蔣雪梅，曹寧寧，徐麗雅，楊興升

(1.濟(jì)南市濟(jì)鋼醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250101；2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250012)

E-cadherin、VEGF、MMP-9在子宮腺肌病和腹壁子宮內(nèi)膜異位癥病變組織中的表達(dá)及意義

蔣雪梅1，曹寧寧1，徐麗雅1，楊興升2

(1.濟(jì)南市濟(jì)鋼醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250101；2.山東大學(xué)齊魯醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 濟(jì)南 250012)

目的探討上皮細(xì)胞鈣粘附蛋白(E-cadherin)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)在子宮腺肌病和腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥病變組織中的表達(dá)及意義。方法選取2006年1月至2016年1月在濟(jì)南市濟(jì)鋼醫(yī)院及山東大學(xué)齊魯醫(yī)院住院且資料完整、經(jīng)病理證實(shí)的子宮腺肌病和腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者各30例。應(yīng)用免疫組織化學(xué)及圖像分析方法，采用秩和檢驗(yàn)比較E-cadherin、VEGF及MMP-9在子宮腺肌病和腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥病變組織中的表達(dá)情況。結(jié)果E-cadherin、VEGF和MMP-9在腹壁子宮內(nèi)膜異位癥組和子宮腺肌病組患者中的表達(dá)相似，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論子宮腺肌病和腹壁子宮內(nèi)膜異位癥病變組織在粘附、血管生成、侵襲等方面高度相似，這兩種疾病是同一種疾病的不同表現(xiàn)形式。

子宮腺肌癥；腹壁子宮內(nèi)膜異位癥；上皮細(xì)胞鈣粘附蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；基質(zhì)金屬蛋白酶-9

腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥(abdominal incisional endometriosis，AIEM)又稱為腹壁子宮內(nèi)膜異位癥(abdominal wall endometriosis，AWE)，是盆腔外子宮內(nèi)膜異位癥常見(jiàn)類型[1]，常見(jiàn)于剖宮產(chǎn)術(shù)后，為剖宮產(chǎn)術(shù)遠(yuǎn)期并發(fā)癥之一。隨剖宮產(chǎn)率升高，近年有升高的趨勢(shì)。剖宮產(chǎn)術(shù)后AIEM的發(fā)生率文獻(xiàn)報(bào)道有一定差距，大部分為0.03%～1.73%[2-4]。子宮腺肌病(adenomyosis，AM)是指子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)異位于子宮肌層中(距子宮內(nèi)膜基底層2 mm以上)[5]。臨床發(fā)現(xiàn)這兩種疾病具有一定相似性：大多與妊娠有一定關(guān)系，臨床表現(xiàn)周期性疼痛，手術(shù)可見(jiàn)質(zhì)硬包塊，侵蝕肌肉組織，與周圍界限不清，均有種植、浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)等惡性生物學(xué)行為，顯微鏡下可見(jiàn)異位的子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)。本研究通過(guò)檢測(cè)上皮細(xì)胞鈣粘附蛋白C(epithelialcalcium-dependentcell-celladhesion molecule，E-cadherin)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在這兩種疾病病變組織中的表達(dá)，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2006年1月至2016年1月在濟(jì)南市濟(jì)鋼醫(yī)院及山東大學(xué)齊魯醫(yī)院住院且資料完整、經(jīng)病理證實(shí)的子宮腺肌病和腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥患者各30例為研究對(duì)象。子宮腺肌病組患者年齡29～53歲，28例有人工流產(chǎn)或刮宮病史，2例原發(fā)不孕。腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥組患者年齡23～42歲，27例有剖宮產(chǎn)病史，2例有剖宮取胎病史，1例有子宮肌瘤切除病史。

1.2 研究方法 所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋切片。采用免疫組化二步法檢測(cè)標(biāo)本中E-cadherin、VEGF及MMP-9。采用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的石蠟切片作陽(yáng)性對(duì)照。按試劑盒說(shuō)明操作。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果判定：E-cadherin主要分布在子宮腺肌病及腹壁內(nèi)異癥病變組織腺上皮細(xì)胞的包膜，呈環(huán)狀表達(dá)。VEGF在子宮腺肌病及腹壁內(nèi)異癥病變組織腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)，以腺上皮表達(dá)較明顯，陽(yáng)性部位在細(xì)胞漿，為細(xì)胞漿內(nèi)棕黃色顆粒狀著色。MMP-9在子宮腺肌病及腹壁內(nèi)異癥病變組織腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)均有表達(dá)，主要表達(dá)在間質(zhì)細(xì)胞的胞漿。參照Shimizu綜合計(jì)分法[6]，得出陽(yáng)性細(xì)胞百分率及計(jì)分。沒(méi)有陽(yáng)性細(xì)胞為0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分率1%～25%定為1分；26%～49%定為2分；＞50%定為3分。著色強(qiáng)度：沒(méi)有著色為0分，淺黃色定為1分，棕黃色定為2分，深棕色或褐色定為3分。0分(-)，2～3 分(+)，4～5 分(++)，＞5分(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 E-cadherin在子宮腺肌病和腹壁子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá) E-cadherin主要分布在異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞的包膜，呈環(huán)狀表達(dá)，間質(zhì)不表達(dá)，見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 E-cadherin在腹壁內(nèi)膜異位癥表達(dá)(×40)；圖2 E-cadherin在子宮腺肌病的表達(dá)(×40)

