陳翔，郭海波，劉婷，許景景，鄭國平（舟山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院藥品檢驗(yàn)檢測(cè)室，浙江舟山316021）

多指標(biāo)評(píng)價(jià)不同干燥工藝及切片對(duì)三葉青質(zhì)量的影響Δ

陳翔＊，郭海波，劉婷，許景景，鄭國平（舟山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院藥品檢驗(yàn)檢測(cè)室，浙江舟山316021）

目的：研究不同干燥工藝和切片對(duì)三葉青質(zhì)量的影響，優(yōu)選三葉青的干燥處理方式。方法：分別采用2種處理方式（切片、不切片）及5種干燥方法（陰干、曬干、熱風(fēng)干燥、微波干燥、冷凍干燥）對(duì)三葉青塊根進(jìn)行處理，分別干燥3.5 h～213.0 h后，以藥材中總黃酮、多糖、總多酚和β-谷甾醇的含量為指標(biāo)，對(duì)比分析不同干燥工藝對(duì)三葉青質(zhì)量的影響。結(jié)果：與不切片比較，三葉青切片后可縮短干燥時(shí)間，減少藥材中活性成分的損耗。5種干燥方法中，冷凍干燥對(duì)三葉青中活性成分保留效果最好，切片干燥后藥材中總黃酮、多糖、總多酚和β-谷甾醇的含量分別約為18.5、92.7、9.19、0.344 mg/g；微波干燥次之，隨后依次為熱風(fēng)干燥、陰干和曬干。各干燥方法間有效成分含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：不同干燥工藝對(duì)三葉青質(zhì)量有明顯影響；從成本、有效成分含量及實(shí)用性等綜合分析，三葉青宜采用切片后在60℃熱風(fēng)干燥的方式處理。

三葉青；干燥工藝；熱風(fēng)干燥；總黃酮；總多酚；多糖；β-谷甾醇

三葉青為葡萄科植物三葉崖爬藤（Tetratigma hemsleyanum Diels et Gilg）的塊根，又名金線吊葫蘆、蛇附子、石老鼠等，是一種傳統(tǒng)中草藥，具有清熱解毒、消腫止痛、化痰散結(jié)的功效[1]。其藥用記載最早見于《本草綱目》，并在各類中藥典籍[2-3]和地方藥材標(biāo)準(zhǔn)[4]中均有收載，主要用于高熱驚厥、肺炎、哮喘、咽痛、瘰疬、肝炎等癥的治療。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，三葉青還具有明顯的抗腫瘤活性[5-6]，進(jìn)一步凸顯了其藥用價(jià)值，市場(chǎng)對(duì)其關(guān)注度也不斷上升。

三葉青中化學(xué)成分種類繁多，以黃酮類、多糖類、酚酸類和甾體類成分為主，是三葉青中的主要活性物質(zhì)，具有重要的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)效益[7-8]。熊科輝等[9]曾比較了三葉青在不同干燥方式下干燥前、后總黃酮、總多酚和多糖的含量變化，發(fā)現(xiàn)干燥工藝對(duì)上述化學(xué)成分的含量具有顯著影響。但該研究僅考察了冷凍干燥、真空干燥和熱風(fēng)干燥3種方法，結(jié)果以冷凍干燥為最佳干燥方法，但該法受到投入成本高、干燥時(shí)間長、批次處理量少等因素的制約，不適合大規(guī)模推廣。同時(shí)，由于三葉青塊根較小，切片工序煩瑣，種植戶多習(xí)慣將新鮮塊根直接進(jìn)行干燥，這與規(guī)范要求[1]不符。目前，有關(guān)三葉青的研究主要集中在提取工藝[10]、化學(xué)成分[11]、藥理藥效[12]、人工栽培等方面，對(duì)三葉青干燥工藝的研究較少。因此，筆者結(jié)合藥材生產(chǎn)特點(diǎn)，以三葉青中總黃酮、多糖、總多酚和β-谷甾醇4種活性成分的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用綜合加權(quán)法，考察不同處理方式（切片、不切片）和不同干燥方法（陰干、曬干、熱風(fēng)干燥、微波干燥、冷凍干燥）對(duì)三葉青活性成分保留的影響，為三葉青藥材的產(chǎn)業(yè)化奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

