徐國波　田秀秀　鄭華

【摘 要】目的：評價(jià)金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物抗炎活性。方法：分別以0.67 g/kg·bw/d，1.33 g/kg·bw/d和3.99g/kg·bw/d劑量連續(xù)灌胃大、小鼠30 d后，通過大鼠棉球植入試驗(yàn)、大鼠足趾腫脹試驗(yàn)以及小鼠耳腫脹試驗(yàn)，評價(jià)其清咽功能。結(jié)果：1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d組肉芽腫凈重量低于對照組；3.99 g/kg·bw/d組耳廓腫脹率低于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物，具有清咽功能。

【關(guān)鍵詞】金銀花；羅漢果；玄參；桔梗；訶子；甘草；抗炎

中圖分類號： R284 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 2095-2457（2017）20-0003-002

Study on the Effect of Six Kinds of Compound Extracts on Hibiscus

XU Guo-bo1 TIAN Xiu-xiu2 ZHENG Hua2

（1.Guangzhou Wanglaoji Health Industry Co.，Ltd.，Guangzhou Guangdong 510642，China；

2.South China Agricultural University，Guangzhou Guangdong 510642，China）

【Abstract】Objective：To evaluate the anti-inflammatory activity of honeysuckle，Mangosteen，Scrophulariaceae，Campanulaceae， Myrobalan and Radix Glycyrrhizae.Methods：After 30 days，the rats were injected with 0.67g/kg · bw/d，1.33g/kg ·bw/d and 3.99 g /kg·bw/d，respectively.，Rat toe swelling test and mouse ear swelling test， to evaluate its pharyngeal function.Results：The weight of granuloma was 1.33g/kg·bw /d and3.99g/kg ·bw/d，and the scalp swelling rate in 3.99g/kg·bw/d group was lower than that in control group（P<0.05）.Conclusion：honeysuckle，Mangosteen， Scrophulariaceae，Campanulaceae，Myrobalan，Glycyrrhiza compound extract， with pharyngeal function.

【Key words】Honeysuckle；Luohan fruit；Scrophulariaceae；Campanulaceae；Myrobalan；Licorice

咽炎是臨床上的常見病、多發(fā)病，指咽部粘膜慢性炎癥，以咽部發(fā)干、咽痛、有異物感等為主要臨床表現(xiàn)。金銀花中綠原酸、異綠原酸是主要有效成分，羅漢果含有維生素C、甜甙等，均有清熱解毒、清咽利喉作用[1-3]；玄參清熱涼血，瀉火解毒[4，5]；桔梗具有宣肺利咽[6，7]；訶子富含鞣質(zhì)，其中沒食子酸為其有效成分之一，斂肺利咽[8]；甘草清熱解毒，主含甘草甜素、甘草黃酮和甘草多糖[9]。目前對單一的成分的清咽的功能已有報(bào)道，但對以上6種提取物配伍后具有清咽功能的研究未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)根據(jù)國食藥監(jiān)?；痆2012]107 號文件中清咽功能動(dòng)物試驗(yàn)的相關(guān)要求，從大鼠肉芽腫、大鼠足趾腫脹率、小鼠耳腫脹 3 個(gè)方面研究金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物對大、小鼠清咽功能的影響，為清咽功能的保健食品開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物（折合金銀花生藥量4g/d、羅漢果生藥量3.2g/d、玄參生藥量2.8g/d、桔梗生藥量2g/d、訶子生藥量1.33g/d、甘草生藥量0.64g/d），推薦成人日服用量為8.0 g，常溫密閉置陰涼、避光、干燥處保存。試驗(yàn)時(shí)樣品均用蒸餾水配制和稀釋。

1.2 動(dòng)物

SPF級SD健康雄性大鼠80只，SPF級F1代健康雄性小鼠40只，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2013-0016，合格證編號：2008001641938、2008001641936。大鼠各平行實(shí)驗(yàn)組初始體重范圍為150～173g。小鼠各平行實(shí)驗(yàn)組初始體重范圍為19.2～21.8g。

試驗(yàn)動(dòng)物在溫度為20～25℃、相對濕度為40%～70%的本中心屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)。試驗(yàn)動(dòng)物使用許可號：SYXK（蘇）2012-0041。輻照滅菌飼料由蘇州雙獅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料科技有限公司提供，批文文號：蘇飼審（2009）05032。

1.3 儀器與試劑

電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；3-18k高速冷凍離心機(jī)，德國Sigma公司；Elx800酶標(biāo)儀，美國Bio Tek公司；3111型CO2培養(yǎng)箱，美國Thermo Fisher公司；SW-CJ-2FD型凈化工作臺，蘇州凈化設(shè)備有限公司；YLS-7C足趾容積測量儀：北京眾實(shí)迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司。

葡聚糖T-40，Baomanbio，購自上海寶曼生物科技有限公司。endprint

1.4 方法

大鼠適應(yīng)環(huán)境3天，按體重隨機(jī)分為I、II兩個(gè)大組，每個(gè)大組分為4個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組10只大鼠。I組大鼠進(jìn)行棉球植入實(shí)驗(yàn)，II組大鼠進(jìn)行足趾腫脹實(shí)驗(yàn)。

小鼠適應(yīng)環(huán)境3天，按體重隨機(jī)分為4個(gè)劑量組，每個(gè)劑量組10只小鼠。進(jìn)行小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)。

