王大慧，聶 敏，衛(wèi)功元*

（蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）

基于兩階段氨基酸添加的谷胱甘肽發(fā)酵高產(chǎn)方法

王大慧，聶 敏，衛(wèi)功元*

（蘇州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，江蘇 蘇州 215123）

為提高產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis SZU 07-01）發(fā)酵生產(chǎn)谷胱甘肽（glutathione，GSH）的產(chǎn)量，分別考察L-蛋氨酸和L-半胱氨酸在GSH分批發(fā)酵和流加發(fā)酵中的作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)L-蛋氨酸提升了酵母細(xì)胞在生長期的GSH合成能力，而L-半胱氨酸顯著提高了細(xì)胞生長結(jié)束后的GSH產(chǎn)量。在此基礎(chǔ)上，提出了兩階段氨基酸添加策略，即在分批發(fā)酵初始時（0 h）添加60 mmol/L L-蛋氨酸，在流加發(fā)酵過程中細(xì)胞干質(zhì)量達(dá)到最大值時（第27小時）一次性添加30 mmol/L L-半胱氨酸。最終，GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量進(jìn)一步提高，分別達(dá)到1 247.1 mg/L和24.1 mg/g。該兩階段氨基酸添加策略在GSH發(fā)酵高產(chǎn)中的成功應(yīng)用，對其他類似化合物的高效生產(chǎn)具有一定的借鑒意義。

產(chǎn)朊假絲酵母；谷胱甘肽；L-蛋氨酸；L-半胱氨酸；流加發(fā)酵

谷胱甘肽（glutathione，GSH）是由L-谷氨酸、L-半胱氨酸和甘氨酸在ATP的存在下，經(jīng)γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶催化得到的一種三肽化合物[1-3]。GSH具有消除自由基和抗氧化作用，因此對機(jī)體正常代謝起著強有力的保護(hù)作用[4]。在20世紀(jì)50年代，日本就開始將GSH作為生物活性添加劑并積極開發(fā)應(yīng)用在保健食品的生產(chǎn)中[5]。在食品加工領(lǐng)域，由于GSH在強化食品風(fēng)味的同時對人體有保健作用，因此被稱為抗衰老因子和長壽因子，它的應(yīng)用前景要明顯優(yōu)于其他類型的防腐劑或抗氧化劑[6]。

微生物發(fā)酵法被認(rèn)為是GSH生物合成最有效的方法之一[5]。一直以來，研究者們采用菌種遺傳改造、發(fā)酵條件優(yōu)化以及前體物質(zhì)添加等方法來提高GSH的產(chǎn)量和合成效率[2]，但仍然存在許多技術(shù)瓶頸，以至于GSH的國產(chǎn)化還沒能完全實現(xiàn)。在GSH生物合成過程中，L-半胱氨酸的水平是能否實現(xiàn)GSH高效合成的關(guān)鍵因素，因此添加L-半胱氨酸可以顯著提高GSH的發(fā)酵產(chǎn)量[6-8]。然而，當(dāng)L-半胱氨酸超過一定濃度時將抑制細(xì)胞的生長，所以在發(fā)酵過程中L-半胱氨酸主要在細(xì)胞生長結(jié)束時添加或者采用流加方式[9-10]。此外，在胞內(nèi)腺苷甲硫氨酸合成酶的催化下，L-蛋氨酸能與ATP反應(yīng)生成S-腺苷甲硫氨酸，它是大多數(shù)酵母細(xì)胞內(nèi)唯一的甲基供體。而細(xì)胞在生長旺盛時甲基化反應(yīng)非常頻繁，因此在培養(yǎng)基中添加L-蛋氨酸可以促進(jìn)這一過程的發(fā)生[11-12]。與此同時，L-蛋氨酸在代謝過程中生成的S-腺苷同型半胱氨酸會經(jīng)過多步反應(yīng)形成L-半胱氨酸，最終可能有利于GSH的合成[13]。