BS124S電子分析天平（德國Sartorius公司）；UV2700紫外分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）；UF260電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（德國Memmert公司）；臺(tái)式真空冷凍干燥機(jī)（美國Labconco公司）；HHS11-8電熱恒溫水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；H2500R高速離心機(jī)（湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司）；111B高速中藥粉碎機(jī)（瑞安市永歷制藥機(jī)械有限公司）；P70D20TL-D4微波爐（廣東格蘭仕集團(tuán)有限公司）；KQ-300VDE超聲波清洗機(jī)（昆山舒美超聲儀器有限公司）；Waters ACQUITY Arc液相色譜系統(tǒng)、2424蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（美國Waters公司）。

1.2 藥材與試劑

三葉青于2016年11月中旬采集于浙江省舟山市萬花谷種植基地（為減小個(gè)體差異影響，特別選擇品種、年份、環(huán)境均一致的三葉青樣本），樣本經(jīng)本院鄭國平主任中藥師鑒定均為葡萄科植物三葉崖爬藤的塊根；蘆?。ㄅ?hào)：100080-201610，純度：92.6%）、D-無水葡萄糖（以下簡稱葡萄糖，批號(hào)：110833-201506，純度：99.9%）、沒食子酸（批號(hào)：110831-201605，純度：90.8%）、β-谷甾醇（批號(hào)：110851-201608，純度：97.0%）對(duì)照品均購自中國食品藥品檢定研究院；水為超純水，甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 加工方法

挑選形態(tài)完整、大小相近的三葉青塊根，洗凈，瀝干，一部分作為不切片樣品，另一部分切成厚度為7 mm的片狀，作為切片處理樣品。將樣品按以下5種干燥方法[13]分別進(jìn)行加工處理：（1）陰干：置于室內(nèi)陰涼通風(fēng)處；（2）曬干：置于室外陽光下晾曬；（3）熱風(fēng)干燥：置于電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，設(shè)定溫度60℃，恒溫烘干；（4）微波干燥：置于微波爐中，低火模式下間歇加熱；（5）冷凍干燥：置于冷凍干燥機(jī)內(nèi)，設(shè)定溫度為－55℃，真空度為0.02 psi（1 psi＝6.895 kPa）。除微波干燥每隔2 min翻動(dòng)1次外，其余干燥方法均每隔3 h翻動(dòng)1次，直至連續(xù)2次測(cè)定的質(zhì)量差小于1 g時(shí)終止干燥。將干燥后樣品粉碎，過3號(hào)篩，置于干燥器中，備用。

2.2 水分測(cè)定

取不同干燥方法下的三葉青粉適量，按照2015年版《中國藥典》（四部）水分測(cè)定法項(xiàng)下第二法[14]測(cè)定。結(jié)果，各樣品的水分含量均低于12%，結(jié)果見表1。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 總黃酮含量

表1 不同干燥工藝樣品水分測(cè)定結(jié)果Tab1 Determination results of moisture content of samples by different drying technologies

（1）蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：參照沙棘總黃酮含量測(cè)定方法[15]，以蘆丁質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y＝10.660 1x+0.030 6（r＝0.999 1）。結(jié)果表明，蘆丁檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.017 3～0.086 5 mg/mL。

（2）供試品溶液制備：取三葉青粉約2 g，精密稱定，置于錐形瓶中，加75%乙醇20 mL，超聲（功率：300 W，頻率：40 kHz）提取2次，每次30 min，濾過；濾液合并至50 mL量瓶中，加75%乙醇定容，即得。

（3）含量測(cè)定：精密量取供試品溶液1 mL，置于10 mL量瓶中，顯色處理，測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算三葉青總黃酮含量。

2.3.2 總多酚含量

（1）溶液制備：①對(duì)照品溶液。精密稱取沒食子酸對(duì)照品13.19 mg，置于50 mL量瓶中，加乙醇溶解，搖勻，即得。②供試品溶液。同“2.3.1（2）”項(xiàng)下方法制備。

