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(1.溫州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000; 2.蒼南縣畜牧獸醫(yī)局； 3.瑞安市農(nóng)業(yè)局)

試驗(yàn)研究

溫州地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)O型口蹄疫免疫程序優(yōu)化初探

吳波1，趙妍1，姜斌1，薛成俊2，潘翔翔3

(1.溫州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，浙江溫州 325000; 2.蒼南縣畜牧獸醫(yī)局； 3.瑞安市農(nóng)業(yè)局)

為確定口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)的最佳首免和二免日齡，對(duì)母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律進(jìn)行檢測(cè)、分析。試驗(yàn)選用哺過初乳的同窩健康仔豬10頭，檢測(cè)母源抗體消長(zhǎng)情況；同時(shí)選用30-70日齡哺過初乳的健康仔豬50頭，每組10頭，分別于30、40、50、60和70日齡首免，50、60、70、80和90日齡二免，各組分別于首免后至130日齡測(cè)定免疫抗體效價(jià)。結(jié)果表明，30日齡仔豬母源抗體效價(jià)達(dá)到高峰后逐漸下降；仔豬40日齡首免、60日齡二免的情況下，110日齡內(nèi)免疫抗體合格率均維持在70%以上。

O型口蹄疫；免疫程序；豬

母源抗體在仔豬早期抵抗疫病侵?jǐn)_中發(fā)揮著重要作用，這種保護(hù)會(huì)隨著仔豬日齡的增長(zhǎng)和母源抗體效價(jià)的消減而降低；但很多學(xué)者認(rèn)為母源抗體對(duì)接種疫苗的干擾作用會(huì)造成免疫失敗，仔豬發(fā)生疫病主要由于該疫病的首免時(shí)間不當(dāng)而引起[1]。因此，掌握仔豬母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律是科學(xué)制定免疫程序的前提。

口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+O/GX/09-7株)于2014年獲得新獸藥證書和批準(zhǔn)文號(hào)，能更好覆蓋各種O型口蹄疫流行毒。由該毒株所制備疫苗的免疫程序，尤其是首免和二免的時(shí)間尚未見有報(bào)道。本研究以母豬及所產(chǎn)仔豬為試驗(yàn)對(duì)象，分析母豬分娩前后的O型口蹄疫免疫抗體效價(jià)和仔豬不同日齡的母源抗體效價(jià)動(dòng)態(tài)變化情況；同時(shí)結(jié)合仔豬不同日齡首免和二免的免疫抗體保護(hù)性，通過對(duì)該毒株疫苗的母豬和仔豬相關(guān)保護(hù)性抗體的效價(jià)、保護(hù)率以及維持時(shí)間等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)估，為全面優(yōu)化該疫苗免疫程序提供借鑒。

1 材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物 選用哺過初乳的同窩健康仔豬10頭，檢測(cè)母源抗體消長(zhǎng)情況；選用30-70日齡哺過初乳的健康仔豬50頭，每組10頭，分別首免和二免后進(jìn)行抗體效價(jià)檢測(cè)。試驗(yàn)期間，除O型口蹄疫疫苗免疫接種外，不接種其他疫苗，由專人負(fù)責(zé)隔離飼養(yǎng)，常規(guī)配合飼料飼喂。

1.1.2供試疫苗 豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)由內(nèi)蒙古某生物科技有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：2015015)。

1.1.3檢測(cè)試劑 口蹄疫O型間接血凝抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：20160303201)購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1免疫接種 注射部位為耳根后頸部肌肉，首次免疫劑量為1.5頭份(3 mL)，二免劑量為2頭份(4 mL)。

1.2.2分組采血 母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律：分別于20、30、40、50、60和70日齡連續(xù)采血檢測(cè)；最佳首免和二免日齡試驗(yàn)：設(shè)A、B、C、D、E五個(gè)試驗(yàn)組，分別于30、40、50、60和70日齡首免，50、60、70、80和90日齡二免，各組分別于首免后至130日齡檢測(cè)抗體效價(jià)。

1.2.3抗體效價(jià)檢測(cè) 按照口蹄疫診斷技術(shù)規(guī)程(NY/SY 150-2000)操作，抗體效價(jià)以nlog2表示。

1.2.4判定標(biāo)準(zhǔn) 以100%凝集血清最大稀釋孔為該血清樣品的抗體效價(jià)。IHA效價(jià)≥5log2判定為合格，IHA效價(jià)<5log2判定為不合格，以合格數(shù)計(jì)算保護(hù)性抗體比率。

