傅桂霞

(青島市第九人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 青島 266002)

Array-ELISA檢測(cè)六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌的臨床價(jià)值分析

傅桂霞

(青島市第九人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 青島 266002)

目的探討微陣列酶聯(lián)免疫法(Array-ELISA)檢測(cè)六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物診斷結(jié)直腸癌(CRC)的臨床價(jià)值。方法選擇49例CRC患者作為CRC組，選擇19例同期進(jìn)行結(jié)直腸手術(shù)的良性病變患者作為良性組，另取同期71例健康體檢者作為對(duì)照組。采集3組患者的靜脈血，通過(guò)Array-ELISA技術(shù)進(jìn)行六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物(AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199)檢測(cè)。比較3組血清六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果、CRC組ROC AUC結(jié)果、以及CRC組PRE與6項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)參數(shù)。結(jié)果(1)CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對(duì)照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(2)單項(xiàng)檢測(cè)中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價(jià)值，Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。(3)本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項(xiàng)中最高；聯(lián)合檢測(cè)中Logistic回歸預(yù)測(cè)變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)。結(jié)論Array-ELISA對(duì)CRC患者六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物均有理想的檢測(cè)效果，但單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可以有效提高CRC的檢出率。

Array-ELISA；六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物；結(jié)直腸癌；臨床價(jià)值

結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是臨床最為常見的惡性腫瘤，由于早期無(wú)特異性的表現(xiàn)，多數(shù)患者就診時(shí)往往已步入晚期，繼而喪失了最佳的治療時(shí)機(jī)[1]。因此，盡早采取有效的診斷與治療措施是延長(zhǎng)CRC患者生存時(shí)間的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)，單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物對(duì)CRC的特異性與敏感性具有一定的局限性，而多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物則可以提高CRC的診斷率，且對(duì)轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)與術(shù)后療效具有顯著的評(píng)價(jià)作用[2]。微陣列酶聯(lián)免疫法(Array-ELISA)是生命科學(xué)中的一項(xiàng)高新科技檢測(cè)技術(shù)，其技術(shù)平臺(tái)主要包括現(xiàn)代微陣列技術(shù)、酶促化學(xué)發(fā)光技術(shù)及低溫電荷耦合器成像技術(shù)。為了進(jìn)一步完善CRC患者的臨床診療方案，本研究采用Array-ELISA法對(duì)49例CRC患者進(jìn)行了六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)，并采用ROC曲線與Logistic回歸分析來(lái)探討六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物對(duì)CRC的臨床診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選擇2016年1月至2016年12月本院收治的49例CRC患者作為CRC組，其中男性26例，女性24例；平均年齡(65.2±5.2)歲；選擇同期于本院進(jìn)行結(jié)直腸手術(shù)的19例良性病變患者作為良性組，其中男性10例，女性9例；平均年齡(65.5±5.3)歲。(1)所有患者均經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)；(2)原發(fā)性病變；(3)本次研究?jī)?nèi)容已告知患者或其家屬，并取得其知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)疾??；(2)近期有感染史。另取同期于本院進(jìn)行體檢的71例健康體檢者作為對(duì)照組(均無(wú)結(jié)直腸疾病史，臨床檢查未見異常)，其中男性36例，女性35例；平均年齡(65.7±5.4)歲。3組研究對(duì)象在性別及年齡構(gòu)成比較中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2檢測(cè)方法

在晨起空腹?fàn)顟B(tài)下，采集3組患者的靜脈血3 mL，放置20 min后，離心5 min，控制室溫在1 800×g，使血清分離，對(duì)腫瘤標(biāo)志物[糖類抗原 125(CA125)、癌胚抗原(CEA)、前列腺特異性抗原(PSA)、糖類抗原 199(CA199)、甲胎蛋白(AFP)和糖類抗原153 (CA153)]進(jìn)行檢測(cè)。(1)試劑與儀器：ECLIA分析儀由德國(guó)羅氏公司提供，均配置原廠校準(zhǔn)品、試劑與質(zhì)控物。Array-ELISA六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)試劑盒由北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司提供。(2)Array-ELISA原理：采用雙抗體夾心試劑盒，以微陣列形式將CA153、CEA、AFP、CA199、CA125及PSA特異性抗體組織排布在微孔板內(nèi)，其中加入待檢測(cè)血漿標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品，待發(fā)生反應(yīng)后洗滌，添加酶標(biāo)抗體工作液給予持續(xù)性溫育反應(yīng)，完成反應(yīng)后再次洗滌，最后添加發(fā)光液，根據(jù)待測(cè)標(biāo)志物的濃度來(lái)增加發(fā)光信號(hào)。通過(guò)生物芯片閱讀設(shè)備準(zhǔn)確采集與處理微孔板內(nèi)微陣列信號(hào)、圖像，結(jié)合數(shù)據(jù)處理軟件，獲取到六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物標(biāo)本內(nèi)的定量數(shù)據(jù)結(jié)果。(3)Array-ELISA檢測(cè)步驟：將六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物標(biāo)本、50 μL待測(cè)標(biāo)本及質(zhì)控品依次加入微孔板內(nèi)；第1次溫育；采用封口膜將其封口，并振蕩45 min，溫度控制在37 ℃；5次洗液洗板，拍干；之后加入50 μL酶標(biāo)抗體工作液，第2次溫育；再予5次洗板，拍干；最后在每個(gè)孔內(nèi)加入發(fā)光液A與B混合物40 μL，馬上放入到生物芯片閱讀設(shè)備內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.3觀察指標(biāo)