2.2 VEGF在子宮腺肌病和腹壁子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá) VEGF在病變組織中的陽(yáng)性表達(dá)主要見(jiàn)于腺上皮細(xì)胞的胞漿及異位內(nèi)膜間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，見(jiàn)圖3和圖4。

圖3 VEGF在腹壁內(nèi)膜異位癥表達(dá)(×40)；圖4 VEGF在子宮腺肌病的表達(dá)(×40)

2.3 MMP-9在子宮腺肌病和腹壁子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá) MMP-9在病變組織間質(zhì)和腺上皮細(xì)胞中均有表達(dá)，以間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)為著，且陽(yáng)性部位定位于細(xì)胞漿，見(jiàn)圖5和圖6。

圖5 MMP-9在腹壁內(nèi)膜異位癥表達(dá)(×40)；圖6 MMP-9在子宮腺肌病的表達(dá)(×40)

2.4 兩組患者的E-cadherin、VEGF及MMP-9表達(dá)情況比較 E-cadherin、VEGF和MMP-9在子宮腺肌病組和腹壁內(nèi)異癥組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者的E-cadherin、VEGF及MMP-9表達(dá)情況比較(例)

3 討 論

3.1 子宮腺肌病與腹壁子宮內(nèi)膜異位癥的相關(guān)性 子宮腺肌病與腹壁子宮內(nèi)膜異位癥是臨床表現(xiàn)相似的兩種疾病，關(guān)于AIEM的發(fā)病機(jī)制，Sampson在1927年首次提出了種植學(xué)說(shuō)，醫(yī)源性種植理論常用來(lái)解釋AIEM的發(fā)生，最常見(jiàn)于剖宮產(chǎn)術(shù)后，部分見(jiàn)于卵巢異位囊腫切除術(shù)、子宮肌瘤切除術(shù)后[7]。Leite等[8]研究發(fā)現(xiàn)剖宮產(chǎn)術(shù)的切口子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生率為0.29%。說(shuō)明內(nèi)膜碎片能否在刀口部位種植主要取決于內(nèi)膜碎片的遺傳特質(zhì)、生物活性以及全身因素，也就是“在位內(nèi)膜決定論”學(xué)說(shuō)[9]。子宮腺肌病的確切病因目前仍不清楚，其中廣為接受的理論是子宮基底內(nèi)膜腺體浸潤(rùn)，子宮基底層內(nèi)膜向下生長(zhǎng)和內(nèi)陷的結(jié)果[10]。但子宮內(nèi)膜是如何侵入子宮肌層的？誘發(fā)機(jī)制是什么？至今還不明確。研究表明人工流產(chǎn)、清宮術(shù)等宮腔內(nèi)操作與子宮腺肌病的發(fā)病密切相關(guān)[11]，隨著宮腔內(nèi)操作次數(shù)的增多，患腺肌病風(fēng)險(xiǎn)增大，多次妊娠和流產(chǎn)可能導(dǎo)致子宮內(nèi)膜的損傷，引起子宮內(nèi)膜侵入肌層[12]。人工流產(chǎn)和清宮術(shù)等宮腔操作可能就是子宮內(nèi)膜侵入子宮肌層的誘因，手術(shù)使子宮內(nèi)膜基底層或之下的肌層破壞，子宮內(nèi)膜組織或妊娠后的蛻膜組織定植于子宮肌層，出現(xiàn)子宮腺肌瘤或子宮腺肌病，子宮腺肌病與腹壁子宮內(nèi)膜異位癥一樣，可能也是一種醫(yī)源性疾病，種植學(xué)說(shuō)同樣適用與子宮腺肌病。有研究通過(guò)對(duì)子宮腺肌病標(biāo)本的連續(xù)病理切片觀察，發(fā)現(xiàn)子宮肌層中的內(nèi)膜病灶與宮腔面的子宮內(nèi)膜是直接相連的[13]，說(shuō)明過(guò)多的流產(chǎn)會(huì)導(dǎo)致子宮壁受到更大的損傷，導(dǎo)致子宮內(nèi)膜或妊娠后蛻膜向子宮肌層生長(zhǎng)，形成子宮腺肌病。