（2）方法學(xué)考察：①標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。分別精密量取0.5、0.8、1.2、1.5、2.0 mL的對(duì)照品溶液，置于25 mL量瓶中，參考劉丹等[16]報(bào)道的方法，以沒食子酸質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y＝8.249 3x－0.025 7（r＝0.998 4）。結(jié)果表明，沒食子酸檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.004 8～0.019 1 mg/mL。②精密度試驗(yàn)。取對(duì)照品溶液測(cè)定5次，記錄吸光度，計(jì)算RSD為1.31%（n＝5）。③重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取同一樣品（切片，陰干）6份，按“2.3.1（2）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算總多酚含量的RSD為2.04%（n＝6）。④準(zhǔn)確度試驗(yàn)。精密稱取已知含量的樣品（切片，陰干）9份，每份約1.0 g，分別按已知含量的80%、100%、120%3個(gè)水平加入對(duì)照品適量，按“2.3.1（2）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為96.21%（RSD＝1.80%，n＝9）。

2.3.3 多糖含量

（1）多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：參考黃精多糖含量測(cè)定方法[15]，以葡萄糖質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光度為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y＝50.558 9x－0.0219 9（r＝0.997 6）。結(jié)果表明，葡萄糖檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.004 2～0.042 1 mg/mL。

（2）供試品溶液制備：取三葉青粉約0.5 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加40 mL水，沸水浴中加熱2 h，放冷，定容，離心（轉(zhuǎn)速：5 000 r/min，半徑：9.6 cm）10 min；精密量取上清液5 mL，加無水乙醇20 mL，4℃靜置過夜，離心（轉(zhuǎn)速：6 000 r/min，半徑：9.0 cm）5 min，棄上清；沉淀用80%乙醇洗滌后離心（轉(zhuǎn)速：6 000 r/min，半徑：9.0 cm）5 min，重復(fù)3次；沉淀用水溶解，定容至25 mL量瓶，即得。

（3）含量測(cè)定：精密量取供試品溶液2 mL，置于10 mL具塞試管中，顯色處理，測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算三葉青多糖含量。2.3.4β-谷甾醇含量

（1）色譜條件：色譜柱為島津Inertsil ODS-3（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇[17]；流速為0.7 mL/min；柱溫為30℃；漂移管溫度為40℃；載氣壓力為40 psi；進(jìn)樣量為10 μL。

（2）溶液制備：①對(duì)照品溶液。精密稱取β-谷甾醇對(duì)照品18.21 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。②供試品溶液。取三葉青粉約2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入氯仿50 mL，浸泡1 h，超聲（功率：300 W，頻率：40 kHz）30 min，濾過；濾液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。

（3）方法學(xué)考察：①標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。分別精密吸取1、2、5、8、10 μL對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定色譜峰面積。以β-谷甾醇峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)（y）、對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y＝1.186 1x－5.584 0（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，β-谷甾醇檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.176 6～1.766 4 μg/mL。②精密度試驗(yàn)。取同一份供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，計(jì)算RSD為0.42%（n＝5）。③重復(fù)性試驗(yàn)。精密稱取同一樣品（切片，陰干）6份，按“（2）②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算β-谷甾醇含量的RSD為1.87%（n＝6）。④穩(wěn)定性試驗(yàn)。精密吸取同一份供試品溶液，分別于0、2，4、8、12 h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD為1.13%（n＝5）。⑤準(zhǔn)確度試驗(yàn)。精密稱取已知含量的樣品（切片，陰干）9份，每份約1.0 g，分別按已知含量的80%、100%、120%3個(gè)水平加入對(duì)照品，按“（2）②”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為97.05%（RSD＝1.27%，n＝9）。

2.4 綜合評(píng)分結(jié)果

黃酮、多糖、多酚和β-谷甾醇均是三葉青的重要活性成分，且在藥材中含量豐富、功效明確。采用綜合加權(quán)評(píng)分法[18]，設(shè)定上述4種成分含量（Y1、Y2、Y3、Y4）的權(quán)重系數(shù)各為0.25，按綜合評(píng)分（Y）計(jì)算公式Y(jié)＝0.25Y1/Y1max+0.25Y2/Y2max+0.25Y3/Y3max+0.25Y4/Y4max，求出各干燥工藝處理后樣品的綜合評(píng)分，結(jié)果見表2。

由表2可見，與不切片比較，三葉青切片后可縮短干燥時(shí)間，減少藥材中活性成分的損耗；5種干燥方法中，冷凍干燥對(duì)三葉青中活性成分保留效果最好，切片干燥后藥材中總黃酮、多糖、總多酚和β-谷甾醇的含量分別約為18.5、92.7、9.19、0.344 mg/g。