(1)觀察3組血清六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果。參照試劑參考指標(biāo)：CA153<31.3 U/mL、CA199<37 U/mL、CA125<35 U/mL、CEA0.00～5.00 ng/mL、AFP 0.00～7.00 ng/mL、PSA 0.00～4.00 ng/mL，<參考指標(biāo)為陰性，≥參考指標(biāo)為陽(yáng)性。(2)觀察CRC組的ROC AUC結(jié)果。以AFP、CEA、PSA、CA125、CA153及CA199為檢驗(yàn)變量，將診斷結(jié)果作為狀態(tài)變量進(jìn)行ROC曲線分析。(3)觀察CRC組PRE與六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的相關(guān)參數(shù)。通過(guò)Forward condition法實(shí)施Binary Logistic回歸分析[3]，去除無(wú)用變量，分析其余變化，得到CRC的概率預(yù)測(cè)方程，即P=1/[1+e-(-1.253+0.068AFP+0.033CA199-0.065CA154-0.018CA125)]，計(jì)算出個(gè)體預(yù)測(cè)值的變量PRE，并以似然比檢測(cè)Logistic回歸模型。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過(guò)SPSS15.0對(duì)六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物的數(shù)據(jù)分布情況進(jìn)行狀態(tài)檢驗(yàn)，非正態(tài)分布以Mann Whitney U及Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，正態(tài)分布以方差分析；計(jì)數(shù)資料、特異性與敏感性對(duì)比以χ2檢驗(yàn)。采用Logistic回歸選擇變量，建立回歸方程與新變量，各項(xiàng)單項(xiàng)指標(biāo)與新變量進(jìn)行ROC曲線分析。

2 結(jié)果

2.1 3組血清六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 CRC組ROC AUC評(píng)價(jià)

單項(xiàng)檢測(cè)中，CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價(jià)值，CA153(AUC 0.576)與PSA(AUC=0.553)ROC曲線幾乎成對(duì)角線，診斷價(jià)值較低；Logistic回歸模型建立的PRE面積為0.932，均高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。見表2。

表1 3組血清六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

*P<0.05，與良性組比較；#P<0.05，與對(duì)照組比較。

表2 CRC組ROC AUC評(píng)價(jià)

2.3 CRC組PRE與6項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物相關(guān)參數(shù)評(píng)價(jià)

本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項(xiàng)中最高；聯(lián)合檢測(cè)中Logistic回歸預(yù)測(cè)變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)。見表3。

表3 CRC組PRE與6項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物相關(guān)參數(shù)評(píng)價(jià)

*P<0.05，與CEA比較。

3 討論

近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展與完善，CRC患者除了采用影像學(xué)與病理學(xué)診斷外，血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)也得到了臨床的廣泛關(guān)注[4]。腫瘤標(biāo)志物又稱為腫瘤標(biāo)記物，是惡性腫瘤細(xì)胞中的特征性存在，或由惡性腫瘤細(xì)胞異常形成的物質(zhì)，或是宿主對(duì)腫瘤刺激反應(yīng)而形成的物質(zhì)，可作為評(píng)價(jià)腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、判斷抗腫瘤治療效果的一類物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物主要存在于腫瘤患者體液、血液、組織及排泄物內(nèi)，可以通過(guò)生物學(xué)、免疫學(xué)及化學(xué)方法檢測(cè)到[5-6]。然而，研究發(fā)現(xiàn)，單個(gè)腫瘤標(biāo)志物的特異性與敏感性有限，所以國(guó)際上普遍采用多項(xiàng)標(biāo)志物聯(lián)合方案進(jìn)行檢驗(yàn)，以便保證診療質(zhì)量[7]。目前，臨床主要采用酶免疫分析、放射免疫分析、時(shí)間分辨熒光免疫分析、化學(xué)發(fā)光免疫分析、生物芯片技術(shù)及ECLIA技術(shù)進(jìn)行腫瘤標(biāo)志物檢驗(yàn)[8]。上述傳統(tǒng)檢測(cè)方法各具有優(yōu)勢(shì)，所以在較長(zhǎng)一段時(shí)間，各項(xiàng)方式以互補(bǔ)方式應(yīng)用。

