靳麗麗 王曉偉 邵春燕 駱群

化學(xué)發(fā)光法檢測人類免疫缺陷病毒抗體高值陰性樣本的分析

靳麗麗 王曉偉 邵春燕 駱群

目的 分析化學(xué)發(fā)光法（chemiluminescence immunoassay，CLIA）檢測人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體高值陰性樣本是否有潛在危險性。方法 用CLIA試劑在臨床標(biāo)本中篩選出HIV抗體0.3＜S/CO（absorbance signal of sample/cut off value）＜0.9的血清樣本，用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）復(fù)查，將ELISA法陽性反應(yīng)標(biāo)本用蛋白印跡（Westernblot，WB）確證并分析結(jié)果。結(jié)果用CLIA試劑從64 425份臨床標(biāo)本中篩查出CLIA檢測HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的血清樣本134例。其中ELISA試劑有陽性反應(yīng)的標(biāo)本2例，且此2例患者4周后復(fù)查均為陰性。結(jié)論 CLIA檢測HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的樣本可直接發(fā)放陰性結(jié)果，無潛在危險性。

化學(xué)發(fā)光 酶聯(lián)免疫吸附法 人類免疫缺陷病毒抗體 蛋白印跡

艾滋病又稱獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），是一種危害極大的傳染病。人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）抗體在人體潛伏期平均8～9年，患AIDS以前可以無癥狀生活和工作很多年，是患者術(shù)前及輸血前必查傳染病項目之一。近年HIV感染率呈上升趨勢，由于存在檢測窗口期、隱匿性感染、操作技術(shù)水平等因素，防范經(jīng)血傳播AIDS成為全球關(guān)注的焦點(diǎn)[1]。作為一個發(fā)展中國家，中國已經(jīng)把控制和預(yù)防艾滋病毒/艾滋病作為其公共衛(wèi)生保健的最重要問題[2]。而臨床HIV抗體S/CO在0.3～0.9的樣本，未達(dá)到臨界值但處于高值狀態(tài)，此部分樣本是否有潛在危險性，檢測人員及臨床醫(yī)生對此提出疑問。為此，筆者對化學(xué)發(fā)光（chemiluminescence immunoassay，CLIA）檢測HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的樣本用酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）進(jìn)行復(fù)測，對是否存在潛在危險進(jìn)行分析。

材料與方法

1 材料 2013年1月～2014年12月本院臨床患者血清標(biāo)本64 425份，年齡19～60歲。

2 試劑 美國強(qiáng)生公司HIV抗體CLIA檢測試劑盒（批號3040、3055、3100、3140、3160 ）；意大利索林公司HIV抗體ELISA診斷試劑盒（批號D163510、D148210、D223610、D249010、D270710）；MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗體檢測試劑盒（批號IMT1404001、IMT1404002）。

3 儀器 愛康公司Uranus AE 280全自動酶免分析儀；強(qiáng)生公司Vitros3600全自動免疫分析儀；MP全自動免疫印跡分析儀。

4 方法 首先采用CLIA試劑從64 425份臨床標(biāo)本中篩選出HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的血清樣本，再用ELISA復(fù)查，將ELISA試劑有陽性反應(yīng)的標(biāo)本送解放軍三〇二醫(yī)院采用蛋白印跡（ Westernblot，WB）試驗確證并分析結(jié)果。

結(jié) 果

采用CLIA試劑從64 425份臨床標(biāo)本中篩查出HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的血清樣本134例。CLIA檢測HIV抗體0.3＜S/CO＜0.6時ELISA結(jié)果均為陰性無送確證標(biāo)本，CLIA檢測HIV抗體0.6＜S/CO＜0.9的32例樣本檢測結(jié)果見表1。當(dāng)CLIA檢測HIV抗體0.6≤S/CO＜0.7及0.8≤S/CO＜0.9時ELISA陽性結(jié)果各1例，確證結(jié)果均為不確定。這2例患者4周后復(fù)查確證結(jié)果均為陰性。

表1 CLIA檢測HIV抗體0.6＜S/CO＜0.9的樣本與ELISA及確證結(jié)果的對比

討 論

目前全球艾滋病流行仍在繼續(xù)蔓延，我國艾滋病疫情仍呈上升趨勢，且逐漸從有高危行為人群向一般人群擴(kuò)散。開展HIV抗體檢測是發(fā)現(xiàn)病原并進(jìn)行有效管理的基礎(chǔ)[3]。HIV抗體是患者術(shù)前必查項目之一，但是由于存在窗口期及檢測方法局限性的影響，目前按國家標(biāo)準(zhǔn)，市售檢測試劑盒尚不能100%檢測出血液中病毒[4]。因此檢驗人員及臨床醫(yī)生對一些低于臨界值高值狀態(tài)的樣本是否有潛在危險提出疑問。

