徐芝立，張麗紅，張 翼，梁長(zhǎng)春，馬志強(qiáng)

(河北省石家莊市第三醫(yī)院泌尿外科，河北 石家莊 050011)

·論著·

RNA干擾腎癌Survivin基因表達(dá)降低786-O細(xì)胞增殖能力

徐芝立，張麗紅，張 翼，梁長(zhǎng)春，馬志強(qiáng)

(河北省石家莊市第三醫(yī)院泌尿外科，河北 石家莊 050011)

目的探討腎癌786-O細(xì)胞Survivin基因?qū)δI癌增殖能力的影響。方法采用RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染腎癌786-O細(xì)胞，靶向沉默Survivin基因表達(dá)，通過RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默效率，并測(cè)定增殖細(xì)胞核抗原PCNA蛋白表達(dá)變化，通過MTS實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞增殖活性。結(jié)果干擾組Survivin mRNA、Survivin蛋白及PCNA蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組和空白組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組與空白組Survivin mRNA、Survivin蛋白及PCNA蛋白相對(duì)表達(dá)量差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3組786-O細(xì)胞增殖活力均呈升高趨勢(shì)，干擾組786-O細(xì)胞增殖活力明顯低于對(duì)照組和空白組，其組間、時(shí)點(diǎn)間、組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論RNA干擾Survivin基因能顯著下調(diào)腎癌786-O細(xì)胞的Survivin基因表達(dá)，并降低細(xì)胞增殖活力，揭示出Survivin基因影響腎癌細(xì)胞惡性增殖的潛在分子機(jī)制。

腎腫瘤；RNA干擾；細(xì)胞增殖

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.11.010

腎癌發(fā)病率逐年提高，是最常見的腎實(shí)質(zhì)惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80%～90%，約占成年人全身惡性腫瘤的3%，透明細(xì)胞癌是其主要的病理類型。 Survivin是凋亡抑制蛋白家族的重要成員，除了胸腺、睪丸、血管內(nèi)皮細(xì)胞等組織之外幾乎所有成熟分化組織中均不表達(dá)，而在胃癌、結(jié)腸癌等大多數(shù)惡性腫瘤中呈高表達(dá)[1-3]。Survivin是排名第五位的腫瘤特異性基因，具有抑制細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞增殖和促進(jìn)腫瘤血管生成等作用，并與腫瘤不良預(yù)后、惡性增殖、高復(fù)發(fā)率以及治療抵抗密切相關(guān)[4]。由于Survivin基因在人體癌組織與正常組織中的表達(dá)存在顯著差異，使其成為腫瘤基因靶向治療的理想靶點(diǎn)。本研究采用RNA干擾技術(shù)靶向沉默腎癌786-O細(xì)胞的Survivin基因表達(dá)，通過Western blot實(shí)驗(yàn)測(cè)定增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表達(dá)，并通過MTS實(shí)驗(yàn)測(cè)定786-O細(xì)胞增殖變化情況，旨在進(jìn)一步探討Survivin基因表達(dá)對(duì)腎癌786-O細(xì)胞腎癌增殖能力的分子機(jī)制。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資 料 與 方 法