現(xiàn)階段，醫(yī)學(xué)界所發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物約100余種，而選擇正確的標(biāo)志物組合對(duì)腫瘤診斷具有至關(guān)重要的作用[9]。美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)、美國(guó)臨床生化學(xué)會(huì)等研究發(fā)現(xiàn)，六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物PSA、CEA、AFP、CA199、CA125及CA153是評(píng)價(jià)腫瘤最為明確、穩(wěn)定及敏感度高的標(biāo)志物，幾乎可以適用于任何常見的腫瘤，對(duì)臨床診斷與評(píng)價(jià)抗腫瘤治療效果具有重要的意義[10-11]。CEA是檢測(cè)CRC最為靈敏的指標(biāo)，但因單項(xiàng)檢測(cè)存在一定的假陰性與假陽(yáng)性，所以臨床易發(fā)生漏診。多項(xiàng)研究指出，為了有效降低誤診與漏診的發(fā)生概率，采用多個(gè)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)來(lái)提高診斷CRC診斷的準(zhǔn)確率與靈敏度十分必要[12-13]。Array-ELISA試劑盒可以對(duì)六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，不僅縮短了檢測(cè)時(shí)間，且一次性檢出，控制了單項(xiàng)檢測(cè)的成本[14]。Array-ELISA的檢測(cè)原則是在相互無(wú)影響的基礎(chǔ)上，將腫瘤標(biāo)志物抗體等多類特異性生物活性物以固定的微陣列方式排列在每個(gè)微孔板板孔中，當(dāng)血漿內(nèi)抗原/抗體特異性結(jié)合于包被抗體/抗原后，再結(jié)合于酶標(biāo)抗體而形成免疫復(fù)合物，添加發(fā)光液，由生物芯片分析，繼而獲取到多項(xiàng)定量檢測(cè)指標(biāo)。本研究采用Array-ELISA技術(shù)對(duì)CRC患者的六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示CRC組血清CEA、AFP、CA199及CA125水平均高于良性組與對(duì)照組(P<0.05)。3組PSA與CA153水平對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同時(shí)，本研究采用Logistic回歸分析，擬合最佳回歸曲線與ROC曲線，觀察六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷CRC的效果，以及特異度、靈敏度及準(zhǔn)確率。結(jié)果提示，單項(xiàng)檢測(cè)中CEA(AUC=0.916,P=0.001)具有最高的診斷價(jià)值，說(shuō)明CEA是CRC診斷的最佳單項(xiàng)標(biāo)志物，這與部分研究結(jié)果相符[15]。采用聯(lián)合檢測(cè)時(shí)，Logistic回歸分析所得出的預(yù)測(cè)變量PRE面積為0.932，均高于單項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。此結(jié)果可見，聯(lián)合檢測(cè)能夠有效提高CRC的診斷效能。此外，本組CRC患者中的CEA特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率在單項(xiàng)中最高，聯(lián)合檢測(cè)中Logistic回歸預(yù)測(cè)變量PRE的特異度、靈敏度與準(zhǔn)確率高于CEA(P<0.05)，進(jìn)一步說(shuō)明聯(lián)合檢測(cè)利于CRC的檢出。

總之，Array-ELISA對(duì)CRC患者六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物均有理想的檢測(cè)效果，但單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物診斷CRC的特異度、靈敏度具有一定的局限性，六項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可以有效提高CRC的檢出率。臨床可以通過(guò)六項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物結(jié)合影像學(xué)及個(gè)體情況對(duì)CRC患者進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以便提高診療效果。

[1] 石博,黃可欣,李天舒,等.上皮性卵巢腫瘤患者血清及癌組織中CD34、PCNA蛋白的表達(dá)[J].中國(guó)婦幼保健,2014,29(16):2483-2485.

[2] 應(yīng)軍,趙靜.四種方法檢測(cè)抗雙鏈DNA抗體診斷效能的對(duì)比分析[J].華西醫(yī)學(xué),2014,29(7):1305-1308.

[3] 沈建康,袁建明,蔡中瑞.CEA、CA199、CA724及HSP60在胃癌患者血清中的表達(dá)及應(yīng)用價(jià)值[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2016,31(6):848-850.

