●林鵬飛 馮鳳桃 宋涵 王海燕

HPLC測(cè)定短葶山麥冬藥材中短葶山麥冬皂苷C

●林鵬飛 馮鳳桃 宋涵 王海燕

目的采用HPLC 法測(cè)定短葶山麥冬藥材中短亭山麥冬皂苷C含量。方法：色譜柱為Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸二氫鉀溶液（用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0）（77:23）為流動(dòng)相，柱溫為15℃，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。結(jié)果：短亭山麥冬皂苷C在濃度為10.95μg/mL-175.19μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為101.6%，RSD = 1.03%(n = 6)。結(jié)論：所用方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可控制短葶山麥冬藥材的質(zhì)量。

短葶山麥冬；短葶山麥冬皂苷C；高效液相檢測(cè)法

短葶山麥冬Liriopemuscari(Decne.)Bailey為百合科山麥冬屬植物, 此屬植物包括8個(gè)種(1個(gè)變種)[1], 其中短葶山麥冬和湖北山麥冬一同收載于中國(guó)藥典2010 年版山麥冬項(xiàng)下[2]。短葶山麥冬主要分布在福建泉州市洛江區(qū)及莆田市仙游等地, 其具有養(yǎng)陰生津、潤(rùn)肺清心的作用, 含有多糖和多種魯斯可皂苷, 其中短葶山麥冬皂苷C含量較多, 也是重要的活性成分, 現(xiàn)代研究表明[3～5], 短葶山麥冬皂苷C具有良好的免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗疲勞等作用。目前, 中國(guó)藥典收載的山麥冬(短葶山麥冬和湖北山麥冬), 它們的藥用部位是塊根, 大量的須根資源被棄之。本文建立了HPLC法, 測(cè)定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C含量。所建立的方法可以為短葶山麥冬的質(zhì)量控制研究提供一些有用的參考。

1 儀器、試藥和樣品

Agilent 1260 高效液相色譜儀；DAD檢測(cè)器；Agilent色譜數(shù)據(jù)工作站。

短葶山麥冬皂苷C對(duì)照品購(gòu)于上海詩(shī)丹德標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)有限公司。

2 溶液制備

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取短葶山麥冬皂苷C對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加50%甲醇溶液溶解并定量稀釋制成每1mL約含短葶山麥冬皂苷C 50μg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取短葶山麥冬須根、塊根粉末(過(guò)3號(hào)篩)約1 g, 精密稱(chēng)定,加乙醇50ml，稱(chēng)定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）15分鐘，取出，補(bǔ)足重量，放冷至室溫，過(guò)濾，精密量取續(xù)濾液25 mL, 減壓回收溶劑,殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ萦?0 mL量瓶中, 搖勻, 即得。

3 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.1%磷酸二氫鉀溶液（用10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0）（77:23）為流動(dòng)相，柱溫為15℃，流速1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按短葶山麥冬皂苷C計(jì)應(yīng)不低于2000。分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各40μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得,對(duì)照品及樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品(A)、短葶山麥冬塊根樣品(B)色譜圖

4 線(xiàn)性關(guān)系考察

取短葶山麥冬皂苷C對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，用50%甲醇溶解，定容。配制成質(zhì)量濃度分別為每1mL含短葶山麥冬皂苷C 175.19μg的溶液。分別依次將其稀釋一倍，稀釋4次，得到5個(gè)濃度的對(duì)照品溶液短葶山麥 冬 皂 苷 C 175.19μg/mL、87.60μg/mL、43.80μg/mL、21.90μg/mL、10.95μg/mL的溶液。將以上共五個(gè)濃度的對(duì)照品進(jìn)樣分析，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測(cè)定短葶山麥冬皂苷C峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），樣品濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（X），得短葶山麥冬皂苷C回歸方程為y = 14.799x-44.41。本方法線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為r=0.9993，表明本方法短葶山麥冬皂苷C在10.95μg/mL-175.19μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

5 精密度試驗(yàn)

取“ 2.1”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，分別精密吸取同一對(duì)照品溶液40μL，連續(xù)測(cè)定6次，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測(cè)定短葶山麥冬皂苷C的峰面積，本方法儀器精密度RSD=0.34%，RSD值小于2%，表明本方法精密度良好。

