姜蓓蓓 徐志華 周軍兵 耿雪芹

Galileo全自動血型儀在血站血型檢測中的應(yīng)用

姜蓓蓓 徐志華 周軍兵 耿雪芹

目的 評價Galileo全自動血型儀在批量檢測ABO和RH血型中的應(yīng)用價值。方法 應(yīng)用Galileo全自動血型儀檢測無償獻血者標(biāo)本，統(tǒng)計ABO、RH血型的首次判讀情況，并對正反定型不一致從凝塊、重度溶血、重度脂血等干擾因素角度進行分析。結(jié)果 全自動血型儀對129 569例標(biāo)本ABO 血型判讀正確率為99.86%，對RH血型判讀正確率達(dá)99.98%。凝塊、重度溶血脂血標(biāo)本均對儀器加樣有干擾，影響結(jié)果判讀；對抗體反應(yīng)弱及正反定型不一致的標(biāo)本，需手工復(fù)查、判讀結(jié)果。結(jié)論 全自動血型儀具有自動化、規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化、批量化等優(yōu)點，能有效減少人為誤差，可以發(fā)現(xiàn)亞型及鹽水不規(guī)則抗體。

Galileo全自動血型儀 血站 血型檢測

我國《獻血者健康檢查要求》（GB18467-2011）中規(guī)定，血站必須對獻血者血液標(biāo)本進行ABO及RH血型檢測。血型鑒定常用方法有平板法和試管法，缺點是操作、結(jié)果判定需要人工參與，在標(biāo)本量大時缺點尤為明顯。輸血技術(shù)的發(fā)展必然對血站實驗室檢測提出快速、準(zhǔn)確和標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化、自動化的要求。為此，我國很多血液中心和血站相繼采用全自動血型儀進行血型檢測工作[1-3]，本站應(yīng)用美國美德聲科學(xué)技術(shù)公司的Galileo全自動血型儀對獻血者進行ABO、RH血型檢測及不規(guī)則鹽水抗體篩查?，F(xiàn)對血型儀的檢測結(jié)果及影響因素進行統(tǒng)計分析，報告如下。

材料與方法

1 標(biāo)本來源 鹽城市中心血站于2013年1月～2015年12月收集無償獻血標(biāo)本共129 569例，每份標(biāo)本留樣5 ml，乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝。

2 儀器與耗材 Galileo全自動化血型儀；江蘇康健公司生產(chǎn)的96孔的U型微孔板；IMMUCOR公司生產(chǎn)的磁性攪拌球，富友Fu-Ro100L純水機。

3 試劑 單克隆抗-A、抗-B血清（上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號20120814、20121020、20130510等）；RhD（IgM）血型定型試劑（美德聲科學(xué)技術(shù)公司，批號NDMG06303；上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號20131105、20140129、20140523等）；A1、B、O紅細(xì)胞（上海血液生物醫(yī)藥有限公司，批號20125339、20135303、20135307等）；血型鑒定及不規(guī)則抗體篩查質(zhì)控品（北京金豪制藥有限責(zé)任有限公司，批號20141103、20141215、20150201等）。

4 檢測流程

4.1 微板布局：每個標(biāo)本作6孔檢測，依次是抗-A、抗-B、抗-D、Ac、Bc、Oc，每塊板檢測16個標(biāo)本。準(zhǔn)備生理鹽水，抗-A、抗-B血清，RhD抗血清，A1細(xì)胞、B細(xì)胞、O細(xì)胞，紅細(xì)胞試劑瓶中加入一顆磁珠確保細(xì)胞處于均勻懸浮狀態(tài)。

4.2 進樣與檢測：將標(biāo)本放入樣本架進樣（血型質(zhì)控置于專用質(zhì)控架上加樣）開始檢測。流程依次為：①加樣針依次吸208 μl生理鹽水（不加入板孔中，中間有空氣柱隔開），吸標(biāo)本血清50 μl加入反定型及鹽水抗體篩查孔中，吸取2 ul標(biāo)本紅細(xì)胞與208 μl生理鹽水，儀器自動稀釋，加入正定型孔中。②吸取抗-A、抗-B、抗-D各10 μl，A1c、Bc、Oc試劑紅細(xì)胞各12 μl加入相應(yīng)各孔中。加樣結(jié)束后通過自動傳送帶進行標(biāo)本傳送，并進行孵育、離心、振蕩等步驟，應(yīng)用CCD成像分析系統(tǒng)對每塊板的每個反應(yīng)孔掃描，作圖像分析和電腦數(shù)據(jù)處理和判定。

4.3 結(jié)果判讀及臨界閾值（Threshold configure Tc）設(shè)置：正定型及Rh：不凝（Tc＜27）、可疑（Tc為27～70）、凝集（4+）（Tc＞70）；反定型及Oc：不凝（Tc＜2 5）、可疑（Tc為25～28）、凝集（正常）（Tc＞28）。對儀器無法判讀的標(biāo)本，分析原因并用手工復(fù)檢血型或STAR加樣、酶標(biāo)儀檢測，無法判定的標(biāo)本送血型室進一步采用血型血清學(xué)試驗確認(rèn)。

