廖志東+鄭少秋+朱文標(biāo)

【摘要】 目的：探討EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變（SIL）分級(jí)中的應(yīng)用。方法：應(yīng)用免疫組化SP法標(biāo)記60例宮頸鱗狀上皮化生、70例低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變（LSIL）和80例高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變（HSIL）中EGFR、Ki67和P16的表達(dá)。結(jié)果：EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低。EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表達(dá)模式比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。相關(guān)性分析顯示，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與LSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均無(wú)明顯相關(guān)（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與HSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均無(wú)明顯相關(guān)（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均呈正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：應(yīng)用免疫組化SP法標(biāo)記三種蛋白可作為SIL分級(jí)的參考指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽(yáng)性率，提高診斷分級(jí)的準(zhǔn)確性。

【關(guān)鍵詞】 EGFR； Ki67； P16； 宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變； 分級(jí)

【Abstract】 Objective：To explore the application of EGFR and Ki67 and P16 staining in hierarchical diagnostic of squamous intraepithelial lesions（SIL）.Method：The SP immunohistochemical method was used to mark the 60 cases of cervical squamous metaplasia，70 cases of low-grade cervical intraepithelial neoplasia（LSIL） and 80 cases of high grade cervical intraepithelial lesions（HSIL） in EGFR，Ki67 and P16 expression.Result：The expression of EGFR，Ki67 and P16 in squamous metaplasia，LSIL and HSIL were compared，the differences were statistically significant（P<0.05），and the highest was HSIL，followed by the LSIL，and the lowest was metaplasia of squamous epithelium.EGFR，Ki67 and P16 in LSIL，compared the expression pattern of HSIL，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation analysis showed that EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in LSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05），EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05）EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL and LSIL compared with each other，all had positive correlations（P<0.05）.Conclusion：The SP immunohistochemical method is used to mark the three proteins can be used as reference for SIL classification，at the same time，combined with the distribution of LSIL and HSIL，in order to reduce the false positive rate，improve the diagnostic accuracy of classification.

【Key words】 EGFR； Ki67； P16； Squamous intraepithelial lesions； Hierarchical diagnostic

First-authors address：Chinese Medicine Hospital of Meizhou City，Meizhou 514017，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.003

隨著宮頸癌的相關(guān)研究不斷深入，已被證實(shí)從人乳頭狀瘤病毒感染到高、低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變直至原發(fā)性宮頸癌發(fā)病為一個(gè)連續(xù)的發(fā)展過(guò)程[1-2]，其中高、低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病以宮頸鱗狀上皮內(nèi)構(gòu)形不正常及細(xì)胞異型增生為特征，是宮頸鱗狀上皮的癌前病變[3-4]。同時(shí)，既往研究指出低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變（LSIL）可給予適當(dāng)?shù)闹委熞种破溥M(jìn)展，且消退率較高，而高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變（HSIL）則較難通過(guò)治療使其發(fā)生逆轉(zhuǎn)，所以較大比率病例進(jìn)展為宮頸癌，故準(zhǔn)確的診斷分級(jí)對(duì)改善患者預(yù)后具有重要的意義[5-6]。本研究聯(lián)合檢測(cè)EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮化生、LSIL及HSIL中的表達(dá)情況，旨在探討EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變分級(jí)中的應(yīng)用，現(xiàn)報(bào)道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有組織標(biāo)本均來(lái)自梅州市人民醫(yī)院2014年1月-2015年12月首次宮頸活檢手術(shù)的石蠟包埋組織，宮頸腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)參照2014年宮頸上皮內(nèi)病變WHO分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[7]，病理診斷由課題組成員分別閱片后共同確診，排除放化療史、免疫治療史及子宮疾病史，其中60例宮頸鱗狀上皮化生、70例LSIL及80例HSIL。60例宮頸鱗狀上皮化生，年齡21～72歲，平均（41.26±7.16）歲；70例LSIL，年齡22～71歲，

平均（42.17±6.35）歲；80例HSIL，年齡24～67歲，平均（39.88±6.98）歲。三組標(biāo)本的患者的年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 本組標(biāo)本用4%福爾馬林固定，脫水，石蠟包埋，切片機(jī)切片4 μm，SP法免疫組化染色，EGFR標(biāo)記采用鼠抗人EGFR單克隆抗體、P16標(biāo)記采用鼠抗人P16單克隆抗體、Ki67標(biāo)記采用鼠抗人Ki67單克隆抗體，試劑盒均來(lái)自福州邁新生物公司，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗為陰性對(duì)照，以已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) EGFR定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞漿，P16定位在細(xì)胞核和/或胞漿，Ki67定位在細(xì)胞核，均以光鏡下觀察顯示棕黃色納入為陽(yáng)性細(xì)胞，均以無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%納入為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥5%納入為陽(yáng)性，同時(shí)將陽(yáng)性組織分為3個(gè)等級(jí)：5%～25%納入為（+），>25%～50%納入為（++），>50%納入為（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)或Z檢驗(yàn)，采用Pearson相關(guān)分析方法分析EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理類型宮頸組織之間表達(dá)的相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病理類型宮頸組織中EGFR、Ki67和P16蛋白的表達(dá) EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生中陽(yáng)性率分別為16.66%、13.33%、15.00%，在LSIL中陽(yáng)性率分別為30.00%、80.00%、77.14%，在HSIL中陽(yáng)性率分別為76.25%、80.00%、98.75%。EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低，見(jiàn)表1。