3.2 E-cadherin、VEGF、MMP-9的表達(dá)意義 E-cadherin主要介導(dǎo)相同種類上皮細(xì)胞間的粘附作用，E-cadherin表達(dá)缺失可使同型細(xì)胞間的粘附力下降，易于脫落，從而有利于種植灶的形成[14]。研究早已證實(shí)人類子宮內(nèi)膜細(xì)胞中存有VEGF mRNA的表達(dá)，整個(gè)月經(jīng)周期中，子宮內(nèi)膜腺上皮都有VEGF的表達(dá)，并周期性變化，表達(dá)強(qiáng)度分泌晚期達(dá)高峰[15]。VEGF是使異位內(nèi)膜或蛻膜細(xì)胞生成血管，異位定植存活的主要因子，VEGF表達(dá)的升高，表明侵襲性增強(qiáng)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)通過(guò)降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)，穿透細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞的異位粘附，其中的MMP-9通過(guò)特異性降解細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分Ⅴ型、Ⅳ型膠原和明膠，促使異位子宮內(nèi)膜或蛻膜細(xì)胞定植，在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生機(jī)制中具有重要作用[16]。

3.3 本研究的臨床意義 子宮腺肌病是嚴(yán)重困擾患者和臨床醫(yī)生的一種疾病，特別是嚴(yán)重痛經(jīng)和不孕癥，給患者帶來(lái)巨大痛苦，而腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥也是剖宮產(chǎn)術(shù)后常見(jiàn)的遠(yuǎn)期并發(fā)癥。本研究提示子宮腺肌病及腹壁切口子宮內(nèi)膜異位癥病變組織E-cadherin、VEGF、MMP-9的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，說(shuō)明這兩種疾病具有一致性，是同一種疾病的不同表現(xiàn)形式。腹壁子宮內(nèi)膜異位癥是醫(yī)源性疾病。子宮腺肌病與刮宮、人工流產(chǎn)關(guān)系密切。很可能也是醫(yī)源性疾病，但其危害更明顯，繼發(fā)性痛經(jīng)、月經(jīng)失調(diào)，尤其是不孕，浪費(fèi)大量的醫(yī)療資源。由于我國(guó)實(shí)行計(jì)劃生育政策，加之年輕人生育意識(shí)的轉(zhuǎn)變，性教育及性安全意識(shí)淡薄，我國(guó)人工流產(chǎn)居高不下，因此臨床應(yīng)加強(qiáng)性安全及避孕宣教，減少意外妊娠。出現(xiàn)意外妊娠如何選擇流產(chǎn)方式？是否優(yōu)先選擇藥物流產(chǎn)？藥物流產(chǎn)失敗如何清宮減少創(chuàng)傷？如果行人工流產(chǎn)，如何減少流產(chǎn)手術(shù)創(chuàng)傷？這些都是婦產(chǎn)科臨床醫(yī)生應(yīng)該仔細(xì)研究的問(wèn)題。

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Expression of E-cadherin,VEGF,MMP-9 in uterine adenomyosis and abdominal incision endometriosis lesions and their significance.

JIANG Xue-mei1,CAO Ning-ning1,XU Li-ya1,YANG Xing-sheng2.1.Department of Obstetrics and Gynecology,the General Hospital of Ji'nan Iron and Steel Group General Corporation,Ji'nan 250101,Shandong,CHINA;2.Department of Obstetrics and Gynecology,the Qilu Hospital of Shandong University,Ji'nan 250012,Shandong,CHINA

ObjectiveTo explore the expression of epithelial calcium-dependent cell-cell adhesion molecule(E-cadherin),vascular endothelial growth factor(VEGF)and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in uterine adenomyosis and abdominal wall endometriosis lesions and their significance.MethodsA total of 30 cases of abdominal incision endometriosis patients confirmed by pathology of uterine adenomyosis with complete information,who admitted to the General Hospital of Ji'nan Iron and Steel Group General Corporation and the Qilu Hospital of Shandong University from January 2006 to January 2016.The expressions of E-cadherin,VEGF,MMP-9 in the womb gland myopathy and abdominal wall endometriosis lesions were checked with immunohistochemistry and image analysis method,and rank sum test was used to compare the expression results.ResultsThe expressions of E-cadherin,VEGF,MMP-9 in patients with abdominal wall endometriosis and adenomyosis uterine were similar,and there were no statistically significant difference(P＞0.05).ConclusionUterine adenomyosis and abdominal wall endometriosis lesion are highly similar in terms of adhesion,angiogenesis,and invasion.These two diseases are different manifestations of the same disease.

Uterine adenomyosis;Abdominal wall endometriosis;Epithelial Calcium-dependent cell-cell adhesion molecule(E-cadherin);Vascular endothelial growth factor(VEGF);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9)

R711.71

A

1003—6350（2017）20—3300—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.20.011

蔣雪梅。E-mail：m18668988011@163.com

2017-01-11)