梅周芳，陳家君，施天昀，都 勇，何 煒，陳鴻軍，揭志軍

（1．復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，上海 200240；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241）

黃芪甲苷對(duì)甲型H1N1流感病毒和呼吸道合胞病毒的抑制作用

梅周芳1，陳家君1，施天昀1，都 勇1，何 煒1，陳鴻軍2，揭志軍1

（1．復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科，上海 200240；2．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所，上海200241）

本研究通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)初步確定黃芪甲苷（Astragaloside IV，AST）抑制甲型流感病毒（Influenza A virus，IAV）H1N1亞型和呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）的生物學(xué)活性，以確定黃芪甲苷對(duì)RSV和IAV的抗病毒作用。使用5 ～100 μg/mL的AST，在不影響細(xì)胞活性的情況下作用HEP-2細(xì)胞和A549細(xì)胞，觀察48 h，檢測(cè)AST對(duì)RSV、IAV的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AST對(duì)RSV無(wú)明顯抑制作用，而在40～100 μg/mL安全劑量下，AST對(duì)IAV在A549細(xì)胞增殖有顯著抑制作用。采集感染后12 h細(xì)胞樣品，real-time RT-PCR檢測(cè)IL-1?、IL-6和TNF-α mRNA的相對(duì)表達(dá)量，結(jié)果顯示，用藥組的細(xì)胞因子轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于感染組。這提示黃芪甲苷對(duì)甲型流感病毒具有一定的抗病毒作用。

黃芪甲苷；甲型流感病毒；呼吸道合胞病毒；抑制

黃芪作為重要中藥材，具有補(bǔ)中益氣的作用，較少單獨(dú)單用，為增加其療效，通常與其他中藥材聯(lián)合使用。近年發(fā)現(xiàn)黃芪的主要成分黃芪甲苷（又稱(chēng)黃芪皂苷IV，Astragaloside IV，AST），不僅可以提高機(jī)體免疫力能力，修復(fù)組織器官，而且具有降低血糖，對(duì)抗細(xì)胞凋亡和抑制炎癥反應(yīng)，對(duì)抗病毒感染等醫(yī)用價(jià)值[1]。黃芪甲苷作為黃芪皂苷中重要活性成分，在抗病毒領(lǐng)域作用獨(dú)到，值得深入發(fā)掘，例如AST對(duì)抗柯薩奇B組3型病毒（Coxsackievirus group B type 3，CVB3）、以及乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）和人腺病毒3型（Human type 3 adenovirus，HAdV-3）等都具有明顯的作用。其中，HAdV-3是引起人體上下呼吸道感染常見(jiàn)的一種病原體[2]。目前有關(guān)黃芪甲苷對(duì)呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus，RSV）及流感病毒感染是否也具有抑制作用還不清楚。

RSV是一種單股負(fù)鏈不分節(jié)段RNA病毒，隸屬于副粘病毒科[3]。甲型H1N1流感病毒（Influenza A virus subtype H1N1，IAV）隸屬于正粘病毒科[4]。RSV是目前我國(guó)乃至西方國(guó)家嬰幼兒下呼吸道感染主要的病原體之一，可導(dǎo)致哮喘或者誘發(fā)過(guò)敏。目前尚未研制出有效的RSV疫苗或特效藥。利巴韋林曾是治療RSV感染的首選藥物，但由于其毒副性作用大而備受爭(zhēng)議。甲型H1N1流感病毒是人季節(jié)性流感和大流感的主要病原。由于抗流感藥物的使用，臨床上也出現(xiàn)大量耐藥毒株，使得該病的治療難度逐漸加大[5]。近年來(lái)，一些傳統(tǒng)中藥材及其提取物由于副作用小，作用快，不易產(chǎn)生耐藥，具有解毒化痰等功效，用于這兩種急性傳染病效果良好。因此，本研究擬通過(guò)體外試驗(yàn)來(lái)研究黃芪甲苷對(duì)RSV、H1N1亞型IAV的抑制作用，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 黃芪甲苷（Astragaloside IV CRS）（HPLC≥98%）購(gòu)自AMACopoeia公司（40mg），使用時(shí)用二甲基亞砜（DMSO），制成10 mg/mL濃度的儲(chǔ)備液；胎牛血清（FBS）、四甲基噻唑藍(lán)（MTT）及牛血清白蛋白（BSA）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胰蛋白酶-EDTA、青霉素/鏈霉素溶液購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；ATPlite檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)PerkinElmer公司；熒光定量試劑盒購(gòu)自Applied Biosystems公司；RNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScript RT試劑盒購(gòu)自TaKaRa公司；TIANamp病毒RNA提取試劑盒購(gòu)自Qiagen公司；抗IAV核蛋白（NP）、內(nèi)參蛋白GAPDH小鼠單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；HRP標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H+L）購(gòu)自Cell Signaling Technology公司。