2.2 EGFR、Ki67和P16蛋白在LSIL、HSIL中的表達(dá)模式 EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表達(dá)模式比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表2。

2.3 EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理類型宮頸組織中蛋白表達(dá)的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與LSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均無(wú)明顯相關(guān)（r=0.11、0.08、0.09，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與HSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均無(wú)明顯相關(guān)（r=0.10、0.08、0.08，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較，均呈正相關(guān)（r=0.35、0.48、0.47，P<0.05）。

3 討論

人乳頭狀瘤病毒感染是宮頸癌發(fā)病的主要致病因素，這與感染后導(dǎo)致宿主癌基因被激活的一系列機(jī)制有關(guān)，諸如：人乳頭狀瘤病毒的E6、E7基因可整合于宿主的基因組內(nèi)，分別引起P53、Rb蛋白的異常表達(dá)，進(jìn)而引起Ki67、P16蛋白的異常表達(dá)；EGFR是原癌基因c-erb B-1的表達(dá)產(chǎn)物，是信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵分子[8-10]。既往研究顯示，P16基因以缺失、突變方式廣泛參與腫瘤形成，如直接參與細(xì)胞周期的調(diào)控，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及分裂，其失活可能導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖[11-12]。Ki67是一種核增殖抗體，表達(dá)于GO期以外處于其他細(xì)胞周期的細(xì)胞，可作為細(xì)胞增殖標(biāo)記物用于腫瘤和反應(yīng)性增生病變的鑒別[13-14]。EGFR與其受體結(jié)合可促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化并加速細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，與腫瘤的組織學(xué)分型密切相關(guān)，已在為胃癌、乳腺癌的診斷中被應(yīng)用[15-16]。故本研究選取EGFR、Ki67和P16蛋白作為宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的標(biāo)記物。同時(shí)，選取EGFR、Ki67和P16蛋白作為宮頸鱗狀上皮化生的標(biāo)記物，宮頸鱗狀上皮化生在組織學(xué)中于SIL相似、易混淆[17-21]，以作對(duì)照。

本研究結(jié)果表明，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達(dá)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低，叢玲華等[20]、姚秀華等[21]的研究有過(guò)類似報(bào)道，本研究與其持有類似觀點(diǎn)，其指出，三種蛋白在宮頸鱗狀上皮化生等良性病變中幾乎呈陰性，而在LSIL和HSIL中呈陽(yáng)性，且隨病情進(jìn)展而陽(yáng)性強(qiáng)度增高，提示三種蛋白在高表達(dá)與宮頸癌的發(fā)展密切關(guān)系。但這并不足以用于宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變?cè)\斷分級(jí)。同時(shí)，本研究光鏡下觀察到宮頸鱗狀上皮化生中EGFR、Ki67和P16較LSIL及HSIL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目少，LSIL中EGFR較Ki67和P16陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目少，LSIL中EGFR、Ki67和P16較HSIL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目少，且主要分布于基底層，HSIL中EGFR、Ki67和P16較本組上述組織陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目多，且陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于上皮下2/3層以上及呈彌漫性分布。由此，可見(jiàn)LSIL及HSIL中EGFR、Ki67和P16陽(yáng)性數(shù)目隨病情進(jìn)展而增加，且陽(yáng)性細(xì)胞分布也隨之改變。本研究顯示，EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達(dá)兩兩比較均呈正相關(guān)（P<0.05）。提示，宮頸癌的進(jìn)展與多基因調(diào)控密切相關(guān)。故聯(lián)合檢測(cè)EGFR、Ki67和P16在LSIL和HSIL中的蛋白表達(dá)，同時(shí)結(jié)合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽(yáng)性率，提高診斷分級(jí)的準(zhǔn)確性。endprint

綜上所述，EGFR、Ki67和P16可能參與到了宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展，應(yīng)用免疫組化SP法標(biāo)記三種蛋白可作為SIL分級(jí)的參考指標(biāo)，同時(shí)結(jié)合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽(yáng)性率，提高診斷分級(jí)的準(zhǔn)確性。

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（收稿日期：2017-06-09） （本文編輯：張爽）endprint