時卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質(zhì)量法規(guī)處，河北 石家莊 050071)

國產(chǎn)與進(jìn)口血細(xì)胞處理機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量對比

時卉麗，李玉秋，程 菲，李建民，何路軍

(河北省血液中心質(zhì)量法規(guī)處，河北 石家莊 050071)

目的通過對比國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)及配套耗材與美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)洗滌制備的效果，評價國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)的性能及應(yīng)用可行性。方法抽取40袋全血,先甘油化,冰凍解凍后隨機(jī)分為2組，實驗組應(yīng)用國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，對照組應(yīng)用美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)洗滌制備，對制備的產(chǎn)品按照GB18469-2012版《全血及成分血質(zhì)量要求》相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測分析。結(jié)果2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量均符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。實驗組甘油殘留量、白細(xì)胞殘留量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但均能達(dá)到國家標(biāo)準(zhǔn)要求。結(jié)論國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品指標(biāo)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；其耗材價格相對較低，維護(hù)相對方便，可以為血站節(jié)約成本，值得大力推廣和應(yīng)用。

紅細(xì)胞；去甘油化；對比研究

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.11.025

在我國，Rh(D)陰性獻(xiàn)血者稀少，造成相應(yīng)的血液品種庫存嚴(yán)重不足，在臨床稀有血型患者輸血救治特別是大量失血患者搶救輸血時，如何保障Rh(D)陰性血患者醫(yī)療急救用血是一個十分迫切的問題[1]。深低溫冰凍保存可大幅度延長紅細(xì)胞的體外存活時間和存活率[2]，故國內(nèi)許多血站均采取甘油化Rh陰性紅細(xì)胞后，-80 ℃低溫保存。美國FDA在上世紀(jì)80年代初批準(zhǔn)冰凍保存紅細(xì)胞的有效期為10年[3]。冰凍可延長紅細(xì)胞的保存期，且具有可靠的質(zhì)量，在經(jīng)過洗滌后，紅細(xì)胞的生理形態(tài)及生化特性均無明顯改變，適合應(yīng)用于稀有血型患者的輸血治療[4]。近些年，國內(nèi)大多血站采用手工法和ACP215血細(xì)胞處理機(jī)對冰凍的紅細(xì)胞進(jìn)行解凍洗滌，但是傳統(tǒng)的手工開放式洗滌法操作步驟相對復(fù)雜，制備時間較長，受人為因素影響較大[5]。我中心最早購置的美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)近幾年也因為維修保養(yǎng)的不便以及進(jìn)口耗材的昂貴、消費者多有怨言而利用度下降[6]。血細(xì)胞處理機(jī)的國產(chǎn)化正處于逐漸摸索投入使用階段，其洗滌效果如何，是否符合質(zhì)量要求標(biāo)準(zhǔn)，實際制備效果和產(chǎn)品質(zhì)量有待探討。我中心現(xiàn)試用一種新型國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)，本研究將其制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞與美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)制備的產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行比較，以評價其可行性，報告如下。

1 材 料 與 方 法

1.1 主要材料 去白懸浮紅細(xì)胞(2 U/袋，由本中心提供)，智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號：ZHXD)配套耗材(成都佳穎)，ACP215 血細(xì)胞處理機(jī)配套耗材(美國血液技術(shù)公司)，無菌熔接片(日本泰爾茂公司)，復(fù)方甘油溶液(石家莊四藥有限公司)，9% NaCl溶液(北京博得桑特輸血技術(shù)公司)，0.9%NaCl溶液(四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司)，甘油測定試劑(自制)。所有材料、試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2 主要設(shè)備 智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號：ZHXD)，ACP215血細(xì)胞處理機(jī)，無菌接駁機(jī)(泰爾茂)，血細(xì)胞計數(shù)儀(COULTER)，765型分光光度計(上海精密科學(xué)儀器公司)，-80 ℃低溫冰箱(日本三洋SANYO)，恒溫水浴箱(上海發(fā)瑞儀器科技)，全自動細(xì)菌培養(yǎng)儀(生物梅里埃)。

1.3 紅細(xì)胞甘油化 隨機(jī)抽取6 d內(nèi)2～6 ℃保存的全血(400 mL/袋)，制備成懸浮紅細(xì)胞，放置于PVC血液保存袋內(nèi)，用無菌接駁機(jī)接駁,其紅細(xì)胞轉(zhuǎn)移到空袋中。將血袋接駁于甘油化管路,再與甘油袋相連接。將濃度57%左右的甘油緩慢加入到去白懸浮紅細(xì)胞中,邊加邊振蕩,以使紅細(xì)胞充分、均勻甘油化。室溫靜置30 min，離心去除多余的液體,將其置于-80 ℃低溫冰箱保存。