1.1 一般資料 人腎癌786-O細(xì)胞株由河北省腫瘤研究所凍存惠贈(zèng)。以HuSH pGFP-V-RS為載體構(gòu)建發(fā)夾結(jié)構(gòu)Survivin沉默質(zhì)粒，簡(jiǎn)稱Survivin siRNA，空載體質(zhì)粒中沒有Survivin shRNA基因序列的嵌入，又稱control siRNA，購自O(shè)RIGENE公司。美國(guó)Invitrogen公司設(shè)計(jì)合成cDNA引物：Survivin上游引物序列5′-CACCGCATCTCT-ACATTCAA-3′；下游引物序列5′-CACTTTCTTCGCAGTTTCCT-3′；擴(kuò)增產(chǎn)物片段為345 bp。內(nèi)參β-actin：上游引物5′-CCAAGGCC-AACCGCGAGAAGATGAC-3′；下游引物5′-AGGGTACATGGTGGTGCCGCCAGAC-3′；擴(kuò)增片段為 587 bp。Survivin抗體、PCNA分子抗體均購自美國(guó)Abcam公司。第一鏈cDNA反轉(zhuǎn)錄合成試劑盒購自Thermo公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染 人腎癌細(xì)胞株786-O接種于含10%胎牛血清的RPMI 1640混合培養(yǎng)基中，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，分成Survivin siRNA/786-O組(干擾組)、control siRNA/786-O組(對(duì)照組)和non-siRNA/786-O組(空白組)，按照Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染試劑盒的要求進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，成功轉(zhuǎn)染干擾或?qū)φ召|(zhì)粒的細(xì)胞均可以表達(dá)綠色熒光。

1.2.2 RT-PCR實(shí)驗(yàn) 分別取轉(zhuǎn)染后48 h對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的干擾組、對(duì)照組和空白組細(xì)胞裂解后，按照TriQuick總RNA提取試劑說明書提取總RNA，進(jìn)行濃度、純度及完整性檢測(cè)。兩步法進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。第一步：用Thermo公司的第一鏈cDNA反轉(zhuǎn)錄合成試劑盒進(jìn)行從RNA到DNA的制備，細(xì)胞總RNA于42 ℃ 65 min、70 ℃ 5 min合成cDNA。第二步：將反應(yīng)產(chǎn)物cDNA適度稀釋后用于PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為Survivin 95 ℃ 5 min、95 ℃ 1 min、58 ℃ 1 min、72 ℃ 90 s，30個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min、4 ℃終止。β-actin：94 ℃ 5 min、94 ℃ 30 s、58 ℃ 30 s、72 ℃ 60 s，40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min、4 ℃終止。分別取各目的基因的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行掃描，采用Gel-Pro Analyzer 3.1分析軟件檢測(cè)條帶灰度值，mRNA表達(dá)相對(duì)值=目的片段灰度值/GAPDH灰度值。

1.2.3 Western Blot實(shí)驗(yàn) 取轉(zhuǎn)染后48 h對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的干擾組、對(duì)照組和空白組細(xì)胞裂解，提取總蛋白，定量。適量蛋白樣品加入SDA-PAGE凝膠中電泳分離蛋白分子，轉(zhuǎn)膜，滴加一抗，4 ℃過夜，滴加二抗，孵育，洗滌，Odyssey雙色紅外熒光掃描系統(tǒng)分析結(jié)果。

1.2.4 MTS實(shí)驗(yàn) 將各組對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞分別接種在96孔板中。每個(gè)樣本組按0、24、48、72 h 4個(gè)檢測(cè)時(shí)點(diǎn)分別設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，每孔接種1.0×104個(gè)細(xì)胞。每組單獨(dú)另設(shè)3個(gè)無細(xì)胞對(duì)照復(fù)孔，檢測(cè)背景吸光度光密度(optical density,OD)值。在預(yù)設(shè)檢測(cè)時(shí)點(diǎn)加入MTS溶液(5 g/L) 20 μL繼續(xù)培養(yǎng)4 h，終止。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上490 nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔OD值，并減去無細(xì)胞對(duì)照復(fù)孔所代表的背景OD值作為A值，取相同檢測(cè)時(shí)點(diǎn)及轉(zhuǎn)染相同重組慢病毒的A值均值作為該組細(xì)胞某天的A值，繪制增殖曲線進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較分別采用F檢驗(yàn)、q檢驗(yàn)和重復(fù)測(cè)量的方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效果 熒光顯微鏡下可以觀察到成功轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒載體的Survivin siRNA/786-O細(xì)胞、control siRNA/786-O細(xì)胞均表達(dá)綠色熒光。

