陳華祥 劉春明 倪鳳萍 黃坤 王超 王金 吳道琴 李宏光
摘要:指出了煙蚜繭蜂(Aphidius gifuensis Ahsmaed)是一種蚜蟲(chóng)的專性寄生蜂,能夠顯著地控制蚜蟲(chóng)的種群數(shù)量,其滯育機(jī)制對(duì)煙蚜繭蜂產(chǎn)品化生產(chǎn)具有重大意義。為進(jìn)一步了解低溫冷藏對(duì)云南煙蚜繭蜂體內(nèi)代謝物質(zhì)及其羽化率的影響,通過(guò)低溫(8±0.5 ℃)冷藏寄生蚜,形成僵蚜后將其轉(zhuǎn)至3 ℃條件下分時(shí)段冷藏,最后測(cè)定了煙蚜繭蜂(蛹)體內(nèi)代謝物質(zhì)的變化及其與羽化率的關(guān)系。結(jié)果表明:冷藏初期煙蚜繭蜂大量積累糖類和脂肪,消耗蛋白;隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng),糖類優(yōu)先被利用,大量分解轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì),脂肪含量有所下降;冷藏后期隨著糖類的消耗殆盡,蛋白大量分解轉(zhuǎn)化為糖類和脂肪;冷藏10 d、20 d、30 d和40 d羽化率分別為86.67%、49.33%、15.33%和12.67%,顯著低于未冷藏?zé)熝晾O蜂羽化率94.00%。研究認(rèn)為,冷藏期間煙蚜繭蜂體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)存在明顯的積累和轉(zhuǎn)化關(guān)系,羽化率隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。
關(guān)鍵詞:煙蚜繭蜂; 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì); 羽化率
中圖分類號(hào):S572
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):16749944(2017)18002805
1引言
煙蚜繭蜂(Aphidius gifuensis Ahsmaed)屬膜翅目(Hymenoptera)、蚜繭蜂科(Aphidiidea)、蚜繭蜂屬(Aphdius),是蚜蟲(chóng)的重要寄生性天敵昆蟲(chóng)。隨著煙蚜繭蜂在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的廣泛運(yùn)用,其商品化生產(chǎn)逐漸成為一種趨勢(shì),也是目前大多數(shù)學(xué)者研究的重點(diǎn)。北方地區(qū),煙蚜繭蜂主要以僵蚜形態(tài)越冬,在南方地區(qū),煙蚜繭蜂無(wú)越冬現(xiàn)象、不滯育\[1~5\]。研究南方非滯育型煙蚜繭蜂在低溫條件下?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累和轉(zhuǎn)化,可為設(shè)計(jì)冷藏方法、延長(zhǎng)煙蚜繭蜂產(chǎn)品貨架期提供理論依據(jù)。近年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)煙蚜繭蜂生物學(xué)與生態(tài)學(xué)、規(guī)模繁殖和釋放技術(shù)研究較多,而對(duì)其冷藏及生理生化的研究報(bào)道較少\[6~9\]。在低溫條件下,昆蟲(chóng)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量隨滯育時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷變化\[10~12\],Hahn\[13\]研究發(fā)現(xiàn)昆蟲(chóng)滯育期間會(huì)大量積累碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)。在北方低溫季節(jié)煙蚜繭蜂田間滯育率在60%~80%之間,滯育持續(xù)期維持在4~5個(gè)月,但在南方(玉溪)煙蚜繭蜂無(wú)越冬現(xiàn)象、不滯育\[2\]。李玉艷\[14\]認(rèn)為人工誘導(dǎo)煙蚜繭蜂(北京)滯育的最佳條件為 8℃、L∶D=8∶16,滯育率可達(dá)54.35% ,并對(duì)不同滯育期煙蚜繭蜂(北京)代謝物質(zhì)含量做了研究。