6 重復(fù)性試驗(yàn)取短葶山麥冬須根樣品1 共6 份, 每份1 g, 精密稱(chēng)定, 依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶，按3項(xiàng)上述色譜條件測(cè)定短葶山麥冬皂苷C的含量，外標(biāo)法計(jì)算短葶山麥冬皂苷C的含量，結(jié)果表明本方法重復(fù)性RSD=0.73%，RSD值小于3%，表明本方法重復(fù)性良好。

7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別在0h、2.5h、5h、7.5h、10h、12.5h小時(shí)進(jìn)樣，按“3”項(xiàng)上述色譜條件測(cè)定短葶山麥冬皂苷C的峰面積。樣品溶液在12.5小時(shí)內(nèi)樣品溶液RSD=0.63%，RSD值小于2%，結(jié)果顯示樣品溶液穩(wěn)定性良好。

8 加樣回收率試驗(yàn)

取已測(cè)知短葶山麥冬皂苷C含量(0.1137%)的短葶山麥冬須根樣品6份, 每份0.5 g，精密稱(chēng)定，分別加入0.5491mg·mL-1的對(duì)照品溶液0.5mL，揮干溶劑，依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液, 進(jìn)樣測(cè)定, 計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率(n=6)為101.64%，RSD=1.03%，本方法回收率良好。

9 樣品測(cè)定

取不同批次短葶山麥冬的塊根樣品，依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 在“3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定, 以外標(biāo)法計(jì)算各樣品中短葶山麥冬皂苷C含量。結(jié)果3批塊根樣品中短葶山麥冬皂苷C含量分別為0.0537%, 0.0642%, 0.0597%。

10 討論

以往文獻(xiàn)中報(bào)道短葶山麥冬須根中的短葶山麥冬皂苷C和其他多個(gè)組分在紫外檢測(cè)器中無(wú)吸收[6]，但在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)短葶山麥冬在皂苷C存在末端吸收, 故本實(shí)驗(yàn)選擇紫外檢測(cè)器，選擇203nm波長(zhǎng)下進(jìn)行測(cè)定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C含量，有較好的響應(yīng)值，且可以排查其他雜質(zhì)的干擾。本方法克服了以往難以用紫外檢測(cè)器測(cè)定短葶山麥冬須根中的短葶山麥冬皂苷C含量，為短葶山麥冬藥材的質(zhì)量控制提供很好的幫助。

(作者單位：福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司)

[1]余伯陽(yáng), 徐國(guó)鈞.中藥麥冬資源的利用研究[J].中草藥, 1995,26(4):205.

[2]ChP(中國(guó)藥典).2015. (一部):26.

[3]Wu Feihua, Cao Jingsong, Jiang Jieyun, etal. Ruscogen in glycoside(Lm-3) isolated from Liriopemuscari improves liver injury by dysfunctioningl iver-infiltrating lymphocytes[J].J Pharm Pharmacol,2001,53(5):681.

[4]LiuJianli, ChenTing, YuBoyang, etal.Ruscogenin glycoside(Lm-3)isolated from Liriopemuscari inhibits lymphocy teadhesion to extra cellularmatrix. JPharm Pharmacol, 2002,54(7):959.

[5]余伯陽(yáng), 殷霞, 榮祖元, 短葶山麥冬皂苷C的藥理活性研究[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào), 1994, 25(5):286.

[6]狄天云,王剛力,林瑞超,劉麗芳[J].PLC-ELSD法測(cè)定短葶山麥冬中短葶山麥冬皂苷C的含量,藥物分析雜志.2011, 31(1):127-130.

Determination of Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC

LIN Peng–fei1?,WANG Hai-yan1，SONG Han1，F(xiàn)ENG Feng-tao1
（1.Rejuvenation Pharmacy co,Ningde,Fujian,350002 P. R.china)

OBJECTIVE To determination the Liriope muscari baily saponins C from Liriope muscari(Decne.)Bailey by HPLC. METHODS HPLC method was adapted, with Hypersil BDS C18 (250 mm × 4. 6 mm，5 μm) as analytical column. The mobile phase consisted of methanol-0.1% potassium dihydrogen phosphate solution (adjusted to pH 8.0 with 10% sodium hydroxide solution) (77:23) with theflow rate of 1. 0 mL·min-1and the column temperature of 15 ℃ . RESULTS The method displayed good linearity within the concentration ranges of 10.95 -175.19μg/mL with average recovery of 101.6 % and RSD of 1.03% ( n =6). CONCLUSION This method is simple，accurate，repeatable and suitable for the determination of Liriope muscari(Decne.)Bailey.

Liriope muscari(Decne.)Bailey;Determination of Liriope muscari baily saponins C; HPLC