GSH是胞內(nèi)產(chǎn)物，通常從提高細(xì)胞密度和或胞內(nèi)GSH含量兩個方面入手來提高GSH的發(fā)酵產(chǎn)量[14-15]。在前期針對產(chǎn)朊假絲酵母（Candida utilis SZU 07-01）高密度培養(yǎng)的研究中，發(fā)現(xiàn)采用多項式流加策略可以獲得較高的細(xì)胞密度，但是胞內(nèi)GSH含量卻并沒有明顯提高[16]。因此，有必要采取有效措施實現(xiàn)細(xì)胞高密度和GSH高產(chǎn)的統(tǒng)一。本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，分別考察L-蛋氨酸和L-半胱氨酸在酵母細(xì)胞生長過程中以及生長結(jié)束后對GSH生物合成的作用，結(jié)合高密度培養(yǎng)技術(shù)，提出基于兩階段氨基酸添加的GSH發(fā)酵方法，最終實現(xiàn)GSH的高產(chǎn)發(fā)酵，為實現(xiàn)GSH產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株與培養(yǎng)基

C. utilis SZU 07-01由蘇州大學(xué)微生物生理與代謝調(diào)控研究室保藏。

斜面培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，酵母膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，瓊脂20 g/L，pH 6.0。

種子培養(yǎng)基：葡萄糖20 g/L，酵母膏10 g/L，蛋白胨10 g/L，pH 6.0。

發(fā)酵培養(yǎng)基：葡萄糖30 g/L，KH2PO43 g/L，M gSO40.25 g/L，M nSO40.01 g/L，F(xiàn)eSO40.01 g/L，CuSO40.001 g/L，ZnSO40.003 g/L，pH 5.5。L-蛋氨酸和L-半胱氨酸濃度和添加時間根據(jù)實驗要求確定。

流加培養(yǎng)基：葡萄糖600 g/L，(NH4)2SO480 g/L，KH2PO430 g/L，MgSO42.5 g/L。葡萄糖單獨滅菌后再與其他成分混合。

1.2 儀器與設(shè)備

SW-CJ-2A超凈工作臺 吳江市龍宏凈化設(shè)備有限公司；LDZX-50KBS高壓蒸氣滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠；HZ-2010K恒溫?fù)u瓶柜 太倉市華利達(dá)實驗儀器設(shè)備公司；BIOTECH-5BGZ攪拌式發(fā)酵罐 上海保興生物設(shè)備工程有限公司；LD4-2A離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠。

1.3 方法

1.3.1 種子培養(yǎng)

將斜面保藏菌種活化4 h后接入種子培養(yǎng)基中，30 ℃、200 r/m in搖床培養(yǎng)20 h。

1.3.2 搖瓶培養(yǎng)

按照體積分?jǐn)?shù)10%的接種量將種子接入到裝有50 m L發(fā)酵培養(yǎng)基的500 m L三角瓶中，于30 ℃、200 r/m in條件下?lián)u床培養(yǎng)30 h。

1.3.3 分批培養(yǎng)

全自動5 L攪拌式發(fā)酵罐中裝3 L發(fā)酵培養(yǎng)基，將培養(yǎng)好的種子按照10%的接種量接入發(fā)酵罐中。在溫度30℃，通氣量3.0 L/m in，攪拌轉(zhuǎn)速300 r/m in條件下培養(yǎng)時間30 h。pH值采用梅特勒電極在位監(jiān)測，并通過自動流加3 mol/L H2SO4或3 mol/L NaOH溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)以維持pH值在5.5±0.02以內(nèi)。

1.3.4 高密度培養(yǎng)

在總糖質(zhì)量濃度為150 g/L的前提下，以多項式流加方式實現(xiàn)細(xì)胞高密度培養(yǎng)，具體方法見文獻(xiàn)[16]。在培養(yǎng)的第27小時向體系中加入L-半胱氨酸，之后溫度和pH值保持不變，前3 h內(nèi)溶氧控制在5%，隨后的12 h溶氧控制在20%，之后溶氧不控制[17]。

1.3.5 酵母生物量的測定

以細(xì)胞干質(zhì)量表示酵母生物量。取25 m L發(fā)酵液，3 500 r/m in離心10 m in，用蒸餾水將離心后的沉淀洗滌3 次，收集菌體后于70 ℃烘干至質(zhì)量恒定，計算出細(xì)胞干質(zhì)量。

