僅在42 d時高劑量組顯著高于低劑量組(P<0.05)，而在21 d時2個組無顯著性差異(P>0.05)。血清中IFN-γ的含量在21 d時3個組之間無顯著性差異(P>0.05)，但是到了42 d時，20 g/kg ZHF組的IFN-γ含量顯著高于10 g/kg ZHF組和陰性對照組(P<0.05)(表5)。

表3 ZHF對蛋雛雞盲腸內容物微生物數量的影響Table 3 Effects of ZHF on cecal microbial population of chicks lg(CFU·g-1)

注：角標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同寫字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表4 ZHF對蛋雛雞血清新城疫病毒抗體效價的影響Table 4 Effects of ZHF on NDV HI Ab titers of chicks

注：角標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：The same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表5 ZHF對蛋雛雞血清IL-2 和IFN-γ含量的影響Table 5 Effect of ZHF on seral IL-2 and IFN-γ contents of chicks ng/L

注：角標相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05).

3 討論

中藥在中國應用歷史悠久，中藥用于防治家禽疾病和增強機體抵抗力可以追溯到明清時代[6]。枳術粉是炒白術和炒枳實以2∶1的比例粉碎而得，能健脾舒胃，增強機體的免疫力。有研究顯示，使用不同比例白術和枳實(1∶1、1∶2、2∶1)的水煎液后發(fā)現， 2∶1組食物在小腸內停留時間最長，使食物在腸內得以充分消化吸收，這可以解釋枳術粉能“治痞、消食、強胃”的功效[7]。來源于枳實的新橙皮苷可以有效保護胃黏膜并且具有調節(jié)功能性腹瀉的作用[8]。枳術丸(即本文中的枳術粉)還能能夠改善消化機能紊亂模型小鼠出現的脾胃虛弱癥狀，增強小鼠胃排空和促進腸平滑肌的推進性蠕動，顯著增加小鼠的食欲[9]。在本次試驗過程中，枳術粉添加組的雛雞平均日增重顯著高于陰性對照組，在21 d～42 d期間，給藥組的飼料轉化率顯著低于陰性對照組，這與趙燕飛等[6]報道的白術和白術多糖均可以提高斷奶仔豬的平均日增重結果相符，這可能就是因為藥物增強了機體的脾胃吸收運化的功能，從而增加了飼料利用率。

文貴輝等[10]研究了白術粗多糖對櫻桃谷肉鴨腸道微生物的影響，發(fā)現日糧中添加白術多糖能明顯改善肉鴨腸道微生物區(qū)系，促進有益微生物的生長并抑制有害微生物的繁殖。劉又嘉等[11]的研究表明，含有白術的七味白術散超微粉劑可以有效地增加小鼠腸道中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數量,同時限制大腸埃希菌和沙門菌的生長，這可能跟中藥白術當中含有的多糖成分有關。本次研究表明，添加枳術粉組的雛雞腸道大腸埃希菌數量顯著低于陰性對照組，而乳酸桿菌的數量顯著高于陰性對照組，說明枳術粉的添加可以有效改善雛雞腸道菌群結構，這與前人的研究結果一致。枳術粉除了可以調節(jié)胃腸道的運動，改善營養(yǎng)物質的吸收，還可以優(yōu)化腸道菌群的結構，說明枳術粉做為中藥添加劑應用于畜禽養(yǎng)殖具有巨大潛力。

IL-2是機體調控免疫應答的重要因子，參與CD4+T和CD8+T細胞的活化增殖以及NK細胞的活化，參與抗體的分泌免疫因子[12]，IFN-γ具有抗病毒、免疫調節(jié)和抗腫瘤的作用，本次研究結果表明，枳術粉組的IFN-γ含量顯著高于陰性對照組。盧一松等[13]的研究顯示，從中藥白術中提取的多糖成分可以促進小鼠血清IFN-γ的含量。Qiu Y等[14]的研究結果顯示，添加白術多糖可以顯著增加外周血淋巴細胞中IFN-γ的mRNA的表達量。Guo L等[15]研究表明，給老年大鼠添加白術多糖提取物可以有效提高機體的免疫力并加強心臟的功能。這些結果與本次的研究結果一致，說明枳術粉對動物機體的免疫水平有確切的提高作用。NDV抗體效價是機體特定體液免疫應答的指示指標，提高NDV的抗體效價在傳統(tǒng)中藥免疫調節(jié)作用的研究中已經很普遍[16-17]。候凱儷等[18]發(fā)現在梅嶺土雞的日糧中添加白術水煎劑可以顯著提高NDV抗體效價，這和本試驗研究結果一致。枳術粉增強機體免疫的機理主要在于此方中重用白術，而白術多糖的免疫調節(jié)作用表現明顯，加上枳實調節(jié)胃腸的吸收功能，能使動物表現為生長性能提高。

綜上所述，在蛋雛雞日糧中添加枳術粉可以提高雞的生長性能，優(yōu)化腸道微生物的結構，有效改善機體的免疫性能，可以在臨床上作為替代抗菌藥物的免疫調節(jié)劑進行使用。

[1] 李 冀,孫琳琳,柴劍波.淺談李東垣對枳術丸的運用[J].福建中醫(yī)藥,2005,36(6):50-51.

[2] 李曉玲,張聲生,楊 成,等.枳術丸對功能性消化不良大鼠胃平滑肌收縮反應及胃促生長素受體蛋白表達的影響[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2016,36(2):210-215.