截止目前關(guān)于冷藏后煙蚜繭蜂(南方種群)體內(nèi)代謝物質(zhì)是如何積累和轉(zhuǎn)化的研究尚未見(jiàn)報(bào)道,也未有人對(duì)南北方煙蚜繭蜂相關(guān)代謝物質(zhì)做過(guò)比較。張紅梅等\[15\]曾提出質(zhì)疑—低溫能否誘導(dǎo)云南的煙蚜繭蜂進(jìn)入滯育。本文通過(guò)低溫冷藏處理,探索煙蚜繭蜂(南方種群)冷藏后其體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累和轉(zhuǎn)化及其羽化率,進(jìn)一步與北方種群做比較,從而為判斷煙蚜繭蜂(南方種群)滯育提供生理指標(biāo),尋找最佳的冷藏條件提供理論依據(jù),促進(jìn)云南煙區(qū)煙蚜繭蜂商品化生產(chǎn)。
2材料與方法
2.1實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1供試蟲(chóng)源
種蚜、種蜂在云南省紅河州彌勒縣新哨三角地?zé)熝晾O蜂繁育基地在溫室內(nèi)飼養(yǎng)。
2.1.2試劑
(1)脂肪測(cè)定所用試劑。膽固醇、磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O)、磷酸二氫鈉(NaH2PO4·2H2O)、三氯甲烷、甲醇、濃硫酸、香蘭素。
(2)總蛋白測(cè)定所用試劑??捡R斯亮蛋白測(cè)定藍(lán)試劑盒(100T,南京建成生物工程研究所),現(xiàn)配現(xiàn)用,氯化鈉、蒸餾水。
(3)糖類測(cè)定所用試劑。濃硫酸、葡萄糖、蒽酮、三氯乙酸、氫氧化鉀、無(wú)水乙醇、蒸餾水等。以上所用化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。
2.1.3儀器
制冰機(jī)、冷藏柜、恒溫水浴鍋、多功能臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、T6新世紀(jì)紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀、移液槍、5mL具塞玻璃管、容量瓶、燒杯、玻璃棒、研磨棒。
2.2試驗(yàn)方法
將種蚜接種到5葉1心煙苗上,任其繁殖2 d后去除母蚜。待煙蚜發(fā)育至2~3齡進(jìn)行接蜂,當(dāng)寄生蚜大量形成時(shí),將寄生蚜葉片采摘置于8 ℃±0.5 ℃恒溫箱中,冷藏5 d后清除未形成僵蚜的煙蚜和寄生蚜,將僵蚜葉轉(zhuǎn)移至3 ℃(吳興富\[5\]等研究發(fā)現(xiàn)煙蚜繭蜂蛹期的最佳冷藏溫度為3~5℃)冷藏箱中,每隔10 d、20 d、30 d、40 d取出,測(cè)定不同冷藏期煙蚜繭蜂(蛹)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的變化及其羽化率。以未冷藏?zé)熝晾O蜂(蛹)為對(duì)照,每處理3個(gè)重復(fù)。
2.2.1脂肪的測(cè)定
參照Handel\[16\]和Pennington\[17\]的方法,做了部分修改。
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。取7支具塞玻璃管編號(hào)1~7,分別加入2.5 mg/mL膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液0、5、10、20、40、60和100 μL,每支玻璃管加100 μL氯仿甲醇溶液100 μL抽提5 min。加500 μL濃硫酸,沸水浴10 min流水冷卻后加香蘭素試劑1000 μL,充分混勻,黑暗顯色30 min后酶標(biāo)儀490 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值,以膽固醇含量為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。
圖1煙蚜繭蜂脂肪含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線
(2)脂肪的提取。取煙蚜繭蜂(蛹)20頭于0.5 mL EP管中稱重(蛹重),按重量體積比1∶9加入PBS緩沖液充分研磨后于4 ℃下1000 r/min離心10 min。取中間澄清液,再以4 ℃、1000 r/min離心10 min,取上清液20 μL。