1.2 病毒和細(xì)胞 RSV強(qiáng)毒株Long株由上海疾病控制中心免疫規(guī)劃科惠贈(zèng)。以1 MOI（multiplicity of infection，MOI）RSV感染人喉癌上皮細(xì)胞株（HEP-2），培養(yǎng)細(xì)胞72 h后收獲，分裝于-80℃保存，用HEP-2測(cè)定半數(shù)細(xì)胞感染量（tissue culture infective dose，TCID50）。H1N1亞型流感病毒A/PR/8/34（PR8）毒株由本室保存，經(jīng)SPF雞胚傳代，于-80℃保存。用犬腎傳代細(xì)胞系（Medin-Darby canine kidney，MDCK）測(cè)定滴度，在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系（A549）中進(jìn)行感染實(shí)驗(yàn)，上述細(xì)胞由本室保存。

1.3 黃芪甲苷對(duì)細(xì)胞的毒性測(cè)定

1.3.1 MTT檢測(cè)法 利用胰蛋白酶消化A549、HEP-2細(xì)胞，將細(xì)胞數(shù)稀釋到1×105細(xì)胞/mL，接種在96孔板中，每孔接種100 μL，培養(yǎng)過(guò)夜，棄去上清液，加入不同系列濃度的藥物（溶解于DMSO的AST用RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液稀釋?zhuān)_保DMSO最終含量≤5‰），并設(shè)溶劑對(duì)照組（含5‰ DMSO不含藥物的基礎(chǔ)培養(yǎng)液）和空白對(duì)照組（不含藥物的基礎(chǔ)培養(yǎng)液），繼續(xù)培養(yǎng)24 h。加入MTT（0.5 mg/mL）20 μL/孔，均勻混合，避光孵育4 h。去除上清液，加入150μL DMSO溶解培養(yǎng)生成的結(jié)晶甲瓚，振蕩10 min讓其充分溶解，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔490 nm波長(zhǎng)吸光值，并計(jì)算細(xì)胞抑制率。

1.3.2 ATPlite檢測(cè)法 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×104/mL，鋪于黑色底透96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，100 μL/孔。細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，將培養(yǎng)液換成100 μL含有不同濃度藥物的RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，進(jìn)行藥物處理。處理后72 h，將培養(yǎng)基倒掉、甩干，盡量無(wú)培養(yǎng)基殘留。每孔加入50 μL ATPlite試劑，微量振蕩器避光振蕩，700 r/min振蕩10 min。多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。

1.4 病毒抑制實(shí)驗(yàn)

1.4.1 實(shí)驗(yàn)分組 設(shè)立正常對(duì)照組（DMSO組）、病毒感染組、黃芪甲苷藥物檢測(cè)組（濃度為0、10、20、40、80、100、200、300、500、1000、2000 μg/mL）。

1.4.2 對(duì)病毒的抑制作用 取100 TCID50病毒液，RSV接種于HEP-2細(xì)胞中，PR8接種于A549細(xì)胞中，37℃分別感作2 h后，洗滌3次，A549細(xì)胞換含不同濃度AST的1 μg/mL TPCK胰酶和1% BSA的RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，HEP-2細(xì)胞換含不同濃度AST的1%血清的RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基。用倒置顯微鏡每天觀察各組細(xì)胞病變狀況，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，重復(fù)3次，觀察藥物是否抑制病毒繁殖。

