胡居正，石展英，楊成志

(柳州市工人醫(yī)院創(chuàng)傷中心，廣西柳州 545005)

T淋巴細(xì)胞亞群與四肢骨折感染的相關(guān)性研究

胡居正，石展英，楊成志

(柳州市工人醫(yī)院創(chuàng)傷中心，廣西柳州 545005)

四肢；骨折，開放性；感染；T淋巴細(xì)胞亞群；Th1細(xì)胞；Th2細(xì)胞

四肢開放性骨折是臨床上最為常見的骨折類型之一。此外，由于開放性骨折的皮膚黏膜損傷使骨折端與外界環(huán)境接觸，加之患者骨折創(chuàng)面常常受到污染，導(dǎo)致四肢開放性骨折患者的感染率居高不下[1]。而四肢開放性骨折患者發(fā)生感染會(huì)加大臨床治療的難度，甚至?xí)?dǎo)致嚴(yán)重的不良預(yù)后[2]。因此,研究四肢開放性骨折感染的相關(guān)因素，從而提出預(yù)防措施具有重要的臨床價(jià)值。但是，目前的研究多集中在住院時(shí)間等臨床資料中[3]，而對(duì)于T淋巴細(xì)胞亞群等免疫指標(biāo)是否與四肢開放性骨折發(fā)生感染具有相關(guān)性，罕見報(bào)道。因此，本研究對(duì)223例四肢開放性骨折患者的感染情況、T淋巴細(xì)胞亞群及輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)1/Th2的變化情況進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2014年1月1日至2015年1月1日于本院骨科進(jìn)行手術(shù)治療的223例四肢開放性骨折患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均經(jīng)臨床及影像學(xué)等檢查明確診斷為四肢開放性骨折；(2)未伴有其他器官創(chuàng)傷；(3)傷后24 h內(nèi)來院就診。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)伴有免疫性疾病的患者；(2)近期使用過免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素或其他對(duì)免疫功能及炎性介質(zhì)釋放有影響的藥物；(3)伴有其他器官嚴(yán)重疾患的患者；(4)拒絕參加本研究的患者。將出現(xiàn)感染相關(guān)癥狀，相應(yīng)組織或分泌物細(xì)菌培養(yǎng)陽性的34例患者納入感染組，其中男20例、女14例，平均年齡(26.97±3.78)歲，平均傷后至手術(shù)時(shí)間(28.90±11.98)h，上肢骨折22例、下肢骨折12例，骨折原因：交通意外16例、摔傷8例、砸傷3例、其他7例；未出現(xiàn)感染的189例患者納入未感染組，其中男102 例、女87例，平均年齡(26.53±3.43)歲，平均傷后至手術(shù)時(shí)間(29.78±11.53)h，上肢骨折106例、下肢骨折83例，骨折原因：交通意外89例、摔傷43例、砸傷12例、其他45例。另選擇同期來本院體檢中心進(jìn)行健康體檢的30例健康體檢者為健康對(duì)照組，其中男18例，女12例，平均年齡(28.93±4.53)歲。3組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。所有研究對(duì)象均簽署知情同意書，本研究通過醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2方法 四肢開放性骨折患者均于全身麻醉下行切開復(fù)位內(nèi)固定，且均由同一組醫(yī)師實(shí)施。在入院時(shí)、術(shù)后第1天采集患者肘部靜脈血，其中健康對(duì)照組在體檢過程中采取靜脈血，均進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。(1)T淋巴細(xì)胞亞群：采用美國(guó)BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群分析，試劑盒采用美國(guó)BD Biosciences公司提供的Simultest IMK雙色淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)試劑盒；(2)Th細(xì)胞亞群：采用熒光激活細(xì)胞分離儀(FACS)常規(guī)分離淋巴細(xì)胞,經(jīng)刺激劑佛波二酯、依諾霉素和細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑Monensin處理后加入CD4+單克隆抗體，使用FACS計(jì)數(shù)細(xì)胞，試劑盒由上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司提供。上述操作均由本院檢驗(yàn)科經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師按試劑盒說明進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1各組T淋巴細(xì)胞亞群變化情況 未感染組與感染組患者入院時(shí)CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于健康對(duì)照組，而CD8+細(xì)胞百分比明顯高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；感染組患者入院時(shí)及術(shù)后1 d CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于未感染組，CD8+細(xì)胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

2.2各組Th1/Th2細(xì)胞變化情況 未感染組與感染組入院時(shí)Th1細(xì)胞百分比和Th1/Th2比值均明顯低于健康對(duì)照組，Th2細(xì)胞百分比明顯高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；感染組患者入院時(shí)及術(shù)后1 d Th1細(xì)胞百分比和Th1/Th2比值明顯低于未感染組，而Th2細(xì)胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表1 各組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