1.3.6 指標(biāo)測定

葡萄糖的測定采用3,5-二硝基水楊酸法[18]；GSH的測定采用5,5’-二硫代雙（2-硝基苯甲酸）-谷胱甘肽還原酶循環(huán)法[19]。

1.3.7 指標(biāo)計算

1.3.7.1 胞內(nèi)GSH含量的計算

胞內(nèi)GSH含量定義為單位質(zhì)量干細(xì)胞在胞內(nèi)合成GSH產(chǎn)量，計算如下式所示：

1.3.7.2 動力學(xué)參數(shù)的計算

細(xì)胞得率、GSH得率、細(xì)胞生產(chǎn)強度、GSH生產(chǎn)強度的計算方法同文獻(xiàn)[19-20]。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有搖瓶實驗數(shù)據(jù)均為3 組獨立實驗樣品的平均值，所有分批發(fā)酵實驗數(shù)據(jù)均為3 次檢測結(jié)果的平均值。Excel 2010軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 L-蛋氨酸對酵母細(xì)胞生長和GSH合成的影響

圖1 不同L-蛋氨酸添加濃度條件下的細(xì)胞生長和GSH合成情況Fig. 1 Cell grow th and GSH production at different concentrations of L-methionine in fl ask culture

首先，在搖瓶培養(yǎng)的0 h，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加L-蛋氨酸，考察其對C. utilis SZU 07-01細(xì)胞生長和GSH合成的影響（圖1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在考察的濃度范圍內(nèi)，添加L-蛋氨酸雖然對酵母細(xì)胞生長的影響不大，但明顯促進(jìn)了GSH的生物合成，因此GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量均有顯著提升。當(dāng)添加L-蛋氨酸濃度為60 mmol/L時，胞內(nèi)GSH含量和GSH產(chǎn)量均達(dá)到最大值16.9 mg/g和185.6 mg/L，比對照（不添加L-蛋氨酸）分別提高了36.7%和43.2%。由此可見，L-蛋氨酸在參與胞內(nèi)含硫化合物代謝的同時，明顯有助于酵母細(xì)胞內(nèi)GSH合成能力的提高。

2.2 L-蛋氨酸在GSH分批發(fā)酵中的作用

圖2 添加L-蛋氨酸對GSH分批發(fā)酵過程的影響Fig. 2 Effect of L-methionine addition on glutathione p roduction during batch fermentation

在分批培養(yǎng)的0 h，向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加60 mmol/L L-蛋氨酸，考察L-蛋氨酸在GSH分批發(fā)酵中的作用，結(jié)果如圖2所示。與對照（不添加L-蛋氨酸）相比，L-蛋氨酸的添加對酵母細(xì)胞生長幾乎沒有影響，細(xì)胞干質(zhì)量的變化趨勢也基本一致。然而，在L-蛋氨酸添加的條件下，葡萄糖的消耗速率卻有所下降，但也能在第15小時時基本耗完。對于GSH的合成來說，自第3小時開始，GSH的合成速率比對照明顯提高，GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量在第24小時達(dá)到最大值272.2 mg/L和21.5 mg/g，比對照分別提高了36.4%和40.4%。以上結(jié)果表明，作為含硫氨基酸，L-蛋氨酸在分批發(fā)酵過程中的添加同樣可以促進(jìn)GSH的生物合成與積累。

2.3 高密度培養(yǎng)條件下添加L-半胱氨酸的作用

L-半胱氨酸是GSH生物合成的前體氨基酸之一，向培養(yǎng)基中添加L-半胱氨酸可以提高GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量[9-10]。然而，L-半胱氨酸在一定程度上會抑制細(xì)胞的生長，因此通常選擇在細(xì)胞生長結(jié)束時添加L-半胱氨酸為佳[14]。前期研究表明，采用多項式流加方法可以很好地實現(xiàn)C. utilis SZU 07-01細(xì)胞高密度培養(yǎng)，酵母細(xì)胞快速生長，細(xì)胞干質(zhì)量在27 h達(dá)到最大值[16]。為此，本研究在多項式流加培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，考察L-半胱氨酸在高密度培養(yǎng)條件下對GSH生物合成的影響。