2 結(jié)果與分析

2.1母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律 詳見表1。

表1 不同日齡仔豬母源抗體IHA效價(jià)檢測(cè)結(jié)果

注：母豬分娩前后血清抗體效價(jià)為8log2。

由表1可見，仔豬母源抗體水平呈逐漸下降趨勢(shì)，40日齡前抗體效價(jià)維持在≥6log2區(qū)間，40日齡后保護(hù)性抗體效價(jià)快速下降，至50日齡時(shí)保護(hù)性抗體合格率已低于70%。按照農(nóng)業(yè)部規(guī)定70%合格率標(biāo)準(zhǔn)，50日齡后已無法起到有效保護(hù)。

2.2最佳首免和二免日齡 口蹄疫疫苗經(jīng)首免和二免后各組抗體效價(jià)平均值、保護(hù)率及維持時(shí)間詳見表2。B、C、D三組免疫效果的三個(gè)指標(biāo)整體優(yōu)于A組和E組，B組保護(hù)性抗體高效價(jià)免疫后維持時(shí)間與C組和D組接近。

表2 分組免疫后小豬各日齡IHA效價(jià)

注：各組(A、B、C、D和E)母豬分娩前后血清抗體效價(jià)分布在7log2-10log2區(qū)間內(nèi)；每組供試仔豬10頭。

結(jié)合表1和表2結(jié)果，分析獲得各組仔豬在20-130日齡期間保護(hù)性抗體效價(jià)和保護(hù)率變化趨勢(shì)(分別詳見圖1和圖2)。仔豬50-70日齡的母源抗體保護(hù)率低于70%，需通過免疫刺激仔豬免疫系統(tǒng)在40日齡后產(chǎn)生高效價(jià)的保護(hù)性抗體。B組在110日齡前抗體效價(jià)平均值和保護(hù)率均能維持在5.4log2和70%以上，符合農(nóng)業(yè)部規(guī)定的5log2效價(jià)下限和70%合格率標(biāo)準(zhǔn)。A組和B組雖都符合該要求，但A組抗體效價(jià)和保護(hù)率整體水平不高，且在80日齡后顯著下降，均不如B組理想。C、D和E組雖然在40日齡前能依賴母源抗體保護(hù)，但分別于50、60和70日齡前均未能產(chǎn)生足夠有效由免疫應(yīng)答產(chǎn)生的保護(hù)性抗體。

綜上所述，在母豬經(jīng)O型口蹄疫免疫情況下，豬口蹄疫O型滅活疫苗(O/Mya98/XJ/2010株+ O/GX/09-7株)于40日齡首免、60日齡二免的情況下，其免疫抗體效價(jià)相對(duì)最佳，因母源抗體干擾引起的免疫失敗或低效價(jià)水平發(fā)生的可能性相對(duì)較低。

圖1 保護(hù)性抗體效價(jià)變化趨勢(shì)

圖2 保護(hù)性抗體的保護(hù)率變化趨勢(shì)

3 小結(jié)與討論

3.1仔豬母源抗體對(duì)疫苗免疫的影響 根據(jù)本次試驗(yàn)結(jié)果可以看出，在母豬具有較高口蹄疫免疫抗體效價(jià)的情況下，仔豬能夠通過哺喂初乳方式獲得有效的母源抗體，且維持時(shí)間至40日齡左右均能得到有效保護(hù)。母源抗體不僅能夠保護(hù)低齡仔豬抵抗疫病感染，同時(shí)也可有效發(fā)揮疫苗免疫干擾的副作用[2]。A組在母源抗體滴度較高時(shí)經(jīng)疫苗免疫，其免疫效果均低于其它試驗(yàn)組。反之，若首免日齡過晚則可能導(dǎo)致仔豬某一時(shí)間段暴露在低抗體效價(jià)高感染風(fēng)險(xiǎn)的環(huán)境之中。

3.2非同窩仔豬之間抗體水平檢測(cè)的局限性 本次試驗(yàn)?zāi)冈纯贵w(對(duì)照組)采用同窩仔豬跟蹤檢測(cè)，在仔豬哺喂初乳、奶頭固定及前期護(hù)理工作到位情況下，同窩仔豬之間的橫向抗體水平差異不大。然而，免疫試驗(yàn)組與對(duì)照組試驗(yàn)動(dòng)物均屬非同窩仔豬，保護(hù)性抗體效價(jià)和保護(hù)率變化趨勢(shì)是對(duì)照組與試驗(yàn)組結(jié)合的結(jié)果。本試驗(yàn)場(chǎng)點(diǎn)母豬每胎產(chǎn)仔11-13頭，且試驗(yàn)過程中出現(xiàn)個(gè)別仔豬因采血等應(yīng)激因素造成的非正常狀態(tài)，難以實(shí)現(xiàn)從出生到130日齡的全程采樣，存在一定的局限性。

