李凱航 楊顯超 鞠厚斌 吳秀娟 陶田谷晟 王 建

（上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

一例豬繁殖與呼吸綜合征感染時(shí)的檢測(cè)與分析

李凱航 楊顯超 鞠厚斌 吳秀娟 陶田谷晟 王 建*

（上海市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103）

為對(duì)豬場(chǎng)豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)分析，通過繪制抗體曲線、分析抗體數(shù)據(jù)和進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)做出綜合判斷。結(jié)果表明，科學(xué)的數(shù)據(jù)分析才能揭示群體真實(shí)免疫狀況并可提示感染，抗體監(jiān)測(cè)的作用不容忽視。

豬繁殖與呼吸綜合征；感染；抗體監(jiān)測(cè)

豬繁殖與呼吸綜合征，俗稱藍(lán)耳病，1996年傳入我國(guó)，2005—2006年期間由于核苷酸序列突變，產(chǎn)生藍(lán)耳病病毒變異株，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失[1]。各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）對(duì)該病的免疫非常重視，希望能夠運(yùn)用有效手段監(jiān)測(cè)該病的真實(shí)抗體水平和感染現(xiàn)狀，從而了解養(yǎng)殖各階段的帶毒狀況、免疫水平、發(fā)病狀態(tài)，結(jié)合場(chǎng)內(nèi)生產(chǎn)參數(shù)，了解和較全面掌握該病在場(chǎng)內(nèi)的控制情況。但在實(shí)際生產(chǎn)中，有可能日常監(jiān)測(cè)中出具的檢測(cè)報(bào)告顯示采集的血清抗體均為陽性，但場(chǎng)內(nèi)流產(chǎn)數(shù)顯著增多。在這種情況下，其實(shí)可通過對(duì)抗體動(dòng)力學(xué)曲線和其他具體數(shù)據(jù)的詳細(xì)分析作出初步判斷。

1 免疫抗體檢測(cè)

上海市某豬場(chǎng)發(fā)現(xiàn)生產(chǎn)參數(shù)下降，繁殖母豬流產(chǎn)率升高，對(duì)其豬繁殖與呼吸綜合征抗體日常監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析，繪制了抗體變化動(dòng)力學(xué)曲線并對(duì)抗體均值和離散度加以分析，認(rèn)為其疑似感染藍(lán)耳病。其中抗體均值以S/P值表示，S/P=(樣品-陰性對(duì)照平均值)/(陽性對(duì)照平均值-陰性對(duì)照平均值)，離散度=均值/標(biāo)準(zhǔn)差×100%。

圖1 疑似發(fā)病場(chǎng)各生產(chǎn)階段豬繁殖與呼吸綜合征抗體動(dòng)力學(xué)曲線

該場(chǎng)免疫程序?yàn)?4日齡、140日齡和170日齡免疫高藍(lán)弱毒苗（江西株），母豬普免3次，監(jiān)測(cè)該病抗體個(gè)體陽性率為93.22%，抗體整體水平較高。從圖1可以看出：抗體水平在7周齡產(chǎn)生明顯下降，妊娠后期出現(xiàn)明顯升高現(xiàn)象，為明確是否為野毒感染所致，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了具體分析。

圖2 各生產(chǎn)階段豬繁殖與呼吸綜合征抗體均值與離散度變化

從圖2可以看出，第7周抗體S/P均值僅為1.2，但離散度卻達(dá)到131%，此時(shí)母源抗體已基本消耗殆盡，野毒感染幾率較大。妊娠13周時(shí)，抗體S/P均值高（3.0），離散度低（27%），野毒感染幾率小。

2 病原學(xué)檢測(cè)

為了印證抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果，對(duì)3～25周的豬采集全血，按10份/階段進(jìn)行采樣和PCR檢測(cè)，結(jié)果見圖3。

圖3 3—25周齡豬繁殖與呼吸綜合征PCR檢測(cè)陽性率

由圖3可以看到，在3～25周的病原學(xué)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)中，3～11周出現(xiàn)病原感染，從哺乳仔豬一直持續(xù)到育肥中期，始終存在野毒感染，保育后期（9周）感染最嚴(yán)重。從育肥后期轉(zhuǎn)后備期間，豬場(chǎng)整體感染狀況相對(duì)平穩(wěn)。我們隨后挑選了30份抗體監(jiān)測(cè)S/P值大于2.5的豬，采集全血樣品進(jìn)行PCR，結(jié)果從24份樣品中檢出了藍(lán)耳病病原，符合率達(dá)到80%以上，說明抗體檢測(cè)與病原學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)具有較高的一致性。

3 討論

3.1 僅憑群體抗體陽性率一項(xiàng)指標(biāo)無法反映免疫效果和抗病能力

在血清學(xué)監(jiān)測(cè)中，當(dāng)前選用的經(jīng)典毒株或高藍(lán)毒株疫苗均可以產(chǎn)生很高的陽性率，弱毒苗打一次就可以使群體監(jiān)測(cè)ELISA抗體水平達(dá)到70%以上[2]。但群體免疫水平并不代表中和抗體水平，打了苗發(fā)病的場(chǎng)戶仍然有很多，不對(duì)免疫數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)分析是無法真實(shí)反映免疫效果的[3]。藍(lán)耳病抗體陽性率與保護(hù)力之間的關(guān)系，并非正相關(guān)，應(yīng)對(duì)抗體的均值和離散度更加關(guān)注：均值過低，可能產(chǎn)生亞中和水平的抗體，反而導(dǎo)致藍(lán)耳病病毒產(chǎn)生抗體依賴性增強(qiáng)作用（ADE）；均值過高，則可能是病毒感染造成的感染抗體占主導(dǎo)；健康豬群的抗體離散度一般不會(huì)超過30%，如果離散度過高，不管均值如何，同樣代表場(chǎng)內(nèi)正在發(fā)生疫情。雖然當(dāng)前檢測(cè)藍(lán)耳病所用的不同檢測(cè)試劑盒針對(duì)病毒核衣殼、囊膜等不同蛋白，產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)略有不同，但繪制出的抗體曲線趨勢(shì)是一致的，對(duì)抗體離散度的計(jì)算也不受影響，通過對(duì)抗體監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)分析，有利于對(duì)場(chǎng)內(nèi)疫情和免疫效果進(jìn)行初步判斷。