2.2 3組腎癌786-O細(xì)胞Survivin mRNA、Survivin蛋白及PCNA蛋白表達(dá)水平比較 干擾組Survivin mRNA、Survivin蛋白及PCNA蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組和空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組與空白組Survivin mRNA、Survivin蛋白及PCNA蛋白相對(duì)表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別SurvivinmRNASurvivin蛋白PCNA蛋白干擾組0．225±0．0422．842±1．3581．384±0．297對(duì)照組0．626±0．102?15．631±3．793?9．861±1．909?空白組0．659±0．082?16．986±3．050?9．747±0．910?F46．37035．77177．728P0．0000．0000．000

*P<0.05與干擾組比較(q檢驗(yàn))

2.3 3組腎癌786-O細(xì)胞增殖水平比較 3組786-O細(xì)胞增殖活力均呈升高趨勢(shì)，但干擾組786-O細(xì)胞增殖活力均明顯低于對(duì)照組和空白組，其組間、時(shí)點(diǎn)間、組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 3組腎癌786-O細(xì)胞增殖活力水平比較Table 2 Proliferation activity of renal cancer cell line 786-O 值)

圖1不同分組786-O細(xì)胞增殖曲線
Figue1Proliferationcurveofdifferent786-Ocellgroups

3 討 論

許多原癌基因的激活和抑癌基因的失活參與了眾多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。腎癌是嚴(yán)重危害人類健康的腎臟最常見惡性腫瘤，約占成年人全身惡性腫瘤的3%，多屬天然耐藥，放化療均不敏感，基因靶向治療為中晚期腎癌的治療提供了新途徑。

Survivin基因位于人類染色體17q25，片段長(zhǎng)14.7 kb，是編碼142個(gè)氨基酸組成的蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量約16 500，含有IAP序列，可直接抑制凋亡酶的活性，由效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體1在人類基因組庫中雜交篩選而分離出來，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子[5-6]?；A(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)，Survivin基因在胚胎組織及大多數(shù)腫瘤細(xì)胞中廣泛表達(dá)，而在成熟分化的終末組織中不表達(dá)，不僅可以抑制細(xì)胞凋亡，而且在調(diào)控細(xì)胞增殖機(jī)制中發(fā)揮重要作用[4]。在腫瘤細(xì)胞中，Survivin通過與紡錘體微管蛋白特異性結(jié)合形成染色體乘客絡(luò)合體，穩(wěn)定微管結(jié)構(gòu)，避免紡錘體被水解，保護(hù)有絲分裂細(xì)胞器的完整型，有利于有絲分裂持續(xù)進(jìn)行，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞不斷增殖[6]。臨床研究發(fā)現(xiàn)，Survivin顯著表達(dá)于前列腺癌[5]、膀胱癌[7]、胰腺癌[8]、卵巢癌[9]、肺小細(xì)胞癌[10]等多種惡性腫瘤中，與患者的腫瘤惡性進(jìn)展、不良預(yù)后密切相關(guān)。

RNA干擾技術(shù)是通過小干擾RNA特異性降解靶基因mRNA，引起基因轉(zhuǎn)錄后沉默的現(xiàn)象，具有高效性和序列特異性的優(yōu)點(diǎn)，是新的基因阻斷研究方法。國(guó)內(nèi)學(xué)者牛朝霞等[11]利用RNA干擾技術(shù)成功靶向沉默Survivin基因表達(dá)，并檢測(cè)到基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)下調(diào)，進(jìn)而抑制了食管癌Eca-109細(xì)胞的侵襲與遷移，在食管癌模型上驗(yàn)證了RNA干擾技術(shù)靶向沉默Survivin基因的有效性。本研究嘗試通過攜帶干擾RNA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染腎癌786-O細(xì)胞，結(jié)果顯示干擾組Survivin mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯降低，表明Survivin基因表達(dá)成功被沉默；繪制了786-O細(xì)胞增殖曲線，3組786-O細(xì)胞增殖活力均呈升高趨勢(shì)，干擾組786-O細(xì)胞的增殖活力均明顯低于對(duì)照組和空白組，其組間、時(shí)點(diǎn)間、組間·時(shí)點(diǎn)間交互作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示干擾Survivin基因可以抑制腫瘤細(xì)胞的惡性增殖。