*：P<0.05，與健康對(duì)照組比較；#：P<0.05，與同組入院時(shí)比較；△：P<0.05，與未感染組比較

表2 各組Th1/Th2細(xì)胞水平比較

*：P<0.05，與健康對(duì)照組比較；#：P<0.05，與同組入院時(shí)比較；△：P<0.05，與未感染組比較

2.3四肢骨折感染相關(guān)因素多因素Logistic回歸分析 以是否并發(fā)感染為因變量，以上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素為自變量進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，將CD4+細(xì)胞百分比、CD8+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細(xì)胞百分比、Th2細(xì)胞百分比和Th1/Th2比值等因素帶入多元Logistic回歸分析模型進(jìn)行分析，結(jié)果顯示：四肢骨折感染與術(shù)后1 d CD4+細(xì)胞百分比、 CD4+/CD8+比值、Th1細(xì)胞百分比和Th1/Th2比值密切相關(guān)，見表3。

表3 四肢骨折與免疫功能的相關(guān)性分析

3 討 論

在機(jī)體抗感染過程中細(xì)胞免疫發(fā)揮著極其重要的作用，而T淋巴細(xì)胞亞群是細(xì)胞免疫功能的重要組成部分之一[4]。T淋巴細(xì)胞根據(jù)表面分化抗原的不同分為CD4+亞群和CD8+亞群。機(jī)體內(nèi)不同的T淋巴細(xì)胞亞群發(fā)揮著不同而又相互聯(lián)系的免疫功能，既相互協(xié)作也相互制約，從而促使機(jī)體維持正常的免疫應(yīng)答平衡。CD4+亞群是Th，在體內(nèi)可促進(jìn)B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞及機(jī)體其他免疫細(xì)胞的增殖與分化,從而促進(jìn)機(jī)體的免疫應(yīng)答；而CD8+亞群的功能與CD4+亞群相反，主要包括抑制性T細(xì)胞(Ts)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc)/殺傷T細(xì)胞(Tk)，具有抑制體液及細(xì)胞免疫的功能，同時(shí)能有效地抑制B淋巴細(xì)胞及CD4+細(xì)胞活性，從而對(duì)機(jī)體的免疫反應(yīng)發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用[5]。CD4+/CD8+平衡狀態(tài)是反映機(jī)體免疫功能是否平衡的重要指標(biāo)之一，機(jī)體嚴(yán)重創(chuàng)傷或者發(fā)生骨折后會(huì)發(fā)生免疫功能的紊亂，表現(xiàn)為細(xì)胞免疫抑制，特別是T淋巴細(xì)胞亞群介導(dǎo)的細(xì)胞免疫功能明顯下降，主要表現(xiàn)為CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值明顯下降，機(jī)體自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)及其他細(xì)胞因子激活機(jī)體殺傷細(xì)胞的能力明顯下降[6-7]。本研究結(jié)果顯示，四肢骨折患者入院時(shí)CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值均明顯低于健康對(duì)照組，而CD8+細(xì)胞百分比明顯高于健康對(duì)照組，這種情況切開復(fù)位內(nèi)固定后更為明顯。此外，術(shù)后1 d CD4+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值與四肢骨折感染關(guān)系密切， 這說明四肢骨折對(duì)機(jī)體是一種嚴(yán)重的應(yīng)激性刺激，可以導(dǎo)致患者的免疫功能發(fā)生紊亂，而手術(shù)可能加重免疫功能的紊亂，并且感染組患者更為嚴(yán)重。因此，四肢骨折患者感染的發(fā)生與自身外周血T淋巴細(xì)胞免疫功能嚴(yán)重降低密切相關(guān)，四肢開放性骨折外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化，尤其CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值是四肢開放性骨折患者發(fā)生感染的重要指標(biāo)。

與四肢開放性骨折感染密切相關(guān)的CD4+亞群又可以分為Thl、Th2細(xì)胞亞群，其中Thl細(xì)胞主要產(chǎn)生白細(xì)胞介素(IL)-2、干擾素-γ(IFN-γ)等細(xì)胞因子從而增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫應(yīng)答，而Th2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子，在機(jī)體發(fā)揮調(diào)節(jié)體液免疫的作用[8-9]。相關(guān)研究顯示，創(chuàng)傷、手術(shù)等應(yīng)激性刺激均會(huì)導(dǎo)致Thl、Th2細(xì)胞平衡破壞，出現(xiàn)以Th2細(xì)胞為優(yōu)勢(shì)的克隆轉(zhuǎn)換，Thl型細(xì)胞因子分泌則會(huì)受到明顯的抑制，出現(xiàn)Th1/Th2細(xì)胞平衡紊亂，表現(xiàn)為抗炎性細(xì)胞因子占優(yōu)勢(shì)的免疫抑制[10]。本研究結(jié)果同樣顯示，骨折后發(fā)生Th1/Th2細(xì)胞平衡紊亂，Th1細(xì)胞百分比下降，而Th2細(xì)胞百分比升高，導(dǎo)致產(chǎn)生的細(xì)胞因子種類和數(shù)量變化,從而影響正常的免疫功能，導(dǎo)致四肢骨折感染的發(fā)生。多因素Logistic回歸分析同樣顯示，術(shù)后Th1細(xì)胞百分比和Th1/Th2比值與四肢骨折感染密切關(guān)系。