1.5 熒光定量RT-PCR 分別收獲感染和藥物處理的A549細(xì)胞，用RNA提取試劑盒推薦的操作方法，分別將收集到的細(xì)胞進(jìn)行總RNA抽提。提取RNA后立即在Oligo (dT)18引物下進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，合成cDNA模板，內(nèi)參基因?yàn)镚APDH，real-time qPCR檢測(cè)M基因拷貝數(shù)；以正常對(duì)照組做參照，評(píng)價(jià)M基因mRNA的表達(dá)情況。PR8 M基因的正反引物序列為：FluA-RT-F：5'-GACCRATCCTGTCACCTCTGAC-3'，F(xiàn)luART-R：5'-AGGGCATTYTGGACAAAKCGTCTA-3'內(nèi)參GAPDH基因正反引物序列為：GAPDH-F：5'-G C A C C G T C A A G G C T G A G A A C-3'；GAPDH-R：5'-TGGTGAAGACGCCAGTGGA-3'。為檢測(cè)病毒感染及藥物作用后的細(xì)胞因子水平，測(cè)定A549細(xì)胞感染后的IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA濃度，引物如下：IL1β-102F：5'-CATGGGATAACGAGGCTTATGT-3'，IL1β-102R：5'-CATATGGACCAGACATCACCAA-3'；IL6-107F：5'-CACTCACCTCTTCAGAACGAA T-3'，IL6-107R：5'-GCTGCTTTCACACATGTT ACTC-3'；TNFα-106F：5'-CCAGGGACCTCT CTCTAATCA-3'，TNFα-106R：5'-TCAGCTTGA GGGTTTGCTAC-3'。同時(shí)，設(shè)計(jì)內(nèi)參β-actin，上下游引物為：β-actin-107F：5'-GGACCTGACTG ACTACCTCAT-3'，β-actin-107R：5'-CGTAG CACAGCTTCTCCTTAAT-3'。反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)熔解曲線(xiàn)判定引物的特異性后，確認(rèn)擴(kuò)增曲線(xiàn)。PCR結(jié)束時(shí)，采集熒光信號(hào)確定所需的循環(huán)數(shù)（cycle threshold，Ct）值，使用內(nèi)參β-actin校正目的基因Ct值，△Ct值=Ct目的基因-Ctβ-actin，每個(gè)樣本重復(fù)3個(gè)孔，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組目的基因的相對(duì)表達(dá)倍數(shù)以2-△△Ct表示。

1.6 免疫印跡 將感染前后不同藥物處理的細(xì)胞經(jīng)SDS-PAGE電泳分離，并轉(zhuǎn)至硝酸纖維素薄膜上，脫脂奶粉4℃封閉過(guò)夜；PBST洗滌3次，用稀釋過(guò)的NP、GAPDH抗體孵育過(guò)夜；PBST洗滌3次，用1∶2000稀釋的二抗孵育4 h，PBST洗滌3次；加入化學(xué)發(fā)光試劑盒（ECL）進(jìn)行顯色。

1.7 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析使用Graphpad Prism軟件，組間比較用單因素方差分析（One-way ANOVA）。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s表示。