1.4 紅細(xì)胞去甘油化 將冰凍保存1年后的紅細(xì)胞從-80 ℃低溫冰箱中迅速取出,放入37 ℃恒溫水浴箱(不斷晃動至紅細(xì)胞完全融化)，解凍后隨機(jī)分為2組，每組20袋。對照組用美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)及配套耗材(REF 235)洗滌，按照去甘油化程序相關(guān)操作規(guī)程[7]進(jìn)行處理(運行程序已預(yù)先設(shè)定)。實驗組用國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)，將已解凍的冰凍紅細(xì)胞血袋與配套的去甘油化管路無菌接駁，放置在搖擺機(jī)上，啟動機(jī)器，自檢完成后選擇去甘油化程序，安裝耗材，連接洗液袋并打開所有管路夾子，開始自動洗滌。根據(jù)不同制備階段加入相應(yīng)的羥乙基淀粉和氯化鈉溶液，為了保證紅細(xì)胞滲透能力的穩(wěn)定性，應(yīng)在去甘油的洗滌過程中分別加入9%NaCl高滲溶液和0.9%NaCl等滲溶液，否則易促使紅細(xì)胞發(fā)生形態(tài)、功能的改變，增加紅細(xì)胞的破壞率。最后加入100 mL的紅細(xì)胞保存液保存紅細(xì)胞。2組分別記錄洗滌制備時間，國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)用時50 min左右，ACP215血細(xì)胞處理機(jī)用時60 min左右。

1.5 質(zhì)量檢測 參照普通洗滌紅細(xì)胞的要求稱質(zhì)量、留樣，對樣品進(jìn)行無菌接種，在全自動細(xì)菌培養(yǎng)儀內(nèi)培養(yǎng)觀察7 d，應(yīng)用COULTER AcT.5diff全自動血球計數(shù)儀檢測紅細(xì)胞的血紅蛋白含量，用Trinder法進(jìn)行體外溶血試驗檢測游離血紅蛋白值，用Neubaue計數(shù)板檢測殘余白細(xì)胞數(shù)，用過碘酸鈉滴定法測定甘油殘余量[8-10]。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料比較采用獨立樣本的t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

實驗組白細(xì)胞殘留量、甘油殘留量均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；2組血紅蛋白含量、游離血紅蛋白含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別白細(xì)胞殘留量(×107個)甘油殘留量(g/L)血紅蛋白含量(g)游離血紅蛋白含量(g/L)實驗組0．95±0．183．98±1．2341．60±3．230．43±0．65對照組0．71±0．172．93±0．9642．75±4．410．41±0．66t4．2763．0360．9400．960P0．0000．0040．3530．343

3 討 論

眾所周知，Rh(D)陰性血型是稀有血型，在Rh血型者中所占比率不到1%。而我國Rh (D)陰性血型者大約為0.59%，給臨床急診用血帶來一定的困難，存在耽誤患者搶救時機(jī)的風(fēng)險。目前國內(nèi)許多血站采取甘油化Rh陰性紅細(xì)胞，于-80 ℃低溫保存，保存期可達(dá)10年，且具備較好的保存質(zhì)量，在臨床輸注前經(jīng)過洗滌去甘油化后再應(yīng)用于患者，是自身輸血及稀有血型輸血不可缺少的手段[11]。冷凍保存紅細(xì)胞，既爭取了搶救時間，又極大方便了臨床用血，冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞是不可或缺的血液制品。目前這種紅細(xì)胞制品在國內(nèi)相當(dāng)一部分血站仍沿用手工方法制備，工藝較繁瑣，容易受離心機(jī)轉(zhuǎn)速、溫度等因素影響，且開放式制備存在被污染的安全隱患，對操作人員的技術(shù)要求也較高,整個添加過程受人為因素影響較大，操作稍有不慎將會直接影響到本類制品的質(zhì)量，即對患者的用血安全造成威脅[12]。機(jī)器替代手工是近幾年發(fā)展的方向，機(jī)器制備是有效保證血液質(zhì)量的前提，探討機(jī)器標(biāo)準(zhǔn)化制備冰凍紅細(xì)胞,可減少人為誤差,提高效率和產(chǎn)品質(zhì)量。我國從1998年開始逐漸開展了機(jī)器洗滌紅細(xì)胞技術(shù)，應(yīng)用紅細(xì)胞洗滌機(jī)制備出冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，制備時間短，縮短了臨床患者等待搶救的時間，減少了人工制備的勞動力及血液被污染的機(jī)會。但該技術(shù)的研發(fā)一直存在困難，很多公司生產(chǎn)的儀器并不能達(dá)到《全血及成分血質(zhì)量要求》[13]相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，在儀器質(zhì)量評估方面也存在很大空白[14]。