[3] 侯家玉.中藥藥理學[M].2版.北京：中國中醫(yī)藥出版社,2007：105.

[4] 趙國先,邵麗瑋,馮志華,等.刺五加多糖對蛋雛雞生長性能及血清免疫指標的影響[J].飼料研究,2016,39(17):15-19.

[5] Zhao X H,He X,Yang X F,et al.Effect of Portulaca oleracea extracts on growth performance and microbial populations in ceca of broilers[J].Poult Sci,2013,92:1343-1347.

[6] 趙燕飛,汪以真,王靜華.白術、微米白術及白術多糖對斷奶仔豬生長性能和免疫功能的影響[J].中國畜牧雜志,2012,48(13):56-59.

[7] 鄢順琴,鳳良元,黃德武,等.枳術丸對胃排空腸推進作用的影響[J].中成藥,1996,18(4):30-32.

[8] Lee J H,Lee S H,Kim Y S.Protective effects of neohesperidin and poncirin isolated from the fruits of poncirus trifoliate on potential gastric disease[J].Phytothera Res,2009，23:1748-1753.

[9] 徐小平.枳術丸的藥效學研究[J].陜西中醫(yī)學院學報,2000,23(2):43-44.

[10] 文貴輝,李麗立,張 彬,等.白術粗多糖對櫻桃谷鴨腸道微生物的影響[J].飼料研究,2010,33(7):62-65.

[11] 劉又嘉,肖新云,鄧艷玲,等.七味白術散與酵母菌聯用對菌群失調腹瀉模型小鼠腸道乳酸桿菌多樣性的影響[J].航天醫(yī)學與醫(yī)學工程,2016,28(03):23-28.

[12] Gaffen S L,Liu K D.Overview of interleukin-2 function,production and clinical applications[J].Cytokine,2004,3:109-123.

[13] 盧一松,徐 偉,張岑容,等.含白術多糖油乳劑對口蹄疫疫苗免疫的增強作用[J].中國獸醫(yī)學報,2016,36(6):928-932.

[14] Qiu Y,Hu Y L,Cui B A,et al.Immunopotentiating effects of four Chinese herbal polysaccharides administered at vaccination in chickens[J].Poult Sci,2007，86:2530-2535.

[15] Guo L,Sun Y L,Wang A H,et al.Effect of polysaccharides extract of rhizoma atractylodis macrocephalae on thymus,spleen and cardiac indexes,caspase-3 activity ratio,Smac/DIABLO and HtrA2/Omi protein and mRNA expression levels in aged rats[J].Mol Biol Rep,2012，39:9285-9290.

[16] Dong X F,Gao W W,Tong J M,et al.Effect of polysavone (Alfalfa Extract) on abdominal fat deposition and immunity in broiler chickens[J].Poult Sci,2007，86:1955-1959.

[17] Li S P,Zhao X J,Wang J Y.Synergy ofAstragaluspolysaccharides and probiotics (LactobacillusandBacilluscereus) on immunity and intestinal microbiota in chicks[J].Poult Sci,2009，88:519-525.

[18] 侯凱儷,翟利娟,葛佳靜,等.黃芪、白術水煎劑對雞新城疫疫苗免疫效果的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2012,34(5):27-29.

EffectofDietaryAdditionofZHFonGrowthPerformance,CecalMicrobialPopulationsandImmunityinChicks

LI Qiang1,XIAO Na2,YANG Chao2,LIU Xiao-bao3, ZHAO Xing-hua1,LIU Ju-xiang1, HE Xin1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding,Hebei,071000,China;2.DingzhouAnimalHealthInspection,Dingzhou,Hebei,073000,China;3.BaodingVocationalandTechnicalCollege,Baoding,Hebei,071000,China)

The present study was conducted to determine the effects ofRhizomaAtractylodismacrocephalaeandAurantiiimmaturusFructus(Zhizhu Herbal Formula in China,ZHF) as a dietary additive on growth performance,cecal microbial populations and immunity in chicks.180 Hisex chicks were randomly assigned to three treatments.Treatment 1(control group CON) was fed with corn-soy based diets only;treatment 2 and 3 were supplemented with 10 g/kg ZHF and 20 g/kg ZHF,respectively.The results showed that body weight gains (BWG) of ZHF supplementation groups were significantly higher than the CON group,but the feed conversion ratio (FCR) was lower (P<0.05).FewerE.coliwere recovered from ceca of chicks provided with ZHF (P<0.05) and the quantities ofLactobacillusandBifidobacteriumof ZHF were significantly (P<0.05) higher than that of CON.The IFN-γ and IL-2 were significantly higher in ZHF than in CON (P<0.05).These results suggested that ZHF administration in feed displayed modulation effects on immunity and the cecal bacterial community.

RhizomaAtractylodismacrocephalae;AurantiiimmaturusFructus;growth performance;intestinal microbiota; chick

2016-12-08

河北省科技計劃項目(13226624);河北省現代農業(yè)產業(yè)技術體系蛋雞產業(yè)創(chuàng)新團隊項目；河北省高等學?？茖W技術研究項目(QN2015339)

李 強(1991-)，男，河南駐馬店人，碩士研究生，主要從事新獸藥研發(fā)工作。*

S853.75

A

1007-5038(2017)10-0078-05