取上清液5 μL于另一只1.5 mL EP管中,加入氯仿甲醇溶液1000 μL抽提5 min后加濃硫酸500 μL,沸水浴加熱10 min,流水冷卻至室溫。加香蘭素試劑1000 μL,黑暗顯色20 min。取300 μL于酶標(biāo)孔中,490 nm下測(cè)其吸光值。每處理3個(gè)重復(fù)。endprint
(3)數(shù)據(jù)處理。根據(jù)處理液的吸光值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)脂肪含量,按下列公式計(jì)算蟲(chóng)體實(shí)際糖含量。運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異性顯著分析。
2.2.2總蛋白的測(cè)定
(1)測(cè)定方法。參照Bradford\[18\]的方法,進(jìn)行了部分修改。
(2)總蛋白的提取。準(zhǔn)確稱取發(fā)育進(jìn)度一致的煙蚜繭蜂(蛹)于1.5 mL EP管中,按重量體積比1∶9加生理鹽水后4 ℃下3000 r/min離心10 min。取上清液于1.5 mL EP管中,加生理鹽水補(bǔ)足1 mL,待測(cè)。
按考馬斯亮蘭蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明書操作表要求吸取上清液50 μL,加入考馬斯亮蘭3 mL,搖勻,室溫下靜置10 min,595 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色測(cè)定,記錄吸光度值。每處理3個(gè)重復(fù)。
(3)數(shù)據(jù)處理。按考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒說(shuō)明書上蛋白含量的計(jì)算公式得出樣品的蛋白含量,進(jìn)一步計(jì)算蟲(chóng)體蛋白含量。計(jì)算公式:
樣品蛋白含量(μg/mL)=測(cè)定管OD值-空白管OD值標(biāo)準(zhǔn)客OD值-空白管OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度 0.563 mg/mL);
蟲(chóng)體蛋白含量(μg/mg)=樣品蛋白含量(μg/mL)×樣品稀釋量(mL)蟲(chóng)體重量(mg)。
2.2.3糖類的測(cè)定
滯育昆蟲(chóng)糖類的研究目前主要集中在總糖、糖原和海藻糖的變化\[19\]。本文參照馮慧\[20\]的方法測(cè)定煙蚜繭蜂(蛹)的糖含量,并對(duì)其方法進(jìn)行部分修改。
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。取6支具塞玻璃管編號(hào)1~6,分別加入糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,前5支玻璃管加10%三氯乙酸補(bǔ)足1 mL。分別向6支玻璃管中加4 mL 0.2%蒽酮試劑,混勻后于沸水浴中加熱10 min,流水冷卻至室溫。平衡20min后用(型號(hào))紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)620 nm波長(zhǎng)下進(jìn)行比色分析,用空白管調(diào)零點(diǎn),記錄吸光值,每處理3個(gè)重復(fù)。以吸光值為縱坐標(biāo),葡萄糖含量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2。
(2)總糖的提取和測(cè)定。取煙蚜繭蜂(蛹)20頭于0.5 mL EP管中稱重(蛹重)后加入20 μL蒸餾水,充分研磨后用380 μL 10%三氯乙酸分兩次沖洗研磨棒。20 ℃下5000 r/min離心5 min,移上清液于5 mL具塞玻璃管中,沉淀再加入400 μL三氯乙酸離心后合并上清液,并加蒸餾水200 μL,使提取液補(bǔ)足1 mL。向具塞玻璃管中加4 mL 0.2%蒽酮試劑,混勻后于沸水浴中加熱10 min,流水冷卻至室溫。平衡20 min后于620 nm下進(jìn)行比色分析,記錄吸光值。每處理3個(gè)重復(fù)。