3.3非經(jīng)免母豬與經(jīng)免母豬所產(chǎn)仔豬免疫程序的差異 據(jù)張華才等(2005)[3]報(bào)道，非經(jīng)免母豬初乳中無保護(hù)性母源抗體，仔豬在沒有母源抗體干擾下，對(duì)疫苗免疫效果無影響。在存在母源抗體時(shí)，仔豬于30日齡首免、60日齡加強(qiáng)免疫后抗體隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降至轉(zhuǎn)陰，母源抗體對(duì)疫苗免疫效果干擾嚴(yán)重。這就合理地解釋了部分豬場(chǎng)為何在育肥階段豬體血清中檢測(cè)不到抗體。母豬分娩前加強(qiáng)免疫對(duì)仔豬獲得保護(hù)性母源抗體至關(guān)重要，仔豬母源抗體具有兩面性[4-5]，關(guān)鍵在于首免時(shí)間的控制。

3.4育肥豬110日齡前三免的必要性 目前，溫州地區(qū)大部分豬場(chǎng)商品豬免疫2-3次，即45-50日齡首免，90日齡二免，三免無固定日齡，往往在每年4月份春防或9月份秋防時(shí)補(bǔ)免一次。結(jié)合圖1和圖2，經(jīng)兩次免疫的商品豬110日齡后基本喪失對(duì)口蹄疫病毒的抵抗力。據(jù)筆者觀察，大部分豬場(chǎng)發(fā)病都是從育肥豬開始，肥豬發(fā)病后產(chǎn)生大量病毒，使部分具備不完全保護(hù)力的豬群，尤其是仔豬隨其感染發(fā)病，出現(xiàn)仔豬繼發(fā)感染死亡或轉(zhuǎn)為“僵豬”和育肥豬耐過情況。故建議在前2次基礎(chǔ)免疫的基礎(chǔ)上，于90-110日齡左右加強(qiáng)免疫一次。

3.5其他免疫因素的影響 溫州地區(qū)仔豬斷奶日齡普遍為28日齡，易發(fā)生仔豬斷奶應(yīng)激綜合征；若30日齡首免仔豬可能引起較為明顯的疫苗應(yīng)激副作用，對(duì)刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答可能帶來不利影響。在免疫注射部位方面，何家惠(1999)[6]等報(bào)道，通過后海穴注射，無任何副作用，疫苗用量小，抗體滴度高于頸后肌內(nèi)注射；但在臨床應(yīng)用上操作較為不便，尤其是大豬保定不穩(wěn)，且深度難以控制，容易刺傷甚至刺穿直腸。兩者各有利弊，需根據(jù)操作人員的技術(shù)水平適當(dāng)選用。免疫劑量方面，黃衛(wèi)平等(2012)[7]報(bào)道，大劑量使用疫苗短期內(nèi)會(huì)提高仔豬的免疫保護(hù)力，但可能造成抗體水平不均衡，離散度較大，部分仔豬呈高免狀態(tài)，會(huì)對(duì)二免造成很大干擾，使豬群極易在受疫病威脅地區(qū)或季節(jié)暴發(fā)口蹄疫。

[1] 吳云飛等.豬瘟、藍(lán)耳病及豬O型口蹄疫母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律[J].畜牧獸醫(yī)雜志, 2016,1:29-32.

[2] Wesley R D,Lager K M.Overcoming maternal anti-body interference by with vaccination human adenovirus 5 recombinant viruses expressing the hemagglutinin and the nucleoprotein of swine influenza virus[J].Vet Microbiol,2006,118:67-75.

[3] 張華才,高佃平.母源抗體干擾對(duì)豬口蹄疫疫苗免疫的影響分析[J].江西畜牧獸醫(yī),2005,5:50-51.

[4] 王峰.豬O型口蹄疫疫苗不同豬齡免疫抗體分析試驗(yàn)[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,21:118-119.

[5] 邱伯根等.母源抗體對(duì)口蹄疫疫苗主動(dòng)免疫應(yīng)答的影響[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2006,36:1-4.

[6] 何家惠等.豬口蹄疫免疫程序的研究[J].畜牧與獸醫(yī),1999,2:27-28.

[7] 黃衛(wèi)平,程曉等.規(guī)?；i場(chǎng)仔豬口蹄疫免疫程序的制定[J].四川畜牧獸醫(yī), 2012,10:18-20.

2017-06-20

吳波(1981-)，男，浙江溫州人，高級(jí)獸醫(yī)師，碩士，主要從事動(dòng)物疫病綜合防控工作。E-mail：cris414727@126.com

S858.28

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1005-7307(2017)05-0001-003