結(jié) 果

全自動血型儀檢測結(jié)果及影響因素分析見表1～3。

表1 ABO血型檢測結(jié)果統(tǒng)計

表2 RH血型檢測結(jié)果統(tǒng)計

表3 影響血型儀檢測判讀因素

討 論

應(yīng)用全自動血型儀共檢測129 569例樣本，ABO血型判讀正確129 385例，首次判讀正確率達(dá)99.86%（＞99%），與文獻報道一致[4，5]。ABO血型有184例經(jīng)血型儀無法判定最終結(jié)果，分析原因有以下幾方面：①正反定型不符標(biāo)本25例，其中18例反定型Ac、Bc反應(yīng)弱，4例獻血者血漿中抗-A、抗-B效價較弱，并發(fā)現(xiàn)3例B亞型（其中1例確證為稀有的Bhm血型，另2例未能明確定型）；②28例單純Oc凝集，其中檢出3例不規(guī)則鹽水抗體抗-M，2例抗-Lea，2例抗-P1，其余21例均為無特異性冷抗體；③重度溶血21例，因溶血導(dǎo)致紅細(xì)胞表面抗原較弱，引起正定型無法判讀；④嚴(yán)重脂血標(biāo)本23例，皆因血漿重度乳糜引起反定型無法準(zhǔn)確判讀；⑤87例凝塊標(biāo)本，導(dǎo)致血型儀正定型無法正確加樣。

從表2可以看出，Rh血型一次準(zhǔn)確定型129 542例，首次判讀正確率達(dá)99.98%（＞99%），與文獻報道一致[4，5]。RH血型有27例無法正確判讀，其中6例RH血型無法判讀，21例初篩RhD（–）經(jīng)進一步確證為陽性，與抗-D凝集弱，導(dǎo)致血型儀判讀結(jié)果落在可疑區(qū)間，分析原因可能與不同批號抗-D（IgM）效價有關(guān)。

根據(jù)全自動血型儀檢測中遇到的問題，作者總結(jié)出以下幾個解決方案：①標(biāo)本質(zhì)量是影響實驗結(jié)果的重要因素，在標(biāo)本留樣、運輸、保存、處理等環(huán)節(jié)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程；②有凝塊的標(biāo)本，先用竹簽剔除標(biāo)本中凝塊，再檢測血型；③在標(biāo)本接收過程認(rèn)真核對，如發(fā)現(xiàn)有未抗凝完全的標(biāo)本及時處理，避免血型的二次檢測，也減少血型儀加樣針堵塞的可能；④重度溶血標(biāo)本，可采取剪血辮檢測；⑤重度脂血標(biāo)本，在成像掃描讀取反定型結(jié)果時會有干擾，可采取人工判讀；⑥微板在使用前，應(yīng)仔細(xì)檢查有無裂痕、灰塵、透光性，在放入板架時要仔細(xì)檢查是否卡到位置，這直接影響后續(xù)實驗是否中斷；⑦每天根據(jù)標(biāo)本數(shù)準(zhǔn)備足夠量試劑，檢查試劑液面是否有氣泡，氣泡會影響加樣準(zhǔn)確性；⑧ABO血球要加入磁珠，可以保證實驗運行過程血球一直處于均勻的懸浮狀態(tài)，否則血球加樣不準(zhǔn)會直接導(dǎo)致反定型無法判讀[6]；⑨因RhD試劑效價相對較高，程序多加了鹽水清洗步驟防止殘留RhD試劑，這樣避免了對后續(xù)反應(yīng)孔的干擾[7]；⑩要保證高精密儀器獲得高精確的檢測結(jié)果，完備的維護是必不可少的，除外表灰塵的擦拭，血型儀每天、每周、每月應(yīng)做定期維護，除此，還需要定期進行加樣臂加潤滑油、加樣管道浸泡等。

全自動血型儀實現(xiàn)了血型檢測的全自動化，使得血型檢測的操作更標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范和簡便化，結(jié)果直觀可靠、成像圖清晰易判斷，更易發(fā)現(xiàn)亞型及鹽水不規(guī)則抗體，同時提高了工作效率，減輕了人員負(fù)擔(dān)，降低了人為主觀因素的影響。同時微機化管理可長期保存，便于備查及資料統(tǒng)計，具有很好的溯源性。

1 陳顯，劉洲君，朱紹汶，等.全自動血型儀在血型檢測中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗，2014，16（3）：250-252.

2 靳冰，蔣學(xué)兵，劉慧珠等.STARIet IVD全自動血型儀在交叉配血中的應(yīng)用評價[J].臨床輸血與檢驗，2015，17（6）：504-506.

3 王敏，王保龍，姚萍，等. 全自動血型儀在輸血前檢查中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗，2011，13（2）：123-125.

4 胡寧克，陸歡平.全自動血型儀在血型檢測中的應(yīng)用及無法判讀結(jié)果的原因分析[J].臨床輸血與檢驗，2015，17（6）：539-540.

5 李敏芳，劉峰.采用全自動血型儀正反定型不一致的原因分析及對策[J].臨床輸血與檢驗，2013，15（1）：54-56.

6 許婷婷，何明嫡，趙磊，等.Galileo全自動血型儀在血站的應(yīng)用[J]. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（4）：484-485.

7 石紹川，劉東，李軍，等.PK7300全自動血型分析儀測定ABO血型抗體效價的初步研究[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2014，11（22）：3131-3136.

R457.1

A

1671-2587（2017）05-0515-03

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.05.033

224005 江蘇省鹽城市中心血站

姜蓓蓓（1 98 2–）女，江蘇鹽城人，主管技師，學(xué)士，主要從事血液檢測與臨床輸血工作，（Tel）18662059923（E-mail）18662059923@163.com。

2017-01-05）

（本文編輯：王敏）