代 萌，任麗娜，江 玲，王齊敏，劉 媛，劉春芳

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬大連市中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科, 遼寧 大連116000; 2. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 病理科, 遼寧 大連 116027)

代 萌(1982-)，女，主治醫(yī)師。E-mail：446916982@qq.com

劉春芳，教授。E-mail：zxyylcf611@126.com

論著

10.11724/jdmu.2017.05.04

BPTF因子在肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義

代 萌1，任麗娜1，江 玲1，王齊敏2，劉 媛1，劉春芳1

(1.大連醫(yī)科大學(xué)附屬大連市中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科, 遼寧 大連116000; 2. 大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 病理科, 遼寧 大連 116027)

目的探討溴區(qū)PHD結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子(bromodomain and PHD domain transcription factor, BPTF)在肺腺癌中的表達(dá)及其對(duì)預(yù)后的影響。方法收集來(lái)自大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院病理科及上海超芯公司的90例肺腺癌及其癌旁的組織標(biāo)本, 通過(guò)免疫組化檢測(cè)BPTF因子表達(dá)情況,分析其與患者臨床病理資料的相互關(guān)系, 并對(duì)隨訪資料進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析和Cox回歸分析。結(jié)果BPTF因子在肺腺癌高表達(dá)率為68.9%，與癌旁組織(1.3%)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。BPTF因子表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM臨床分期有關(guān)(P均<0.05)。BPTF高表達(dá)5年總生存率為44.2%，低表達(dá)為70.77%，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。多因素分析顯示臨床分期以及BPTF的表達(dá)水平為肺腺癌患者的預(yù)后影響因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。結(jié)論BPTF高表達(dá)對(duì)肺腺癌患者預(yù)示更差的預(yù)后。

BPTF；肺腺癌；預(yù)后

肺癌近年來(lái)其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)呈持續(xù)明顯上升的趨勢(shì)[1]，BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) 是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的新的癌蛋白，作為NURF(nucleosome remodeling factor)的最大的一個(gè)亞基，在正常細(xì)胞中起到參與染色質(zhì)重塑的作用。然而當(dāng)其過(guò)度表達(dá)時(shí)，BPTF對(duì)黑色素細(xì)胞瘤及肺癌細(xì)胞起到重要的發(fā)生發(fā)展的作用。目前發(fā)現(xiàn)BPTF通過(guò)激活MAPK及PI3K通路同時(shí)抑制caspase-8細(xì)胞凋亡途徑來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。然而，在人類肺腺癌樣本的水平上研究BPTF對(duì)患者預(yù)后的影響目前報(bào)道很少，本研究旨在探討B(tài)PTF在肺腺癌中的表達(dá)情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 病例資料

共收集90例肺腺癌病例，其中75例來(lái)自于上海超芯公司，直接購(gòu)買該公司組織微陣列芯片，另外15例來(lái)自于于大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院。90例樣本均有其癌旁正常肺組織作為對(duì)照。所有病例均為2004年1月至2010年12月手術(shù)治療的肺腺癌患者，且手術(shù)前未行放化療，患者均有較完整的臨床病理資料，包括年齡，性別，家族史，手術(shù)后病理信息等等。本研究已通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 隨 訪

大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院來(lái)源的病例，通過(guò)電話隨訪及門診復(fù)查兩個(gè)途徑進(jìn)行隨訪跟蹤，隨訪內(nèi)容主要為生存情況，術(shù)后輔助治療情況，復(fù)發(fā)，影像學(xué)檢查及腫瘤標(biāo)志物水平。隨訪時(shí)間截止為患者發(fā)病后5年，最后截止時(shí)間為2016年12月。本研究的終點(diǎn)事件定義為任何原因?qū)е碌乃劳??？偵鏁r(shí)間為術(shù)后第1天到任何原因?qū)е滤劳龅臅r(shí)間。上海超芯公司來(lái)源的的病例其隨訪資料由公司提供。

1.3 IHC檢測(cè)BPTF方法及評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

免疫組織化學(xué)染色(IHC)：經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度水化，除去內(nèi)源性過(guò)氧化物酶(Peroxidase)活性，高壓抗原修復(fù)，PBS緩沖液洗滌，IHC油性筆繞切片周圍劃圈，圈好后滴加羊血清封閉30 min。一抗孵育：BPTF(購(gòu)自Abcam公司)按1∶50進(jìn)行稀釋，覆蓋整張切片，4 ℃孵育過(guò)夜。再PBS緩沖液洗滌4次，每次3 min。二抗孵育：滴加二抗，室溫孵育1 h。PBS緩沖液洗滌4次，每次3 min。DAB顯色2～3 min，清水沖洗終止反應(yīng)。蘇木素復(fù)染1～2 min，鹽酸酒精分化1～3 s。脫水干燥，中性樹脂封片，觀察。