PCNA分子是由261個(gè)氨基酸組成的核內(nèi)蛋白質(zhì)分子，參與DNA多聚酶的活性作用，近年來被廣泛用于惡性腫瘤及某些良性增生性疾病的研究中[12]。在細(xì)胞分裂靜止期(G0)表達(dá)量較低，在S期表達(dá)為高峰，在G2/M期明顯降低，參與調(diào)控細(xì)胞周期與凋亡等細(xì)胞功能，與腫瘤細(xì)胞的惡性增殖、進(jìn)展密切相關(guān)，增殖細(xì)胞核抗原PCNA僅在增殖狀態(tài)的細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)，提示DNA復(fù)制程度增加，是存在于細(xì)胞核內(nèi)的反映細(xì)胞增殖狀態(tài)的核蛋白之一。在腫瘤細(xì)胞中，Survivin基因高表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換，在G2/M期可見Survivin表達(dá)明顯升高[13]。據(jù)此推測(cè)Survivin基因可能通過調(diào)控PCNA蛋白表達(dá)或與PCNA蛋白協(xié)同參與了腎癌細(xì)胞的增殖過程。國(guó)內(nèi)學(xué)者李書燕等[12]發(fā)現(xiàn)，Survivin和PCNA在子宮內(nèi)膜異位癥患者的組織中表達(dá)明顯增高。推測(cè)在子宮內(nèi)膜異位生長(zhǎng)過程中Survivin保護(hù)內(nèi)膜細(xì)胞不會(huì)凋亡，而PCNA保持內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力，在一定程度上顯示了Survivin和PCNA對(duì)細(xì)胞增殖的協(xié)同促進(jìn)作用。本研究結(jié)果顯示干擾組786-O細(xì)胞中PCNA蛋白表達(dá)水平明顯降低，表明干擾Survivin基因表達(dá)可以引起PCNA蛋白表達(dá)量下降；這與MTS實(shí)驗(yàn)結(jié)果相印證，也顯示了Survivin基因影響腎癌細(xì)胞增殖的潛在分子機(jī)制。

Survivin基因在人體正常分化的組織中不表達(dá)或低表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)的顯著差異，提示Survivin既有助于判斷腫瘤預(yù)后，還可作為腫瘤靶向治療的理想靶點(diǎn)。靶向Survivin的基因治療或免疫治療能夠準(zhǔn)確定位于腫瘤組織，有效破壞腫瘤細(xì)胞的某些功能活動(dòng)，而不會(huì)對(duì)人體正常細(xì)胞造成損傷[6]。因此，針對(duì)Survivin基因的分子機(jī)制研究和靶向治療策略已經(jīng)成為腫瘤防治的焦點(diǎn)領(lǐng)域。Seo等[14]將Survivin啟動(dòng)子基因與AD5/AD35嵌合型病毒基因相融合，通過病毒不斷復(fù)制，可以特異性破壞高表達(dá)Survivin基因的膀胱癌細(xì)胞，并在小鼠模型上進(jìn)行了驗(yàn)證，該方法不良反應(yīng)小，對(duì)膀胱癌有高效殺傷作用。Xia等[15]在對(duì)人類肝癌的研究中發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用Survivin的小分子抑制劑YM155可以下調(diào)Survivin基因轉(zhuǎn)錄水平，造成DNA損傷，激活Caspase-3，表現(xiàn)出抑制細(xì)胞增殖與凋亡等抗腫瘤作用。還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Survivin分子是子宮內(nèi)膜癌患者獨(dú)立的預(yù)后預(yù)測(cè)因子，并確認(rèn)了YM155對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞系的抗增殖和促凋亡作用[16]。此外，在胃癌移植瘤模型中，應(yīng)用Survivin顯性負(fù)性突變體C84A，可以抑制胃癌瘤體生長(zhǎng)，并可增強(qiáng)5氟尿嘧啶對(duì)胃癌細(xì)胞的化療效果[17]。表明下調(diào)Survivin表達(dá)能阻抑腫瘤的發(fā)生、惡性發(fā)展，Survivin作為腫瘤抗原基因具有應(yīng)用于腫瘤基因治療的巨大潛力。