3.2 監(jiān)測(cè)樣品采集應(yīng)涵蓋各主要生產(chǎn)階段和環(huán)節(jié)

隨著當(dāng)前藍(lán)耳病流行毒株的多樣化和復(fù)雜化，疫苗毒株的選用和場(chǎng)內(nèi)優(yōu)勢(shì)毒株是否匹配？病毒侵襲時(shí)各生產(chǎn)階段具體免疫效果如何？到底病毒存在于哪個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)，需要對(duì)哪個(gè)環(huán)節(jié)重點(diǎn)關(guān)注？這些問題僅靠一個(gè)群體陽性率指標(biāo)顯然無法回答，需要各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）針對(duì)本場(chǎng)具體情況，按照各生產(chǎn)階段的實(shí)際規(guī)模選取采樣方案，對(duì)群體免疫效果進(jìn)行全面的、實(shí)時(shí)的監(jiān)控和分析。每個(gè)生產(chǎn)階段應(yīng)按照規(guī)模比例或參照流行病學(xué)調(diào)查原理，制定合理置信區(qū)間和可接受流行率采集樣品。血清樣品采集的策略應(yīng)最有利于對(duì)免疫水平和感染狀況作出整體評(píng)價(jià)，表1僅供參考。

另外，因?yàn)樨i只感染藍(lán)耳病病毒12小時(shí)即可造成持續(xù)2周的病毒血癥，并會(huì)在1～4個(gè)月時(shí)間里發(fā)生持續(xù)感染[4]，發(fā)病期間可從抗凝血中檢出病毒，故抗凝血樣品可用于該病的病原學(xué)調(diào)查，采集方便、快捷，如發(fā)現(xiàn)抗體數(shù)據(jù)異常，應(yīng)及時(shí)采集抗凝血進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。

表1 豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體監(jiān)測(cè)方案

3.3 場(chǎng)內(nèi)抗體監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)分析仍然具備重要參考價(jià)值

雖然抗體監(jiān)測(cè)無法區(qū)分感染抗體和免疫抗體，但是，當(dāng)前已有多個(gè)試劑生產(chǎn)商根據(jù)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的積累制定了感染抗體的參考值，可起到重要的參考作用。按照過往經(jīng)驗(yàn)，ELISA抗體滴度與病毒感染程度存在相關(guān)性。按照監(jiān)測(cè)經(jīng)驗(yàn)，ELISA的S/P值超過2.5則提示感染，但近年來隨著廣大養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）對(duì)高藍(lán)弱毒苗的認(rèn)同程度提高，疫苗免疫效果得到了普遍提升，試劑盒的感染閾值也應(yīng)該有所提升，具體提升到多少尚待探討。雖然當(dāng)前病原學(xué)監(jiān)測(cè)已益發(fā)重要，但對(duì)傳統(tǒng)抗體監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的及時(shí)、科學(xué)、全面分析，仍是真正了解養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）的免疫狀態(tài)和免疫效果的良策，也是提示場(chǎng)內(nèi)正在發(fā)生的疾病感染和流行的重要工具[5]。

總之，隨著藍(lán)耳病疫病的不斷發(fā)生及流行毒株的復(fù)雜化，藍(lán)耳病的抗體監(jiān)測(cè)工作不僅不能忽視，而且還要進(jìn)一步加強(qiáng)和細(xì)化，要開展實(shí)時(shí)跟蹤和反饋。各養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）應(yīng)保持一定的監(jiān)測(cè)頻次和范圍，對(duì)發(fā)病場(chǎng)的疫苗免疫程序及時(shí)進(jìn)行合理調(diào)整，實(shí)現(xiàn)對(duì)群體健康的動(dòng)態(tài)監(jiān)控和再平衡。

[1]代軍,雷蕾,任志華.豬繁殖與呼吸綜合征防控研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,35(4):97-101.

[2]陳紅玲,黎作華,萬春燕,等.高致病性豬繁殖與呼吸障礙綜合征弱毒疫苗在規(guī)?；i場(chǎng)中的臨床應(yīng)用與分析 [J].中國(guó)豬業(yè),2015,10(8):41-44.

[3]劉功成,張倩,屈勇剛,等.北疆地區(qū)豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體的檢測(cè)與分析[J].中國(guó)豬業(yè),2016,11(1):41-43.

[4]顧小雪,原霖,遇秀玲,等.豬場(chǎng)如何實(shí)施主要垂直傳播性疫病的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)[J].豬業(yè)科學(xué),2012,29(10):30-32.

[5]周緒斌,李聰,秦云,等.規(guī)模化豬場(chǎng)系統(tǒng)血清學(xué)監(jiān)測(cè)在防疫體系中的作用及實(shí)施方法[J].今日養(yǎng)豬業(yè),2008(4):19-23.

S852.65

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1673-4645(2017)10-0050-03

2017-09-19

上海市生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè) ﹝滬農(nóng)科產(chǎn)字（2017）第6號(hào)﹞

李凱航（1977-），男，碩士，高級(jí)獸醫(yī)師，從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)工作，E-mail：691126830@qq.com*

王建，E-mail：jianwhlj@163.com