陽(yáng)性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：兩名資深病理醫(yī)師依據(jù)染色強(qiáng)弱的程度作出評(píng)分。依據(jù)染色深淺把“-”評(píng)為0分，“+”評(píng)為1分，“++”評(píng)為2分，“ +++”評(píng)為3分，4個(gè)等級(jí)。依據(jù)組織染色面積把<25%評(píng)為1分，25%～50%評(píng)為2分，50%～75%評(píng)為3分，超過(guò)75%評(píng)為4分?？偡譃槿旧顪\評(píng)分X 染色面積評(píng)分，最高分12分，我們定義7分以上為高表達(dá)，低于6分為低表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料比較及BPTF表達(dá)與臨床病理特征關(guān)聯(lián)性分析采用卡方檢驗(yàn)。應(yīng)用Kaplan-Meier法(組間生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn))和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行生存分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 BPTF因子肺腺癌及癌旁組織的表達(dá)

BPTF因子在肺腺癌高表達(dá)率為68.9%，癌旁組織中僅為1.3%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

2.2 BPTF因子表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

BPTF因子表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM臨床分期有關(guān)(P均<0.05)，而與性別、年齡、浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。見(jiàn)表1。

2.3 BPTF因子表達(dá)與患者術(shù)后生存期的關(guān)系

對(duì)90例患者進(jìn)行隨訪，BPTF因子高表達(dá)者5年總生存率為44.2%，低表達(dá)者為70.77%，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖 2。

2.4 BPTF表達(dá)對(duì)肺腺癌患者預(yù)后的影響

Cox回歸單因素分析顯示腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期及BPTF的表達(dá)為肺腺癌患者的預(yù)后影響因素。多因素分析顯示臨床分期以及BPTF的表達(dá)水平為肺腺癌患者的預(yù)后影響因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。見(jiàn)表2。

3 討 論

BPTF是NURF(核小體重塑因子，nucleosome remodelling factor)的最大的一個(gè)亞基，染色質(zhì)重塑是基因表達(dá)調(diào)控的基本的也是最重要的環(huán)節(jié)。目前發(fā)現(xiàn)BPTF在參與染色體重塑中起到識(shí)別組蛋白甲基化和乙?；稽c(diǎn)的作用，PHD鋅指結(jié)構(gòu)域可以特異性識(shí)別并結(jié)合二甲基或是三甲基H3K4(H3K4me2/3)，其臨近的溴區(qū)結(jié)構(gòu)域可以特異性結(jié)合在H4在K12、K16或是K20乙酰化肽段。通過(guò)與這些甲基化和乙酰化位點(diǎn)結(jié)合后，基因轉(zhuǎn)錄活性可以被大大增強(qiáng)[3]。BPTF在生物學(xué)功能上可以調(diào)控真核細(xì)胞的發(fā)育。研究表明BPTF突變后，小鼠的外胚層發(fā)育受到抑制，胚胎在晚期出現(xiàn)流產(chǎn)[4]，胸腺的發(fā)育也會(huì)受到抑制[5]。另外，還發(fā)現(xiàn)當(dāng)BPTF表達(dá)失控時(shí)與肺癌，膀胱癌，肝癌及黑色素細(xì)胞瘤也有一定的關(guān)系。Balbs-Martínez等[7]通過(guò)外顯子測(cè)序的方法揭示了BPTF基因在膀胱癌中出現(xiàn)頻繁突變。Buganim等[8]檢測(cè)了17 q24.3即BPTF基因所在位置，發(fā)現(xiàn)BPTF與肺的癌前病變有關(guān)，并且有27%的肺癌中檢測(cè)到17q24.3基因突變。進(jìn)一步研究顯示BPTF在黑色素細(xì)胞瘤及非小細(xì)胞肺癌[9-10]，通過(guò)激活MAPK及PI3K-AKT通路，并抑制caspase-8及BCL-2凋亡通路來(lái)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。進(jìn)一步研究表明BPTF通過(guò)與c-Myc啟動(dòng)子結(jié)合從而調(diào)控c-Mcy蛋白的表達(dá)。

