鐘光華 劉麗賢 朱曉慧 唐 娉 黃云龍

循環(huán)腫瘤細胞檢測在預測非小細胞肺癌化療療效中的應用

鐘光華 劉麗賢 朱曉慧 唐 娉 黃云龍

目的探討循環(huán)腫瘤細胞檢測在預測非小細胞肺癌化療療效中的應用。方法選擇非小細胞肺癌患者(肺Ca組)共25例，另選擇慢性阻塞性疾病患者(COPD組)25例作為對比研究。入院后及化療2個周期后分別采集所有參與研究的人員靜脈血7.5 ml，利用密度梯度離心法富積循環(huán)腫瘤細胞，分析其與臨床特征及化療療效的關系。結果

肺Ca組循環(huán)腫瘤細胞陽性率達72.00%，而COPD組陽性率為0，差異具有統計學意義(P<0.05)。循環(huán)腫瘤細胞陽性表達與NSCLC病理類型、患者性別、年齡、吸煙情況等均無明顯關系(P>0.05)，僅與癌癥分期相關(P<0.05)。2個周期的化療結束，發(fā)現對循環(huán)腫瘤細胞數目的評價與實體腫瘤療效標準評價大致吻合，差異不具備統計學意義(P>0.05)。相關分析發(fā)現這兩種評價方法呈負相關關系(γ=-0.465P=0.021)。結論循環(huán)腫瘤細胞的存在與非小細胞肺癌的臨床分期及化療療效有密切關系，可以用來預測非小細胞肺癌的轉歸。

循環(huán)腫瘤細胞；非小細胞肺癌；預測；化療

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1521～1523)

隨著環(huán)境污染程度增加，吸煙人群及被動吸煙人群不斷擴大，肺癌的發(fā)病率逐年升高[1]。在肺癌中，80%以上是非小細胞肺癌，常發(fā)生于中老年患者[2]。手術完全切除腫瘤是使患者達到“無瘤狀態(tài)”的最好方式，但對于晚期非小細胞肺癌患者，綜合治療可能更為安全有效。循環(huán)腫瘤細胞指腫瘤細胞進入體循環(huán)，與腫瘤轉移密切相關[3-4]。本研究通過對循環(huán)腫瘤細胞的探索，明確其與非小細胞肺癌臨床特征及化療療效的關系，探討其預測肺癌疾病轉歸的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇于2015年8月至2015年12月間我院收治的非小細胞肺癌患者25例(肺Ca組)，另選擇在我院接受治療的慢性阻塞性疾病患者25例(COPD組)作為對比研究。參選的非小細胞肺癌患者需滿足：①伴有咳嗽、咳血、痰中帶血等臨床表現；②經胸部高分辨率CT、支氣管鏡檢查及病理活檢，診斷為晚期非小細胞肺癌明確，且為Ⅲ期或Ⅳ期患者；③均無化療禁忌證，血常規(guī)、肝腎功、心電圖都符合正常范圍。整個研究均在患者知情同意下進行，并經我院倫理委員會批準實施。2組患者在性別、BMI、年齡、病程、癥狀表現以及吸煙史等一般資料方面沒有明顯的差異，無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 2組患者一般資料比較

1.2 方法

入院后采集所有患者靜脈血7.5 ml，加入到肝素抗凝試管混勻。用磷酸鹽緩沖液混入其中，充分搖勻，加到細胞分離層面上，以2 000 r/min的轉速，離心3次，15 min/次。將富積到的細胞均勻涂在玻片上，使用人鼠抗Pan-細胞角蛋白(CK)(生產廠家：上海賓智生物科技有限公司)和4、6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)(生產廠家：上海久嶺化工有限公司)染色。最后采用免疫熒光顯微鏡(生產廠家：北京上六光儀器有限公司)觀察。整個操作過程注意避光、無污染。

非小細胞肺癌患者均采用相同的化療方案(紫杉醇+卡鉑)治療2個周期?；熎陂g每日常規(guī)用托烷司瓊止吐、還原性谷胱甘肽保肝及埃索美拉唑保胃等對癥支持治療?；熃Y束后復查血常規(guī)、胸部高分辨率CT判斷腫瘤是否得到緩解。化療結束后重新采集非小細胞肺癌患者的血清利用密度梯度離心法富積循環(huán)腫瘤細胞，判斷治療效果。

1.3 觀察指標及療效判定

觀察到的循環(huán)腫瘤細胞陽性標準為：①細胞呈圓形或橢圓形，體積明顯大于血細胞，形態(tài)完整；②可以同時被CK和DAPI染色。

化療療效評定標準：①參照2009歐洲癌癥雜志發(fā)表的實體腫瘤療效評價標準(RECIST1.1)[5]分為部分緩解、穩(wěn)定、進展。②循環(huán)腫瘤細胞數目評價標準[6]：以7.5 ml靜脈血中腫瘤細胞減少1個以上為緩解、不變?yōu)榉€(wěn)定、增加1個以上為進展。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 2組患者檢測循環(huán)腫瘤細胞情況的比較分析

肺Ca組循環(huán)腫瘤細胞陽性率達72.00%(18/25)，而COPD組卻1例都沒有，差異具有統計學意義(μ=28.1250，P<0.05)。

2.2 循環(huán)腫瘤細胞陽性表達與各因素的關系分析

在非小細胞肺癌患者中，循環(huán)腫瘤細胞陽性表達與性別、年齡、吸煙情況、病理類型等均無明顯關系(P>0.05)，僅與癌癥分期相關(P<0.05)。見表2。

表2 比較循環(huán)腫瘤細胞陽性與各因素的關系(例，%)