金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物推薦成人日服用量為8.0 g（按60kg體重計(jì)），設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組即0.67 g/kg·bw/d，1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d，相當(dāng)于人日推薦劑量的5倍、10倍、30倍，另設(shè)0 g/kg·bw/d對照組以無菌水代替受試物、受試樣品用無菌水配制，低、中、高劑量配置濃度為67mg/mL、133 mg/mL、399 mg/mL，按1.0mL/100g·bw灌胃。經(jīng)口每日一次給予大、小鼠相應(yīng)濃度的受試樣品，連續(xù)灌胃一個(gè)月后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測定。

1.4.1 大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)

1.4.1.1 棉球的處理

將脫脂棉球制成約20mg緊致的小棉球，經(jīng)高壓殺菌后，置于恒溫干燥箱60℃干燥3h，取出無菌條件下稱重，干燥保存，備用。

1.4.1.2 肉芽腫的形成和測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束前8天取I組大鼠，用脫毛器去大鼠兩側(cè)腹股溝處的毛，乙醚前麻醉大鼠，碘伏消毒，在無菌條件下切開大鼠兩側(cè)腹股溝皮膚，植入備用的棉球，縫合切合，連續(xù)給予受試物。試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，給受試物1h后，斷頸處死大鼠，在原縫合處剪開皮膚，剝離并取出棉球肉芽組織，置于已稱重的潔凈平皿中，恒溫干燥箱60℃開蓋干燥1h后稱重。計(jì)算肉芽腫凈量。

肉芽腫凈量（mg）=干燥后棉球肉芽腫重量-原棉球重量

實(shí)驗(yàn)組與溶劑對照組比較，肉芽腫凈量明顯下降，差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

1.4.2 大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)

1.4.2.1 致炎劑配制

用無菌蒸餾水配制濃度為1%的葡聚糖T-40，備用。

1.4.2.2 足趾腫脹及測定

實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天取II組大鼠再次給受試樣品一次，1h后，用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足趾的容積，作為0h足趾容積。然后在大鼠右后足趾皮下注入1%葡聚糖T-40 0.1mL/只，分別于1、2、4、6h測定大鼠足趾的容積，同一部位測量3次，取平均值。以不同時(shí)間所測足趾容積與致炎劑作用前的足趾容積之差為腫脹值，計(jì)算各個(gè)時(shí)間段的足趾腫脹率。

腫脹率=腫脹值/致炎前足趾容積率*100%

實(shí)驗(yàn)組與溶劑對照組比較，任一時(shí)間點(diǎn)刺激前后足趾容積容積率明顯減少，差異有顯著性，可判定該受試樣品大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

1.4.3 小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)

取小鼠，汲取二甲苯20uL，滴加在小鼠右耳外側(cè)面耳廓的中央，讓其自由擴(kuò)散，30min后，將小鼠脫頸椎處死，剪下雙耳，用9mm直徑打孔器在兩耳相同部位打下耳片并稱重，以兩耳重量之差為耳廓腫脹值，計(jì)算耳廓腫脹率。

耳廓腫脹率（%）=耳廓腫脹值/對照耳片重量*100%

實(shí)驗(yàn)組與溶劑對照組比較，耳廓腫脹率明顯減少，差異有顯著性，可判定該受試樣品小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法

用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

1.6 結(jié)果判定

大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性，同時(shí)大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)或小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果任意一項(xiàng)陽性，可判定該受試樣品具有清咽功能。

2 結(jié)果

2.1 對大鼠肉芽腫形成的影響

由表1可見，1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d組肉芽腫凈量低于0 g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），即差異顯著。

表1 金銀花等復(fù)合提取物對大鼠肉芽腫形成的影響（`x±SD ）

2.2 對大鼠足趾腫脹情況的影響

由表2可見，0.67 g/kg·bw/d、1.33 g/kg·bw/d和3.99 g/kg·bw/d組各時(shí)間點(diǎn)的大鼠足趾腫脹率與0 g/kg·bw/d組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），即差異不顯著。

表2金銀花等復(fù)合提取物對大鼠足趾腫脹情況的影響（`x±SD ）

續(xù)表2金銀花等復(fù)合提取物對大鼠足趾腫脹情況的影響（`x±SD）

2.3 對小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)的影響

由表3可見，3.99g/kg·bw/d組耳廓腫脹率低于0g/kg·bw/d組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（下轉(zhuǎn)第23頁）（上接第4頁）（P<0.05），即差異顯著。

表3 金銀花等復(fù)合提取物對小鼠耳腫脹情況的影響（`x±SD）

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，咽喉乃十二經(jīng)脈循行和聚匯的要沖，通過經(jīng)絡(luò)與五臟六腑相聯(lián)系。本研究將不同劑量的金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物連續(xù)灌胃大、小鼠30 d后，并大鼠棉球植入試驗(yàn)、大鼠足趾腫脹試驗(yàn)以及小鼠耳腫脹試驗(yàn)等方面進(jìn)行研究。

研究表明，羅漢果、玄參、桔梗、甘草等提取物對大小鼠棉球肉芽腫模型有效，結(jié)果陽性，具有抗炎的效果，本研究大鼠棉球植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性，大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性，小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。依據(jù)國食藥監(jiān)?；痆2012]107中清咽功能試驗(yàn)的結(jié)果判斷，金銀花、羅漢果、玄參、桔梗、訶子、甘草復(fù)合提取物，具有清咽功能。

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