A～B: BPTF因子在肺腺癌高表達(dá); C～D: BPTF因子在肺腺癌低表達(dá); E～F: BPTF因子在癌旁低表達(dá)。A、C、E(×50); B、D、F(×200)圖1 BPTF因子在肺腺癌及癌旁組織中的表達(dá)Fig 1 Expression of BPTF in adenocarcinoma and in normal lung tissue

Tab 1 Association among BPTF and clinicopathological features in 90 cases with lung adenocarcinoma n (%)

總數(shù)(n=90)BPTF高表達(dá)(n=62)BPTF低表達(dá)(n=28)P性別0.120 男性4929(59.18)20(40.82) 女性4133(80.49)8(19.51)年齡(歲)0.823 <604229(69.05)13(30.95) ≥604833(68.75)15(31.25)腫瘤分期0.436 T1+T27146(64.79)25(35.21) T3+T41916(84.21)3(15.79)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.025 N0+N16033(55.00)27(45.00) N2+N31919(100.00)0(0) Nx11臨床分期0.016 I4726(55.32)21(44.68) II1812(66.67)6(33.33) III2120(95.24)1(4.76) IV44(100.00)0(0)

圖2 90例肺腺癌患者BPTF低表達(dá)與BPTF高表達(dá)總生存分析Fig 2 Overall survival analysis with high and low expression of BPTF in 90 lung adenocarcinoma

RR95%CI兩組數(shù)據(jù)比較P單因素分析 腫瘤分期2.1351.706-4.787T1+T2/T3+T40.045 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5.4232.483-11.579N0+N1/N2+N30.000 臨床分期1.7831.331-2.473I/II期/III/IV期0.000 BPTF8.4932.591-28.220高表達(dá)/低表達(dá)0.000多因素分析 臨床分期1.8901.405-2.900I/II期/III/IV期0.000 BPTF7.9672.251-28.732高表達(dá)/低表達(dá)0.001

本研究檢測(cè)90例肺腺癌BPTF的蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)68.9%高表達(dá)。BPTF蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與所報(bào)道的bptf基因突變陽(yáng)性表達(dá)率不一致，很多的因素影響B(tài)PTF的轉(zhuǎn)錄以及翻譯，基因組畸變僅僅是其中一個(gè)主要的因素。本研究90例臨床組織樣本中，發(fā)現(xiàn)BPTF高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)和臨床分期有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)越多、越是晚期病人BPTF的表達(dá)越高。肺腺癌病人的生存期與BPTF蛋白表達(dá)以及臨床分期有關(guān)。越是晚期病人、BPTF表達(dá)越高則生存期越短。最后，通過(guò)Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，BPTF高表達(dá)的病人生存期比BPTF低表達(dá)的病人生存期短。綜上所述，BPTF在人類肺腺癌標(biāo)本中是一個(gè)關(guān)鍵的因子，為肺腺癌提供了潛在的治療靶點(diǎn)。

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EffectofBPTFexpressionontheprogressoflungadenocarcinoma

DAI Meng1, REN Lina1, JIANG Ling1,WANG Qimin2, LIU Yuan1, LIU Chunfang1

(1.RespiratoryDepartment,DalianCentralHospitalAffiliatedtoDalianMedicalUniversity,Dalian116000,China；2.DepartmentofPathology,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China)

ObjectiveTo research the effect of BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) on human lung adenocarcinoma.MethodsNinety lung adenocarcinoma tissue samples from affiliated 2nd hospital, Dalian medical university and Shanghai Xinchao Company were collected and analized about the relationship between BPTF and clinical phathological characteristics. Further, Kaplan-Meier and Cox regression analysis were carried out.ResultsBPTF positive expression rate was 68.9%, comparing to the adjacent normal lung tissue (1.3%), the difference was significant (P<0.05). BPTF high expression was related with lymph node metastasis and TNM clinical phases (P<0.05). The five-year overall survival was 44.2% in BPTF high expressed group, but it was 70.77% in BPTF low expressed group. The difference in the two groups was signifecant(P<0.05). Multipal factor analisis showed the clinical phrase and the expression of BPTF was the important effective factors to the lung adenocarcinoma prognosis(RR=1.890, 95%CI 1.405-2.900,P<0.01, RR=7.967, 95% CI 2.251-28.73,P<0.01).ConclusionThe high expressed BPTF predicted a poor prognosis in lung adenocarcinoma.

BPTF; lung adenocarcinoma; prognosis

R734.2

A

1671-7295(2017)05-0433-04

代萌，任麗娜，江玲，等.BPTF因子在肺腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017,39(5)：433-436，445.

2017-09-10；

2017-10-03)