2 結(jié)果

2.1 黃芪甲苷（AST）對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定結(jié)果 將AST按不同濃度（0、10、20、 40、80、100、200、300、500、1000、2000 μg/ mL），分別加入培養(yǎng)于96孔板的HEP-2細(xì)胞、A549細(xì)胞中，繼續(xù)培養(yǎng)72 h。結(jié)果顯示，AST作用72 h時(shí)，在其濃度為80 μg/mL時(shí)，光鏡下沒(méi)有觀察到AST對(duì)HEP-2細(xì)胞明顯的毒性；而在AST濃度為100 μg/mL時(shí)，則出現(xiàn)明顯的細(xì)胞變圓；AST濃度高于100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞毒性更明顯，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞聚團(tuán)現(xiàn)象。MTT法測(cè)定各孔OD值，計(jì)算細(xì)胞活性，以便確定藥物毒性。結(jié)果顯示，HEP-2細(xì)胞在AST濃度為80 μg/mL時(shí)，存活率達(dá)90%以上，而AST濃度為100 μg/mL時(shí)，存活率降低到70%，超過(guò)100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞幾乎沒(méi)有活性（（圖1A）。說(shuō)明AST在80 μg/mL及其以下濃度時(shí)，對(duì)HEP-2細(xì)胞不具有明顯的細(xì)胞毒性作用，可用于藥效試驗(yàn)。

AST按上述濃度分別作用A549細(xì)胞72 h，AST濃度為80 μg/mL時(shí)，在光鏡下觀察到部分A549細(xì)胞變圓，但沒(méi)有明顯的毒性；AST濃度在100 μg/mL時(shí)，則出現(xiàn)明顯的細(xì)胞變圓；AST濃度高于100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞毒性更明顯，出現(xiàn)明顯的細(xì)胞聚團(tuán)現(xiàn)象。MTT法測(cè)定各孔OD值，結(jié)果顯示，A549細(xì)胞在AST濃度為100 μg/mL時(shí)，細(xì)胞存活率93%以上，而AST濃度為200 μg/mL時(shí)，存活率降低到30%，超過(guò)200 μg/mL時(shí)，細(xì)胞幾乎沒(méi)有活性（圖1B）。說(shuō)明AST在100 μg/mL及其以下濃度時(shí)，對(duì)A549細(xì)胞不具有明顯的細(xì)胞毒性作用，可用于藥效試驗(yàn)。

為了進(jìn)一步檢測(cè)AST作用時(shí)間對(duì)A549細(xì)胞毒性的影響，利用100、50、10 μg/mL三個(gè)濃度的AST分別感染A549細(xì)胞，在48 h以?xún)?nèi)，藥物對(duì)細(xì)胞活性幾乎沒(méi)有明顯影響。通過(guò)ATPlite活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，AST感染A549細(xì)胞24 h和48 h時(shí)，細(xì)胞活性略有降低；AST感染72 h時(shí)，100 μg/mL和50 μg/mL兩個(gè)濃度下細(xì)胞活性降低明顯，分別從均值的2772 nmol/mg降低到868、1532 nmol/mg，其中，100 μg/mL的AST使細(xì)胞的活性降低為原來(lái)的1/3（P<0.01）（圖1C）。可見(jiàn)，AST對(duì)于A549細(xì)胞的毒性作用隨著時(shí)間的延續(xù)逐漸顯現(xiàn)。

圖1 AST對(duì)細(xì)胞活性影響Fig.1 Effect on cell activity of AST

2.2 黃芪甲苷（AST）對(duì)RSV的抑制作用 使用5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的AST在體外作用于HEP-2細(xì)胞，在不影響細(xì)胞活性的情況下，觀察48 h，檢測(cè)AST對(duì)RSV病毒的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AST對(duì)RSV幾乎沒(méi)有抑制作用，即便在稍高濃度（100 μg/mL）下，有些細(xì)胞已經(jīng)開(kāi)始變圓，但AST仍然對(duì)RSV病毒沒(méi)有明顯的抑制作用，抑制率僅10%左右（圖2）。

2.3 AST對(duì)流感病毒PR8抑制作用 通過(guò)建立PR8感染A549的體外細(xì)胞模型，觀察AST干預(yù)后對(duì)PR8感染的細(xì)胞形態(tài)，凋亡，以及相關(guān)細(xì)胞因子的變化，探討AST對(duì)PR8感染具體抑制作用及機(jī)制。5、10、20、40、60、80、100 μg/mL的AST在體外作用于A549細(xì)胞，在不影響細(xì)胞活性的情況下，觀察48 h，檢測(cè)AST對(duì)PR8病毒的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AST對(duì)PR8具有明顯的抑制作用，在高濃度的80 μg/mL時(shí)，PR8病毒的抑制率為75%，而100 μg/mL AST作用時(shí)，PR8病毒的抑制率為97%，AST明顯抑制PR8病毒致病變作用（圖3）。