綜上所述，入院初期及術(shù)后四肢開放性骨折患者外周血CD4+/CD8+及Th1/Th2細(xì)胞平衡紊亂是發(fā)生感染的危險(xiǎn)因素之一，應(yīng)引起臨床重視。

[1]Hull PD，Johnson SC，Stephen D，et al．Delayed debridement of severe open fractures is associated with a higher rate of deep infection[J]．Bone Joint J，2014，96(3)：379-384．

[2]Parmaksizoglu F，Cansü E，Unal MB，et al．Acute emergency tibialization of the fibula:Reconstruction of a massive tibial defect in a type ⅢC open fracture[J]．Strategies Trauma Limb Reconstr，2013，8(2)：127-131.

[3]王韜，晏新，扶世杰，等．開放性骨折患者醫(yī)院感染臨床分析及預(yù)防措施[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2015，25(10)：2291-2293．

[4]Dimitropoulou D，Karakantza M，Tsamandas AC，et al．T-Lymphocyte subsets in peripheral blood and liver tissue of patients with chronic hepatitis B and C[J]．In Vivo，2011，25(5)：833-840．

[5]Grotzke JE，Lewinsohn DM．Role of CD8+T lymphocytes in control of Mycobacterium tuberculosis infection[J]．Microbes Infect，2005，7(4)：776-788.

[6]姚曉聰．不穩(wěn)定骨盆骨折患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化及臨床意義[J/CD]．中華危重癥醫(yī)學(xué)雜志(電子版)，2013，6(3)：26-28．

[7]李友軍，黃增峰，方作春．嚴(yán)重創(chuàng)傷患者APACHE評(píng)分和T淋巴細(xì)胞亞群變化特點(diǎn)及與預(yù)后的關(guān)系[J]．廣東醫(yī)學(xué)，2015，53(11)：1700-1702．

[8]Shayghannejad V，Bagherpour B，Gharagozloo MA，et al．Th1,Th2 and Th17 cytokine profile in patients with multiple sclerosis following treatment with rapamycin[J]．Iran J Immunol，2016，22(3)：413-414.

[9]Malaiyan J，Ramanan PV，Subramaniam D，et al．Analysis of serum Th1/Th2 cytokine levels in patients with acute mumps infection[J]．J Glob Infect Dis，2016，8(2)：87-92.

[10]Wang SY，Li TY，Zheng YQ．Effects of cardiopulmonary bypass on plasma pentraxin-3 level and the balance of Th1/Th2 function in children with congenital heartmalformations[J]．Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2009，89(15)：1024-1027.

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.29.038

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳自籌經(jīng)費(fèi)科研基金資助項(xiàng)目(Z2013625)。

胡居正(1975-)，副主任醫(yī)師，碩士，主要從事臨床創(chuàng)傷研究。

目的探討外周血T淋巴細(xì)胞亞群與四肢開放性骨折感染的關(guān)系。方法選取2014年1月1日至2015年1月1日于該院骨科進(jìn)行手術(shù)治療的223例四肢開放性骨折患者，根據(jù)是否感染分為感染組(34例)與未感染組(189例)。另選取同期體檢健康者30例作為健康對(duì)照組?；颊哂谌朐簳r(shí)、術(shù)后1 d，健康對(duì)照組于體檢過程中采靜脈血，以流式細(xì)胞法檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群及輔助性T淋巴細(xì)胞(Th)1/Th2比值并進(jìn)行比較，同時(shí)采用多因素Logistic回歸分析T淋巴細(xì)胞亞群及Th1/Th2平衡與四肢開放性骨折感染的關(guān)系。結(jié)果感染組與未感染組患者入院時(shí)CD4+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細(xì)胞百分比、Th1/Th2比值均明顯低于健康對(duì)照組，CD8+細(xì)胞百分比和Th2細(xì)胞百分比明顯高于健康對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；并且感染組患者入院時(shí)及術(shù)后1 d CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值、Th1細(xì)胞百分比、Th1/Th2比值均明顯低于未感染組，而CD8+細(xì)胞百分比和Th2細(xì)胞百分比明顯高于未感染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；多因素Logistic回歸分析顯示，四肢骨折感染與術(shù)后1 d CD4+細(xì)胞百分比、CD4+/CD8+比值、Th1細(xì)胞百分比及和Th1/Th2比值明顯相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論入院初期及術(shù)后四肢開放性骨折患者外周血CD4+/CD8+及Th1/Th2細(xì)胞平衡紊亂是發(fā)生感染的危險(xiǎn)因素之一，應(yīng)引起臨床重視。

R683

B

1671-8348(2017)29-4153-03

2017-03-20

2017-06-18)