2.3 循環(huán)腫瘤細胞數目的評價與實體腫瘤療效評價的相關性

比較2個周期的化療治療效果，發(fā)現對循環(huán)腫瘤細胞數目的評價與實體腫瘤療效評價標準大致吻合，無統計學差異(P>0.05)。相關分析發(fā)現這兩種評價方法呈負相關關系(γ=-0.465，P=0.021)。見表3。

表3 循環(huán)腫瘤細胞數目對療效的評價與實體腫瘤療效評價的相關性(例，%)

3 討論

根據世界衛(wèi)生組織2011年公布的數據顯示，肺癌在發(fā)病率和死亡率都高居全球癌癥首位[7]。傳統手術治療雖然可以使部分患者達到術后病除，但也有部分患者及時做了手術，不僅沒使病情好轉，反而因手術的創(chuàng)傷及術后并發(fā)癥，加快了死亡進程。相關文獻表明，而今治療的方式還主要是以手術切除為主，輔以新輔助化療、放化療結合等綜合治療方法，能有效改善患者病情，延長生存時間，達到“治愈”效果[8-10]。

Ⅳ期非小細胞肺癌患者由于失去了根治切除腫瘤的機會，通常采用綜合化療的方法，能夠得到一定治療療效?；煹母灸康氖鞘鼓[瘤組織體積縮小、盡早殺滅轉移到他處的細胞，以保證患者的生存質量[11]。由于腫瘤組織血流豐富，化療藥物可進入體內，有效殺死部分腫瘤細胞，達到縮小腫瘤體積的效果，降低肺癌分期，提高手術切除的可能性，改善患者生存質量。而常規(guī)判定化療療效的方法通常包含肺部CT、血常規(guī)、腫瘤標志物等間接手段，不能從根本上判斷是否局限了腫瘤擴散[12]。

循環(huán)腫瘤細胞的提出，可以為診治非小細胞肺癌提供新思路。其可以是因腫瘤達到Ⅳ期后“被迫”轉到體循環(huán)內，種植到新的轉移灶的傳遞員；也可能腫瘤臨床分期不高，但距離血管組織較近，血管壁被腫瘤組織長期侵犯而擴散入血，但只要能在外周血中檢測到循環(huán)腫瘤細胞，就預示著該患者的預后會較差[13]。我院通過研究發(fā)現外周血中循環(huán)腫瘤細胞陽性表達率高達72.00%，而對照研究的25例慢性阻塞性肺疾病患者外周血中均無循環(huán)腫瘤細胞的發(fā)現，說明了其表達的特異性。通過對該25例NSCLC患者的臨床特征進行研究，發(fā)現循環(huán)腫瘤細胞陽性表達與吸煙情況、性別、病理類型、年齡等均無明顯關系，而16例Ⅳ期患者表達率高達93.76%，9例Ⅲ期患者表達33.33%，說明其與臨床分期具有密切關系，也正驗證了以上觀點。通過2個周期的化療治療，發(fā)現采用實體腫瘤評定法與腫瘤細胞數評定法得到的患者臨床療效評價大致相同，說明這兩種方法呈負相關性(γ=-0.46,P=0.021)，充分肯定了循環(huán)腫瘤細胞預測非小細胞肺癌化療療效的判定。

綜上所述，本研究認為了解循環(huán)腫瘤細胞與非小細胞肺癌患者臨床特征的關系，對于完善晚期非小細胞肺癌的病因學和分子病理學理論、對于發(fā)現新的預測療效方法及患者預后的生物標志物、對于提高非小細胞肺癌的早期診斷和治療水平具有重要的意義，也為如何通過影響循環(huán)腫瘤細胞表達水平而達到預防非小細胞肺癌的轉移打下理論基礎；另外也可以為新型抗非小細胞肺癌的藥物開發(fā)提供新的策略和思路，具有廣闊的應用前景。

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(編輯：甘艷)

DetectionofCirculatingTumorCellsinPredictingNon-smallCellLungCancerChemotherapy

ZHONGGuanghua，LIULixian，ZHUXiaohui，etal.

ChanchengCentralHospital，Foshan,528000

ObjectiveTo analyze detection of circulating tumor cells in predicting non-small cell lung cancer chemotherapy.MethodsSelect 25 case of non-small cell lung cancer and 25 patients with chronic obstructive pulmonary disease as a comparative study.Collecting 7.5 mL blood from all persons who were participating in the study after 2 cycles of chemotherapy and after admission，Density gradient centrifugation enrichment of circulating tumor cells and analyze the relationship between clinical features and efficacy of chemotherapy.ResultsCirculating tumor cells in both groups were found，the number of positive cases of pulmonary Ca group reached 72.00%，while positive cases of the COPD group was 0，the difference was obvious，there had statistical significance(P<0.05).There was no significant correlation of positive expression with age，gender，smoking status，pathological type，etc，the difference had no statistical significance(P>0.05)，only related with the staging of cancer(P<0.05).After 2 cycles of chemotherapy，evaluation of circulating tumor cells and clinical evaluation criteria in solid tumor were coincident(P>0.05).The 2 methods were negatively correlated(γ=-0.465P=0.021).ConclusionThe presence of clinical stage and chemotherapy for non-small cell lung cancer is closely related to circulating tumor cells，which can be used to predict the prognosis of non-small cell lung cancer.

Circulating tumor cells；Non-small cell lung cancer；Prediction；Chemotherapy

528000 廣東省佛山市禪城區(qū)中心醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.09.037

R734.2

A

1001-5930(2017)09-1521-03

2016-09-08

2017-03-23)