圖2 AST對(duì)RSV的抑制活性Fig. 2 Inhibition of AST on RSV ampli fi cation

圖3 AST對(duì)PR8病毒的抑制活性Fig.3 Inhibition of AST on IAV PR8 strain

2.4 AST對(duì)流感病毒PR8抑制動(dòng)態(tài)檢測(cè) 使用20、60、100 μg/mL三種不同濃度的AST在體外作用于A549細(xì)胞，分別在PR8作用4、8、12 h等不同感染時(shí)間點(diǎn)，檢測(cè)AST對(duì)PR8病毒的抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，100 μg/mL AST在1 MOI PR8感染后8 h時(shí)，具有明顯抑制作用，PR8病毒在上清中的滴度降低明顯，從對(duì)照的8.34×105TCID50/mL降低成均值為20 TCID50/mL（P<0.01），而60 μg/mL AST作用時(shí)，在感染8 h時(shí)，PR8病毒的滴度降低為178 TCID50/mL（P<0.01）（圖4A）。這種抑制作用在PR8感染12 h時(shí)，基本沒(méi)有變化，而20 μg/mL的AST作用時(shí)，病毒滴度略有降低，但仍然有增殖（圖4B）。由此可見(jiàn)，AST對(duì)PR8起抑制作用需要時(shí)間依賴(lài)性，需8 h時(shí)才體現(xiàn)出抑制作用，與此同時(shí)，在病毒轉(zhuǎn)錄水平變化上，在100 μg/mL AST藥物處理組中時(shí)，病毒M基因與β-actin的相對(duì)比值由原來(lái)的358.0倍降低為38.6倍（P<0.01）（圖4B）。在60 μg/mL AST作用下，病毒M基因與β-actin的相對(duì)比值由原來(lái)的358.0倍降低為76.2倍（P<0.01）。收集PR8感染的A549細(xì)胞，利用NP抗體檢測(cè)，結(jié)果顯示，60、100 μg/mL兩種濃度的AST對(duì)病毒的NP具有明顯的抑制作用（圖4C）。

為了檢測(cè)炎性反應(yīng)的變化，采集上述12 hpi感染樣品，real-time RT-PCR檢測(cè)IL-1β、IL-6和TNF-α的相對(duì)轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于對(duì)照（圖5），結(jié)果提示100 μg/mL AST在體外顯著地降低了IL-1β、IL-6和TNF-α的表達(dá)，尤其IL-6的表達(dá)抑制作用最明顯。

圖4 熒光定量RT-PCR和Western blot檢測(cè)IAV PR8抑制作用Fig. 4 Inhibition of PR8 virus by real-time RT-PCR and Western blot analysis

3 討論

目前廣泛應(yīng)用于臨床使用的兩類(lèi)常見(jiàn)抗流感藥物：一是M2離子通道阻斷制劑（例如金剛烷胺和金剛乙胺），二是神經(jīng)氨酸酶抑制劑（常見(jiàn)的有扎拉米韋、奧司他韋等），這兩類(lèi)藥物均是以病毒本身表面的蛋白質(zhì)做為靶點(diǎn)而開(kāi)發(fā)的藥物制劑，非常容易導(dǎo)致病毒的耐藥變異產(chǎn)生[4,5]。