在總葡萄糖質(zhì)量濃度為150 g/L前提下實現(xiàn)酵母細(xì)胞的高密度培養(yǎng)，在第27小時一次性向發(fā)酵培養(yǎng)基中添加不同濃度的L-半胱氨酸，GSH合成與細(xì)胞干質(zhì)量隨培養(yǎng)時間的變化情況見圖3。不同批次高密度培養(yǎng)結(jié)果具有很好的一致性，第27小時的細(xì)胞干質(zhì)量、GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量分別為（67.27±0.75）g/L、（435.4±5.4）mg/L和（6.5±0.1）mg/g。添加L-半胱氨酸后，酵母細(xì)胞干質(zhì)量逐漸下降，且L-半胱氨酸濃度越高，其對細(xì)胞干質(zhì)量的不利影響越大。然而，GSH在添加L-半胱氨酸之后快速合成，其產(chǎn)量及胞內(nèi)GSH含量均在第48小時達(dá)到最大值。其中，當(dāng)L-半胱氨酸添加濃度為30 mmol/L時，GSH產(chǎn)量與胞內(nèi)GSH含量分別為1 104.3 mg/L和21.0 mg/g，比對照分別提高了59.7%和85.4%。由此可見，L-半胱氨酸在細(xì)胞生長結(jié)束后可以明顯地促進(jìn)GSH的生物合成，特別地，在提高胞內(nèi)GSH含量上的作用非常顯著。

2.4 兩階段氨基酸添加策略的提出及在GSH高產(chǎn)中的應(yīng)用

以上實驗結(jié)果表明，在細(xì)胞生長階段添加L-蛋氨酸或在細(xì)胞生長停止之后添加L-半胱氨酸均有利于GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量的提高。因此，本研究提出了兩階段氨基酸添加的策略，即在高密度培養(yǎng)的起始（0 h）添加60 mmol/L L-蛋氨酸，然后在細(xì)胞干質(zhì)量達(dá)到最大值時（第27小時）一次性添加30 mmol/L L-半胱氨酸，考察該策略對C. utilis SZU 07-01生物合成GSH的影響，結(jié)果見圖4。

由圖4可以看出，L-蛋氨酸的添加并沒有影響高密度培養(yǎng)過程中細(xì)胞的生長，在第27小時細(xì)胞干質(zhì)量達(dá)到最大值67.44 g/L。同時，胞內(nèi)GSH含量為7.5 mg/g，GSH產(chǎn)量為506.8 mg/L，比圖3中不添加L-蛋氨酸時的結(jié)果分別增加了24.1%和21.6%。這表明L-蛋氨酸在高密度培養(yǎng)過程中對于維持胞內(nèi)GSH含量起到了一定的積極作用。

圖3 添加L-半胱氨酸對高密度培養(yǎng)條件下GSH合成的影響Fig. 3 Effect of L-cysteine addition on glutathione p roduction under high cell density cu lture

圖4 聯(lián)合添加L-半胱氨酸和L-蛋氨酸時的GSH高密度發(fā)酵過程Fig. 4 High-cell-density culture of C. utilis for GSH p roduction w ith the addition of L-cysteine at 27 h and L-methionine at 0 h

在兩階段氨基酸添加策略下進(jìn)行GSH高密度發(fā)酵，GSH產(chǎn)量和胞內(nèi)GSH含量比L-半胱氨酸單獨添加時的結(jié)果有了進(jìn)一步提高，在第48小時二者分別達(dá)到1 247.1 mg/L和24.1 mg/g。高密度發(fā)酵模式下，采取不同氨基酸添加方式的發(fā)酵過程參數(shù)如表1所示。經(jīng)過比較分析可以看出，兩階段氨基酸添加策略不但有利于提高胞內(nèi)GSH含量與GSH產(chǎn)量，而且顯著地提高了GSH生產(chǎn)強度。因此，基于兩階段氨基酸添加的GSH發(fā)酵高產(chǎn)方法是可行的，也具有一定的實際應(yīng)用價值。