目前，在針對(duì)Survivin分子的免疫治療中，Survivin蛋白作為腫瘤相關(guān)抗原，可以在動(dòng)物體內(nèi)利用其免疫原性誘導(dǎo)產(chǎn)生抗Survivin的免疫應(yīng)答。國(guó)外學(xué)者已經(jīng)嘗試在臨床Ⅰ/Ⅱ試驗(yàn)中應(yīng)用Survivin多肽分子進(jìn)行免疫接種，增加腫瘤患者體內(nèi)CD8+T細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的特異性免疫反應(yīng)，但機(jī)體不良反應(yīng)很小；而Survivin多肽疫苗也已經(jīng)處于Ⅱ期臨床試驗(yàn)中，該疫苗可以在難治性黑色素瘤患者中誘導(dǎo)抗Survivin的T細(xì)胞數(shù)量增加，顯著降低了復(fù)發(fā)率，提高了腫瘤患者的總生存率[18]。提示了Survivin分子作為腫瘤相關(guān)抗原應(yīng)用于腫瘤基因免疫治療中的巨大潛力。

本研究通過RNA干擾技術(shù)構(gòu)建Survivin基因沉默表達(dá)的腎癌786-O細(xì)胞，檢測(cè)到增殖細(xì)胞核抗原PCNA蛋白表達(dá)出現(xiàn)下調(diào)，而且細(xì)胞增殖活力明顯降低，為將Survivin開發(fā)為基因治療靶分子的應(yīng)用研究提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。后續(xù)工作尚需要深入研究Survivin基因影響腎癌細(xì)胞惡性增殖的分子通路并通過動(dòng)物模型加以驗(yàn)證，為將Survivin開發(fā)成國(guó)內(nèi)臨床可用的基因治療標(biāo)靶提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1] Sun B,Xu H,Zhang G,et al. Basic fibroblast growth factor upregulates survivin expression in hepatocellular carcinoma cells via aprotein kinase B-dependent pathway[J]. Oncol Rep,2013,30(1):385-390.

[2] 王偉寧,徐賽群,劉麗,等.SSTR2、Livin和Survivin在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2017,27(10):52-56.

[3] 張小玲,田志逢,王萍,等.KLF5和Survivin蛋白異常表達(dá)與胃癌預(yù)后的關(guān)系[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志,2016,32(2):142-145.

[4] Khan Z,Khan AA,Yadav H,et al. Survivin,a molecular target for therapeutic interventions in squamous cell carcinoma[J]. Cell Mol Biol Lett,2017,22:8.

[5] 肖邦明,祝興旺,董理鳴,等.SRSF1和Survivin在前列腺癌組織中的表達(dá)及其與病理分級(jí)的相關(guān)性[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,45(5):452-455.

[6] 殷海森,趙新穎,蘇長(zhǎng)青.以Survivin為靶標(biāo)的腫瘤治療策略[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,37(3):342-348.

[7] Jeon C,Kim M,Kwak C,et al. Prognostic role of survivin in bladder cancer:asystematic review and meta-analysis[J]. PLoS One,2013,8(10):e76719.

[8] Ekeblad S,Lejonklou MH,Stalberg P,et al. Prognostic relevance of survivin in pancreatic endocrine tumors[J]. World J Surg,2012,36(6):1411-1418.

[9] 申薇,梁冰鋒,李秀榮,等.凋亡途徑蛋白XIAP、Caspase-3和Survivin在上皮性卵巢癌中的表達(dá)及相互關(guān)系[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,34(12):1561-1564.