表2 不同干燥工藝樣品中活性成分的含量比較（±s，n＝3）Tab2 Comparison of contents of active ingredients in samples by different drying technologies（±s，n＝3）

表2 不同干燥工藝樣品中活性成分的含量比較（±s，n＝3）Tab2 Comparison of contents of active ingredients in samples by different drying technologies（±s，n＝3）

處理方式切片Y1Y2Y3Y4Y不切片干燥方法陰干曬干熱風(fēng)干燥微波干燥冷凍干燥陰干曬干熱風(fēng)干燥微波干燥冷凍干燥（總黃酮，mg/g）13.5±0.31 12.3±0.31 18.1±0.42 15.1±0.31 18.5±0.38 12.2±0.30 9.14±0.17 12.3±0.20 10.5±0.30 17.0±0.42（多糖，mg/g）56.9±0.13 28.3±0.08 48.6±0.09 50.5±0.12 92.7±0.17 40.1±0.09 12.7±0.03 33.1±0.07 39.8±0.11 83.4±0.16（總多酚，mg/g）6.27±0.14 4.06±0.09 6.74±0.18 7.91±0.18 9.19±0.20 5.49±0.11 4.22±0.10 5.99±0.16 7.99±0.20 8.38±0.21（β-谷甾醇，mg/g）0.335±0.01 0.190±0.01 0.313±0.01 0.315±0.01 0.344±0.01 0.363±0.01 0.230±0.01 0.356±0.01 0.334±0.01 0.405±0.01（綜合評(píng)分）0.696 5±0.01 0.459 6±0.01 0.735 5±0.00 0.732 2±0.01 0.941 8±0.01 0.631 4±0.01 0.405 1±0.00 0.623 5±0.01 0.657 1±0.00 0.911 9±0.00

2.5 雙因素方差分析

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素方差分析，其中主效應(yīng)A為2種處理方式，主效應(yīng)B為5種干燥方法，結(jié)果見表3。

表3 主體間效應(yīng)的檢驗(yàn)結(jié)果Tab3 Test result for between-subjects effects

由表3可知，主效應(yīng)A、B對(duì)三葉青質(zhì)量均有極顯著影響（P＜0.01），而且主效應(yīng)B（5種干燥方法）影響更明顯。相同干燥方法下，切片處理的三葉青中活性成分含量均高于不切片處理的樣品，原因可能是由于切片處理后縮短了干燥時(shí)間，從而減少了總黃酮、總多酚和多糖成分的損耗。再進(jìn)一步采用Tukey HSD檢驗(yàn)法對(duì)主效應(yīng)B（將陰干、曬干、熱風(fēng)干燥、微波干燥、冷凍干燥方式依次設(shè)為B1、B2、B3、B4、B5）進(jìn)行多重比較分析，結(jié)果見表4。

由表4可知，B2（曬干）和B5（冷凍干燥）測(cè)定結(jié)果與其他方法比較均有極顯著差異（P＜0.01）；B1（陰干）與B3（熱風(fēng)干燥）、B3（熱風(fēng)干燥）與B4（微波干燥）比較均有顯著差異（P＜0.05）。這提示不同干燥方法對(duì)三葉青質(zhì)量影響較大，其中冷凍干燥效果最佳，隨后依次為微波干燥、熱風(fēng)干燥、陰干和曬干。

3 討論

干燥作為保證中藥材品質(zhì)的重要措施，是藥材加工中一個(gè)必不可少的工藝過程。目前，中藥材干燥方法可分為常溫干燥、加熱干燥和低溫干燥3大類，各類干燥方法所需時(shí)間不同，對(duì)藥材成分影響各異[19]，應(yīng)根據(jù)藥材特性和加工效率選擇合適的干燥工藝。本文通過考察不同干燥方法對(duì)三葉青中以黃酮、多糖、多酚、甾醇為代表的活性成分的影響，發(fā)現(xiàn)冷凍干燥能較好地保留三葉青中的活性成分，是最佳的干燥方法；微波干燥和60℃熱風(fēng)干燥效果相近，且稍優(yōu)于陰干；曬干對(duì)三葉青總多酚和多糖的損耗較明顯，得到的藥材質(zhì)量也明顯劣于其他干燥方法，因此不適合作為三葉青的干燥方法。