黃芪應(yīng)用廣泛，最主要的活性成分為黃芪甲苷單體。既往研究表明黃芪甲苷具有對(duì)機(jī)體各種器官的多重保護(hù)作用，國(guó)家藥典目錄中明確規(guī)定，黃芪甲苷乃是黃芪質(zhì)量檢測(cè)的黃金標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[1,2]。Kallon等[6]研究了黃芪多糖對(duì)感染H9N2禽流感病毒雞的體液免疫的影響，發(fā)現(xiàn)黃芪多糖的治療降低了H9N2亞型禽流感病毒的復(fù)制，促進(jìn)了幼齡雞的體液免疫反應(yīng)。張傳杰等[7]研究表明黃芪具有抑制流感病毒，尤其肺部炎癥，從而提高了小鼠的生存率，改善了預(yù)后。褚兆蘋(píng)等[8]研究發(fā)現(xiàn)中等劑量的黃芪多糖能增強(qiáng)甲型流感病毒HA2蛋白真核表達(dá)質(zhì)粒的免疫效果。而有關(guān)黃芪甲苷抗H1N1亞型IAV和RSV等活性還未見(jiàn)報(bào)道。

本研究通過(guò)細(xì)胞感染模型，系統(tǒng)評(píng)價(jià)了AST的體外抗IAV、RSV的活性，結(jié)果顯示，AST在有效濃度范圍內(nèi)，對(duì)RSV幾乎無(wú)抑制作用。當(dāng)黃芪甲苷AST濃度達(dá)到40～100 μg/mL時(shí)，對(duì)PR8毒株具有明顯的病毒抑制效果（圖3、4）。這提示黃芪甲苷可以作為一種低毒的抗流感病毒候選藥物。

在抗炎方面，由結(jié)果可知，AST可明顯降低由流感病毒引起的炎性細(xì)胞反應(yīng)（圖5）。這可能與黃芪甲苷通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)通路活化后，從而抑制促凋亡因子TRAIL或FasL的過(guò)表達(dá)有關(guān)[9]。本研究后續(xù)工作將深入探究黃芪甲苷的抗流感病毒作用機(jī)制，探究其對(duì)宿主體內(nèi)的Raf/MEK/ERK、NF-κB、PI3K/Akt PKC等常見(jiàn)信號(hào)通路的影響和調(diào)控作用等。

圖5 AST抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生Fig. 5 Inhibition of cytokine production by AST

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INHIBITORY EFFECT OF ASTRAGALOSIDE IV ON H1N1 SUBTYPE INFLUENZA A VIRUS AND RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS

MEI Zhou-fang1, CHEN Jia-jun1, SHI Tian-jun1, DU Yong1, HE Wei1, CHEN Hong-jun2, JIE Zhi-jun1

(1.Respiratory Department,The Fifth People's Hospital of Shanghai, Fudan University,Shanghai 200241, China; 2.Shanghai Veterinary Research Institute, CAAS, Shanghai 200241,China)

The inhibitory effect of Astragaloside IV (AST) on H1N1 subtype In fl uenza A virus (IAV) and Respiratory syncytial virus (RSV)was investigated in the present study. HEP-2 cells were treated with 5～100 μg/mL AST and then infected with RSV. The infected cells were observed for 48 hours post infection (hpi) and no signi fi cant inhibition was recorded. Subsequently, A549 cells were treated with 40-100 μg/mL AST and infected with IAV. The growth of IAV was signi fi cantly inhibited when observed at 48 hpi. The infected cells were collected at 12 hpi and total mRNA were extracted. IL-1?, IL-6 and TNF-α cytokines were determined using real-time RT-PCR method.The results showed all of these three cytokines were decreased signi fi cantly at transcriptional levels, indicating that AST had anti-viral activities for IAV-induced in fl ammatory response.

Astragaloside IV; In fl uenza A virus; Respiratory syncytial virus; inhibition

R282.710.5

A

1674-6422（2017）05-0005-06

2017-08-28

上海市閔行區(qū)衛(wèi)生局科研基金（2012MW06）;上海市衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研課題青年項(xiàng)目（20174Y0048）

梅周芳，男，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要研究方向呼吸道感染發(fā)病機(jī)制及治療

陳鴻軍，E-mail：vetchj@shvri.ac.cn；揭志軍，E-mail：jiezjlxh@163.com