表1 氨基酸不同添加方式下的GSH高密度發(fā)酵過程主要參數(shù)比較Tab le 1 Com parison of parameters involved in GSH p roduction by high cell density cultivation under different am ino acid addition modes

3 討 論

GSH分子中既含有氨基和羧基，又含有巰基和γ-谷氨?；沁@種化學(xué)結(jié)構(gòu)上的特殊性，使GSH在醫(yī)藥和食品等行業(yè)中具有廣泛的應(yīng)用前景[1]。為此，研究者們利用基因工程手段構(gòu)建了一系列GSH高產(chǎn)菌株[21-22]，并圍繞GSH生物合成酶[23-24]、代謝調(diào)控[25-26]和胞外分泌[27]等展開了深入研究。盡管如此，針對GSH發(fā)酵過程進(jìn)行優(yōu)化仍然一直是提高GSH生產(chǎn)效率的有效方法[3]。本研究利用C. utilis SZU 07-01發(fā)酵生產(chǎn)GSH，分別從前體氨基酸添加和高密度培養(yǎng)等角度探索提高GSH產(chǎn)量的措施。

研究表明，作為GSH前體氨基酸之一的L-半胱氨酸，當(dāng)在酵母細(xì)胞培養(yǎng)的合適階段適量添加，可以明顯地提高GSH產(chǎn)量[10,14]。由于L-半胱氨酸對細(xì)胞生長的抑制作用，GSH的過量合成都是在細(xì)胞量不變或略微下降的基礎(chǔ)上發(fā)生的。因此，添加L-半胱氨酸可以顯著提高胞內(nèi)GSH含量，即提升了酵母細(xì)胞合成GSH的能力。另外一種含硫氨基酸L-蛋氨酸，它在代謝過程中是L-半胱氨酸生物合成的前體物質(zhì)[13]，所以L-蛋氨酸的添加將有利于在細(xì)胞生長期提高胞內(nèi)用于GSH合成的L-半胱氨酸的供給，進(jìn)而有效地提高GSH產(chǎn)量。值得注意的是，L-蛋氨酸的適量添加，可以在不影響細(xì)胞生長的前提下促進(jìn)細(xì)胞在生長過程中合成GSH（圖2）。因此，采用兩階段氨基酸添加策略，可以同時促進(jìn)生長期和穩(wěn)定期的細(xì)胞過量合成GSH，最終提高整個發(fā)酵過程中的GSH合成總量（圖4）。

GSH屬于胞內(nèi)產(chǎn)物，在發(fā)酵生產(chǎn)時提高酵母細(xì)胞合成GSH的能力對于提高GSH產(chǎn)量非常有效[2]。與此同時，采用合適的培養(yǎng)方法提高細(xì)胞密度也有助于GSH的高效合成。用于GSH生產(chǎn)菌株高密度培養(yǎng)的方法有很多，包括恒速流加、指數(shù)流加、底物濃度反饋控制流加等[8,10,14]，這些方法均取得了一定的成效。為解決底物葡萄糖的流加速率和濃度不斷提高與細(xì)胞消耗葡萄糖速率之間的平衡，將多項式流加策略[16]應(yīng)用于C. utilis SZU 07-01的高密度培養(yǎng)中，GSH產(chǎn)量與分批發(fā)酵比較有了很大提高（圖3）。由于C. utilis SZU 07-01在流加發(fā)酵過程中不產(chǎn)生或只產(chǎn)生少量的乙醇，因此，細(xì)胞和GSH對底物的得率要高于釀酒酵母的結(jié)果[14]。多項式流加策略在酵母細(xì)胞高密度培養(yǎng)中的成功應(yīng)用，為GSH高產(chǎn)提供了理論支持。

表2 近20年國內(nèi)外流加發(fā)酵法生產(chǎn)GSH主要參數(shù)比較Table 2 Com parison of main parameters for GSH p roduction by fed-batch fermentation in recent 20 years