我們初篩實驗室選擇ELISA法或CLIA法檢測HIV抗體。ELISA檢測HIV抗體的原理是采用雙抗原夾心法和雙抗體夾心法，四代試劑可以聯(lián)合檢測抗原及抗體，ELISA成本低、特異性好，但耗時較長。CLIA法是依據(jù)化學(xué)檢測體系中待測物濃度與體系的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在一定條件下呈線性定量關(guān)系的原理，具有穩(wěn)定快速、操作簡單、自動化程度高、高靈敏度和寬線性范圍的優(yōu)勢，廣泛適用于臨床抗原和抗體的免疫學(xué)定量檢測[5]。為確保 HIV 抗體檢測的準(zhǔn)確性，篩及確認(rèn)試劑必須是國家食品藥品 管理局（SFDA）注冊批準(zhǔn)、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。HIV抗體檢測流程及結(jié)果判定必須依據(jù)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行[6]。

本實驗室用CLIA檢測HIV抗體在0.6≤S/CO＜0.7及0.8≤S/CO＜0.9內(nèi)ELISA復(fù)查S/CO＞1的

標(biāo)本各為1例，確證結(jié)果均為不確定，且這2例患者4周后復(fù)查確證結(jié)果均為陰性?？紤]到本院以血液病及腫瘤患者為主，再有少部分孕婦，其疾病特殊性導(dǎo)致HIV抗體檢測值稍偏高。用ELISA試劑復(fù)查大量樣本，造成試劑浪費(fèi)，增加患者等候時間。醫(yī)院或檢驗機(jī)構(gòu)若用化學(xué)發(fā)光法作為臨床HIV抗體的篩查檢測，為控制成本，可對CLIA檢測HIV抗體0.3＜S/CO＜0.9的樣本直接發(fā)放陰性結(jié)果。

1 馮健亮，翁遠(yuǎn)橋，陳日明，等. 2種酶聯(lián)免疫試劑篩查血液抗-HIV應(yīng)用比較[J]. 中國輸血雜志，2012，25（6）：568-569.

2 Bi XH，Ning HX，Wang TT，et al. Comparative Performance of Electrochemiluminescence Immunoassay and EIA for HIV Screening in a Multiethnic Region of China[J]. PLoS One，2012，7（10）：e48162.

3 鄭艷麗.HIV抗體檢驗影響因素的分析[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（2）：354 – 355.

4 王銳，韓玲，趙偉萍.20例輸血感染安全引起的思考[J].中國輸血雜志，2002，15（3）：216-218.

5 吳風(fēng)武，何治柯，羅慶堯，等.化學(xué)發(fā)光分析新進(jìn)展[J].分析測試學(xué)，2000，19（1）：81-87.

6 曹玉梅. HIV抗體20例初篩陽性與確認(rèn)陽性之間的關(guān)系[J].中國社區(qū)醫(yī)師，2014，30（32）：212-214.

Ob jective To reveal the potential risk of the negative samples near the critical value in detection of human immunodeficiency virus antibody by chemiluminescence immunoassay. Method The samples were selected by chemiluminescence immunoassay（CLIA） for antibodies against HIV in which absorbance of the sample's cutoff value（S/CO）between 0.3 and 0.9，and checked by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. Result One hundred and thirty-four samples over 0.3＜S/CO＜0.9 were screened from 64425 clinical samples by CLIA. Among them，2 cases were positive withr ELISA. The two positive cases，however，turned to be negative four weeks later. Conclusion Detection of CLIA HIV antibodies based on the threshold of 0.3＜S/CO＜0.9 will be able to ensure the safety in HIV diagnosis.

Chemiluminescence immunoassay Enzyme linked immunosorbent assay HIV antibody Western blot

R373 R446.11

A

1671-2587（2017）05-0508-02

Confirmatory Tests of Ne gative Samples Near the Critical Value i n Human Immunodeficiency Virus Antibody Detection by Chemiluminescence Immunoassay JIN Li-li，WANG Xiao-wei，SHAO Chun-yan，et al. Departmeng of Blood Transfusion Chinese PLA 307 Hospital，Beijing 100071

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.030

100071 北京市解放軍三〇七醫(yī)院輸血科

靳麗麗（1988–），女，檢驗技師，學(xué)士，主要從事傳染病檢測工作，（Tel）18141903126（E-mail）zhaoning2008061106@126.com。

駱群（1967–），男，主要從事臨床輸血與研究，（E-mail）luoq66@aliyun.com。

2017-03-10）

（本文編輯：王敏）