[10] Zhang LQ,Wang J,Jiang F,et al. Prognostic value of survivin inpatients with non-small cell lung carcinoma:a systematic reviewwith meta-analysis[J]. PLoS One,2012,7(3):e34100.

[11] 牛朝霞,張秀芝,陳潔,等.Survivin基因沉默抑制食管癌Eca-109細(xì)胞的侵襲與遷移[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2016,51(2):185-189.

[12] 李書艷,馮衛(wèi)群.Survivin、PCNA在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及其意義[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2013,34(1):18-20.

[13] Wheatley SP. The functional repertoire of survivin′s tails[J]. Cell Cycle,2015,14(2):261-268.

[14] Seo HK,Seo JB,Nam JK,et al. Development of replication-competent adenovirus for bladder cancer by controlling adenovirus E1a and E4 gene expression with the survivin promoter[J]. Oncotarget,2014,5(14):5615-5623.

[15] Xia H,Chen J,Shi M,et al. The over-expression of survivin enhances the chemotherapeutic efficacy of YM155 in human hepatocellular carcinoma[J]. Oncotarget,2015,6(8):5990-6000.

[16] Chuwa AH,Sone K,Oda K,et al. Significance of survivin as a prognostic factor and a therapeutic target in endometrial cancer[J]. Gynecol Oncol,2016,141(3):564-569.

[17] Weng Y,Fei B,Chi AL,et al. Inhibition of gastric cancer cell growth in vivo by overexpression of adeno-associated virus-mediated survivin mutant C84A[J]. Oncol Res,2013,20(9):411-417.

[18] Altieri DC. Targeting survivin in cancer[J]. Cancer Lett,2013,332(2):225-228.

Proliferationofhumanrenalcancer786-Ocellswasdown-regulatedbyRNAinteferenceagainstsurvivingeneexpression

XU Zhi-li，ZHANG Li-hong，ZHANG Yi，LIANG Chang-chun，MA Zhi-qiang

(DepartmentofUrology,theThirdHospitalofShijiazhuangCity,HebeiProvince，Shijiazhuang050011,China)

ObjectiveTo investigate the effect of Survivin gene expression on human renal carcinoma cell 786-O proliferation.MethodsRNA inteference was used to transfect human renal cancer cell line 786-O and silence Survivin gene expression. Expression of Survivin mRNA and protein were detected by reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) and Western blot assay, respectively. Change of PCNA protein expression was measured meanwhile. The proliferation of 786-O cells was evaluated by MTS assay.ResultsCompared to control siRNA/786-O and non-siRNA/786-O, Survivin siRNA/786-O displayed reduced Survivin expression of mRNA and protein(P<0.05). Expression level of PCNA protein was also down-regulated significantly in Survivin siRNA/786-O cells(P<0.05). No significant differences of Survivin mRNA, Survivin protein and PCNA protein were found between control siRNA/786-O and non-siRNA/786-O(P>0.05). Proliferation activity of all three groups of 786-O cells showed increasing trend obviously. The level of siRNA/786-O cells proliferation was significantly lower than other groups. There were statistically significant differences between groups, at different time point, also analysis of interaction between groups with time point revealed statistical significance(P<0.05).ConclusionRNA interference of Survivin gene can down-regulate expression of Survivin mRNA, Survivin protein and PCNA protein expression with decreasing the proliferation activity of cells. The present study revealed underlying influence of Survivin gene expression on malignant proliferation of renal cancer.

kidney neoplasms； RNA interference； cell proliferation

2017-08-08；

2017-09-11

石家莊市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展指導(dǎo)計(jì)劃(131462333)

徐芝立(1980-)，男，河北深州人，河北省石家莊市第三醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)碩士，從事泌尿外科疾病診治研究。

R737.11

A

1007-3205(2017)11-1283-05

(本文編輯：趙麗潔)