表4 主效應(yīng)B的Tukey HSD檢驗(yàn)結(jié)果Tab4 Results of Tukey HSD test of main effect B

切片處理與不切片處理的三葉青在相同干燥條件下，前者因?yàn)樵黾恿吮缺砻娣e，大幅縮短了干燥時(shí)間，藥材中的總黃酮、總多酚和多糖含量均高于后者；β-谷甾醇含量雖相對(duì)較低，但切片干燥后的三葉青藥材質(zhì)量仍優(yōu)于不切片干燥的藥材。這為藥材炮制規(guī)范中“切厚片，干燥”這一工序的合理性提供了試驗(yàn)支持。

根據(jù)上述研究結(jié)果，三葉青最佳干燥工藝為切厚片后冷凍干燥，但冷凍干燥設(shè)備成本高、批次處理量少，不適合產(chǎn)業(yè)化推廣。微波干燥雖處理時(shí)間短，但在干燥期間需間隔數(shù)分鐘取出翻動(dòng)1次，釋放熱量，待冷卻至室溫后繼續(xù)干燥，如此反復(fù)，人力成本較高；另干燥后藥材切面為淺棕色，與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中的性狀描述不符，需進(jìn)一步研究其護(hù)色工藝。陰干方法操作簡單、成本低，但干燥時(shí)間長，遇到陰雨天藥材易腐敗變質(zhì)，且暴露在環(huán)境中易受到污染。而三葉青在60℃下熱風(fēng)干燥所需時(shí)間少于冷凍干燥，干燥后藥材質(zhì)量也較優(yōu)。故綜合干燥成本、藥材質(zhì)量和產(chǎn)業(yè)推廣等各方面，筆者認(rèn)為將新鮮的三葉青塊根切片后，采用60℃熱風(fēng)干燥是較適宜的干燥工藝。

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Effects of Different Drying Technologies and Slicing on the Quality of Tetrastigma hemsleyanum by Multi-indexes Evaluation

CHEN Xiang，GUO Haibo，LIU Ting，XU Jingjing，ZHENG Guoping（Drug Inspection and Testing Laboratory，Zhoushan Institute for Food and Drug Control，Zhejiang Zhoushan 316021，China）

OBJECTIVE：To study the effects of different drying technologies and slicing on the quality of Tetrastigma hemsleyanum，and optimize the drying methods for T.hemsleyanum.METHODS：2 treatment methods（slicing and no slicing）and 5 drying methods（drying in the shade，drying in the sunlight，hot-air drying，microwave drying and freeze drying）were respectively adopted for the T.hemsleyanum root.After drying for 3.5-213.0 h，using the total flavonoids，total polyphenols，polysaccharides and β-sitosterol as indexes，effects of different drying technologies on the quality of T.hemsleyanum were comparatively analyzed.RESULTS：Compared with no slicing，sliced T.hemsleyanum can shorten the drying time and reduce the loss of active ingredients.In the 5 drying methods，freeze drying was the best for keeping the active ingredients in T.hemsleyanum.After drying，the contents of total flavonoids，polysaccharides，total polyphenols and β-sitosterol were 18.5 mg/g，92.7 mg/g，9.19 mg/g and 0.344 mg/g respectively，followed by microwave drying，hot-air drying，drying in the shade and drying in the sunlight.The contents of active ingredients had statistical significance by each drying methods（P＜0.05 orP＜0.01）.CONCLUSIONS：Different drying technologies have obvious effects on the quality of T.hemsleyanum.Slicing and hot-air drying at 60℃were suggested as suitable method forT.hemsleyanum in terms of cost，content of active ingredients and practicability.

Tetrastigma hemsleyanum；Drying technology；Hot-air drying；Total flavonoids；Total polyphenols；Polysaccharides；β-sitosterol

R283

A

1001-0408（2017）31-4441-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.31.31

舟山市公益類科技項(xiàng)目（No.2015C31045）

＊副主任藥師，碩士。研究方向：藥材加工與中藥質(zhì)量控制。電話：0580-2183120。E-mail：cx_1983@163.com

2017-04-05

2017-06-29）

（編輯：劉萍）