為進(jìn)一步提高微生物合成GSH的能力和效率，研究者們紛紛構(gòu)建了許多基因工程菌株，在高密度培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，采用生物轉(zhuǎn)化方法實現(xiàn)GSH的過量合成[28-31]。近20年來，國內(nèi)外采用流加發(fā)酵法生產(chǎn)GSH的主要文獻(xiàn)列于表2?？梢钥闯?，與其他傳統(tǒng)發(fā)酵法特別是與生物轉(zhuǎn)化法相比，本研究中的GSH產(chǎn)量還有不小的差距。但是，采用兩階段氨基酸添加策略，酵母胞內(nèi)GSH含量相對較高。若綜合考慮所采用的流加發(fā)酵方法和原料成本等因素，本研究的結(jié)果仍然具有一定的競爭力。

綜上，本研究在分別考察了L-蛋氨酸和L-半胱氨酸在GSH分批發(fā)酵和高密度發(fā)酵中的作用的基礎(chǔ)上，以GSH高產(chǎn)為目標(biāo)，提出了兩階段氨基酸添加策略，即在分批培養(yǎng)初始（0 h）時添加60 mmol/L L-蛋氨酸，然后在高密度培養(yǎng)過程中當(dāng)細(xì)胞干質(zhì)量達(dá)到最大值（第27小時）時一次性添加30 mmol/L L-半胱氨酸。將該兩階段策略應(yīng)用到GSH的高密度發(fā)酵中，GSH產(chǎn)量最高為1 247.1 mg/L，胞內(nèi)GSH含量和GSH生產(chǎn)強度也顯著提升。本研究結(jié)果為GSH的高效生產(chǎn)提供了一種方法，同時也對其他類似化合物的高產(chǎn)發(fā)酵具有一定的借鑒意義。

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Improved Glutathione Production in Candida utilis by Two-Stage Am ino Acid Addition

WANG Dahui, NIE M in, WEI Gongyuan*
(School of Biology and Basic Medical Sciences, Soochow University, Suzhou 215123, China)

In order to improve glutathione production by Candida utilis SZU 07-01, the eff ects of addition of L-methionine and L-cysteine on glutathione biosynthesis during batch and fed-batch fermentation, respectively, were investigated. The results indicated that addition of L-methionine improved the glutathione biosynthesis ability of yeast during cell grow th phase while addition of L-cysteine significantly enhanced the production of glutathione after cell grow th. Based on this finding, a two-stage strategy for amino acid addition was proposed for high glutathione production, that is, 60 mmol/L of L-methionine was added into the medium at the beginning of fermentation (0 h), and 30 mmol/L of L-cysteine was then added when the biomass achieved the maximum level (27 h) during fed-batch culture. The two-stage strategy ultimately resulted in further improvements in glutathione production and intracellular glutathione content, which were 1 247.1 mg/L and 24.1 mg/g at 48 h, respectively. The successful application of the two-stage am ino acid addition strategy for improved glutathione production also provides a feasible approach for the effi cient production of other similar compounds.

Candida utilis; glutathione; L-methionine; L-cysteine; fed-batch fermentation

10.7506/spkx1002-6630-201722004

Q815

A

1002-6630（2017）22-0022-06

王大慧, 聶敏, 衛(wèi)功元. 基于兩階段氨基酸添加的谷胱甘肽發(fā)酵高產(chǎn)方法[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(22): 22-27.

DOI:10.7506/spkx1002-6630-201722004. http://www.spkx.net.cn

WANG Dahui, NIE M in, WEI Gongyuan. Improved glutathione production in Candida utilis by two-stage am ino acid addition[J]. Food Science, 2017, 38(22): 22-27. (in Chinese w ith English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201722004.http://www.spkx.net.cn

2016-12-28

國家自然科學(xué)基金面上項目（21376155）；國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項目（21506136）；蘇州市農(nóng)業(yè)應(yīng)用基礎(chǔ)研究項目（SNG201606）

王大慧（1975—），女，副教授，博士，研究方向為食品微生物與生物技術(shù)。E-mail：wangdh@suda.edu.cn

*通信作者：衛(wèi)功元（1975—），男，教授，博士，研究方向為發(fā)酵工程。E-mail：weigy@suda.edu.cn