本研究實驗組應(yīng)用儀器是我中心新引進(jìn)的一種國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號:ZHXD)，與美國較成熟的ACP215血細(xì)胞處理機(jī)進(jìn)行對比研究，結(jié)果顯示，2種機(jī)型制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的各項質(zhì)量指標(biāo)均符合國家標(biāo)準(zhǔn)，實驗組白細(xì)胞殘留量、甘油殘留量雖高于對照組，但其他各項指標(biāo)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。表明國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)(型號：ZHXD)與美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)比較，其制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞除有小部分的不足(白細(xì)胞、甘油殘留量高)，其余指標(biāo)均無明顯差異。目前有些大中城市的血液中心和中心血站應(yīng)用的是美國進(jìn)口的ACP215血細(xì)胞處理機(jī)，但該儀器價格昂貴，給患者帶來一定的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，故在國內(nèi)廣泛推廣應(yīng)用存在一定困難。

本研究結(jié)果顯示，在甘油殘留量方面國產(chǎn)機(jī)器略遜于進(jìn)口機(jī)器，但無菌試驗等各項指標(biāo)均達(dá)到了國家標(biāo)準(zhǔn)的要求，其安全性和有效性是可靠的。有文獻(xiàn)報道美國ACP215血細(xì)胞處理機(jī)的工序耗時為50～60 min[7]。而國產(chǎn)機(jī)器去甘油化進(jìn)程要快于進(jìn)口機(jī)器，符合冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞用于臨床急救用血的要求；另一優(yōu)勢就是節(jié)省了資金成本，由于ACP215進(jìn)口機(jī)器必須使用美方配套的一次性耗材，而這些耗材比國產(chǎn)的價格高好幾倍，無形中增加了生產(chǎn)成本，致使許多血站不得不又重新拾起手工開放式洗滌法。國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)在洗滌標(biāo)準(zhǔn)達(dá)標(biāo)的前提下，提高了洗滌速度，符合臨床急救用血的迫切需求；另外，其配套耗材價格較低，為血站節(jié)約了成本，也能減輕患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。本研究中國產(chǎn)機(jī)器的良好表現(xiàn)，有利于刺激國內(nèi)更多生產(chǎn)廠家加入到國產(chǎn)紅細(xì)胞洗滌機(jī)的自主研發(fā)行列。

FDA已經(jīng)批準(zhǔn)使用ACP215血細(xì)胞處理機(jī)制備去甘油紅細(xì)胞，可于AS-3中保存2周。國內(nèi)馮博等[15]嘗試用MAP來延長產(chǎn)品的保存時間，觀察其質(zhì)量的變化情況。本研究結(jié)果顯示國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)在洗滌后仍殘留部分白細(xì)胞和其他細(xì)胞碎片，說明國產(chǎn)機(jī)器分離技術(shù)還不夠成熟完善；甘油殘存量相對較高，說明在去甘油化的過程中還存在需要繼續(xù)完善的地方。但整體上已經(jīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)，給我國從人工洗滌紅細(xì)胞到機(jī)器洗滌帶來重大變革。

綜上所述，國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)具有我國的自主知識產(chǎn)權(quán)，在成本核算和機(jī)器的后期維護(hù)保養(yǎng)方面更具優(yōu)勢，開發(fā)和使用國產(chǎn)智能紅細(xì)胞洗滌機(jī)及配套耗材勢在必行，是實現(xiàn)血站自動化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化的必經(jīng)之路，由人工制備轉(zhuǎn)化為機(jī)器制備模式，應(yīng)該有廣闊的應(yīng)用前景和市場價值，值得大力推廣。

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·論著·

2017-07-24；

2017-08-24

河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題(20130134)

時卉麗(1978-)，女，河北元氏人，河北省血液中心副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事血液質(zhì)量安全、血站質(zhì)量管理研究。

R331.122

B

1007-3205(2017)11-1344-04

(本文編輯：劉斯靜)