[4] 邱振華,王茂生,楊長(zhǎng)福,等.卵巢癌患者聯(lián)合檢測(cè)血清HE4和CA125的臨床價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(15):1984-1985，1988.

[5] Shimada H,Noie T,Ohashi M,etal.Clinical significance of serumtumor markers for gastric cancer:a systematic review of literature by the Task Force of the Japanese Gastric Cancer Association[J].Gastric Cancer,2014,17(1):26-33．

[6] 王起來(lái),常紅葉.電化學(xué)發(fā)光免疫法和酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清糖類抗原125的對(duì)比分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,18(10):1715-1716.

[7] 姚家奎,韓東升,周林,等.ECLIA法定量檢測(cè)乙肝血清標(biāo)志物的臨床應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(22):3122-3123.

[8] 李彤,周芨,李清,汪廣杰.堿基切除修復(fù)基因APE1,XRCC1多態(tài)性和腫瘤標(biāo)志物CA199,CEA與鼻咽癌的臨床關(guān)聯(lián)研究[J].川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,30(5):667-672.

[9] 吳君榮,趙惠柳,舒宏,等.抗凝血酶-Ⅲ在甲胎蛋白陰性肝硬化和肝癌的鑒別診斷價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(20):2875-2876.

[10] Li XS,Xu Q,Fu XY,etal.Heat shock protein 22 overexpression is associated with the progression and prognosis in gastric cancer[J].J Cancer Res Clin Oncol,2014,140(8):1305-1313．

[11] 吳寒靜,王凱,馬衛(wèi)紅,等.血清腫瘤標(biāo)志物NSE、SCC、CYFRA21-1與CEA聯(lián)合檢測(cè)在肺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,37(22):3218-3220.

[12] 李宏杰,應(yīng)雄江,鄢姣,等.ELISA測(cè)定HBsAg血清樣本經(jīng)化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)與乳膠免疫層析法兩對(duì)半檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2015,25(6):856-859.

[13] 張彩華.癌胚抗原125與附睪蛋白4聯(lián)合檢測(cè)在子宮病變中的診斷意義[J].中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù),2015,22(04):6-408.

[14] 韓光輝,張麗君,周奇.新型卵巢腫瘤標(biāo)志物人附睪蛋白4的兩種定量檢測(cè)方法的比較與分析[J].中國(guó)婦幼保健,2015,30(13):2086-2088.

[15] 楊娜.酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)AFP腫瘤標(biāo)志物結(jié)果的對(duì)比分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)工程,2015,23(4):129-131.

ClinicalvalueofArray-ELISAindetectingsixtumormarkersindiagnosisofcolorectalcancer

FU Gui-xia

(DepartmentofLaboratory,QingdaoNinthPeople’sHospital,Qingdao266002,Shandong,China)

Objective：To evaluate the clinical value of Array-ELISA in the detection of six tumor markers in colorectal cancer (CRC).Methods49 cases of CRC patients as CRC group,19 cases of benign lesions were selected for colorectal surgery as the benign group,71 healthy subjects another same medical examination as the control group.The venous blood of three groups of patients was collected,and six tumor markers (AFP,CEA,PSA,CA125,CA153 and CA199) were detected by Array-ELISA technique.The serum markers of six tumor markers,the results of CRC,ROC and AUC in the three groups were observed and compared,and the parameters related to PRE and 6 tumor markers in group CRC were observed.ResultsThe serum CEA,CRC,CA199 and CA125 levels in CRC group were higher than those of benign group and control group (P<0.05).There was no significant difference between the three groups of PSA and CA153 (P>0.05).The single detection of CEA (AUC=0.916,P=0.001) had the highest diagnostic value of the Logistic regression model to establish the area for the PRE 0.932,were higher than the single index detection.The patients with CRC CEA in specificity,sensitivity and accuracy was the highest in the individual,combined detection in Logistic regression prediction variable PRE specificity,sensitivity and accuracy was higher than that of CEA (P<0.05).ConclusionArray-ELISA marker detection effect has the ideal of CRC patients with six tumor,but single tumor marker specificity and sensitivity has certain limitations,combined detection of six indexes can effectively improve the detection rate of CRC.

Array-ELISA;Six tumor markers;Colorectal cancer;Clinical value

10.3969/j.issn.1005-3697.2017.05.038

2017-05-14

傅桂霞(1971-)，女，主管檢驗(yàn)師。E-mail：fuguixia71@126.com

時(shí)間： 2017-10-10 02∶28

http://kns.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20171010.0228.078.html

1005-3697(2017)05-0781-04

R735.3

A

(學(xué)術(shù)編輯廖濤)

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