(3)海藻糖和糖原的提取和測(cè)定。取煙蚜繭蜂(蛹)20頭于0.5 mL EP管中稱重(蛹重)后加入20 μL三氯乙酸,充分研磨。用40 μL 10%三氯乙酸分兩次沖洗研磨棒。4 ℃下5000 r/min離心10 min后移上清液于1.5 mL EP管中,沉淀再加入40 μL三氯乙酸離心一次,合并上清液,棄沉淀。上清液加入無(wú)水乙醇400 μL,置于4 ℃冰箱中16 h。
16 h后,將冰箱中的上清液取出于4℃下10000 r/min離心20 min,移上清液于5 mL具塞玻璃管中,加入0.15 mol/L H2SO 1000μL,沸水浴加熱10 min冷卻后加入30%KOH 1000 μL再次加熱10 min冷卻測(cè)海藻糖用。離心后的沉淀加入1000 μL蒸餾水溶解,轉(zhuǎn)移至5 mL具塞玻璃管中測(cè)糖原用。
上述各處理中加4 mL 0.2%蒽酮試劑,混勻后于沸水浴中加熱10 min,流水冷卻至室溫。平衡20 min后于620 nm下進(jìn)行比色分析,記錄吸光值。每處理3個(gè)重復(fù)。
(4)數(shù)據(jù)處理。根據(jù)處理液的吸光值,在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)糖含量,按下列公式計(jì)算蟲(chóng)體實(shí)際糖含量。運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異性顯著分析。
蟲(chóng)體糖含量(μg/mg)=測(cè)定樣品糖含量(μg/mL)×樣品稀釋量(mL)蟲(chóng)體重量(mg)
2.2.4冷藏后羽化率測(cè)定
挑取每處理中的僵蚜50頭,于25 ℃±1 ℃條件下每天定時(shí)統(tǒng)計(jì)羽化數(shù),當(dāng)連續(xù)5 d無(wú)成蜂羽化時(shí),進(jìn)行解剖查明其存活狀況,每處理3個(gè)重復(fù)。運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異性顯著分析。
羽化率(%)=羽化數(shù)(頭)總僵蚜量(頭)×100%。
3結(jié)果與分析
3.1脂肪和蛋白含量
煙蚜繭蜂(蛹)脂肪和蛋白含量測(cè)定結(jié)果(圖3和表1)表明,蛋白是煙蚜繭蜂(蛹)體內(nèi)主要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),其含量顯著高于脂肪含量。未冷藏?zé)熝晾O蜂(蛹)的蛋白含量116.25 μg/mg顯著高于冷藏10 d蛋白含量76.5 μg/mg(P<0.05),而脂肪含量與冷藏10 d相比差異較為顯著(P<0.05),說(shuō)明煙蚜繭蜂冷藏初期是一個(gè)消耗蛋白大量積累脂肪的生理過(guò)程。冷藏10 d后,由于糖
類優(yōu)先被利用,大量分解轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì),至冷藏20 d時(shí),蛋白含量逐漸上升至139.57μg/mg,顯著高于冷藏10 d蛋白含量(P<0.05),而脂肪含量下降至32.94 μg/mg,顯著低于冷藏10 d脂肪含量,說(shuō)明該階段大量消耗脂肪。冷藏20 d后,由于糖類代謝物質(zhì)消耗殆盡(圖4和表2),為維持煙蚜繭蜂(蛹)的持續(xù)發(fā)育,其體內(nèi)蛋白大量分解轉(zhuǎn)化為脂肪和糖類物質(zhì),所以含量持續(xù)下降,至冷藏30 d蛋白含量?jī)H為51.88 μg/mg,顯著低于冷藏20 d蛋白含量139.57 μg/mg(P<0.05)。伴隨
蛋白的分解轉(zhuǎn)化,脂肪含量大幅上升,至冷藏30 d時(shí),脂肪含量46.48 μg/mg高于20 d。冷藏40 d時(shí),蛋白含量51.88 μg/mg和脂肪含量46.48 μg/mg與30 d相比,差異較為顯著(P<0.05)。endprint
3.2糖類含量
結(jié)合圖4和表2,可看出煙蚜繭蜂(蛹)體內(nèi)的糖類代謝物質(zhì)隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷變化,在冷藏10天時(shí)總糖、海藻糖和糖原的含量均最高,分別為9.24 μg/mg、12.59 μg/mg和2.03 μg/mg,均顯著高于未冷藏(蛹)糖含量(P<0.05)。糖類作為昆蟲(chóng)的能源物質(zhì),優(yōu)先被利用,隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而持續(xù)下降,至冷藏20 d時(shí)總糖、海藻糖和糖原含量?jī)H為為3.68 μg/mg、3.46 μg/mg和1.47 μg/mg,均顯著低于冷藏10 d糖含量(P<0.05)。隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng),糖類代謝物質(zhì)消耗殆盡,冷藏20 d后,由于蛋白質(zhì)的大量分解轉(zhuǎn)化,糖類代謝物質(zhì)逐漸積累,至冷藏30 d時(shí)海藻糖含量7.23 μg/mg顯著高于冷藏20 d(P<0.05),而總糖和糖原含量分別為4.38 μg/mg和1.59 μg/mg與冷藏20 d糖含量無(wú)顯著差異(P>0.05)。冷藏30 d后,糖類含量隨著蛋白的持續(xù)分解而不斷升高,至冷藏40 d時(shí),總糖和海藻糖含量升高至6.54 μg/mg和8.07 μg/mg顯著高于冷藏30 d(P<0.05),而糖原含量1.31 μg/mg與冷藏30 d無(wú)顯著差異(P>0.05)。
3.3羽化率
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(圖5和表3)表明,未經(jīng)冷藏的煙蚜繭蜂羽化率為94.00%,顯著高于冷藏10 d 86.67%、20 d 49.33%、30 d 15.33%和40 d 12.67%的羽化率(p<0.05),隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)其羽化率逐漸降低,且差異顯著。羽化率(y)與冷藏時(shí)間(d)之間呈負(fù)相關(guān),線性相關(guān)方程式為y=-23.4d+121.8。
低溫冷藏對(duì)煙蚜繭蜂有一定的致死效應(yīng),在同等溫濕度條件下,死亡率隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而升高,而羽化率則隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低。
4結(jié)論與討論
4.1冷藏?zé)熝晾O蜂(蛹)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累和轉(zhuǎn)化
關(guān)于寄生蜂低溫貯藏后其品質(zhì)的評(píng)價(jià)主要集中在羽化率、成蜂壽命、寄生能力、飛行能力層面,本研究對(duì)冷藏后煙蚜繭蜂(蛹)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,從生化角度去分析冷藏對(duì)煙蚜繭蜂的影響。研究結(jié)果表明,南方非滯育型煙蚜繭蜂(蛹)在冷藏初期大量積累和儲(chǔ)存糖類消耗蛋白,脂肪的儲(chǔ)存則是煙蚜繭蜂(蛹)的御寒機(jī)制;隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng),為維持發(fā)育,糖類作為煙蚜繭蜂低溫發(fā)育的重要能源物質(zhì)而優(yōu)先被利用,大量轉(zhuǎn)化為蛋白,而脂肪含量則隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,即隨著低溫暴露時(shí)間的延長(zhǎng)煙蚜繭蜂(蛹)脂肪含量呈下降趨勢(shì); 冷藏后期蛋白質(zhì)大量分解轉(zhuǎn)化為糖類和脂肪,這一階段消耗蛋白,積累糖類和脂肪,由于滯育會(huì)誘導(dǎo)昆蟲(chóng)體內(nèi)生物脂膜的重新構(gòu)建\[19\],因此在冷藏后期煙蚜繭蜂體內(nèi)脂肪含量有所上升。即南方非滯育型煙蚜繭蜂(蛹)冷藏后營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累和轉(zhuǎn)化趨勢(shì)與北方滯育型煙蚜繭蜂(蛹)是一致的,但各類物質(zhì)的含量有一定差異。這是否表明不同地域煙蚜繭蜂(蛹)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量與其滯育有關(guān),有待進(jìn)一步研究。
4.2冷藏時(shí)間與羽化率的關(guān)系
寄生蜂的低溫貯藏一直以來(lái)都是制約其商品化生產(chǎn)的瓶頸,也是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的焦點(diǎn)。低溫冷藏寄生蜂不僅可以延緩其發(fā)育,達(dá)到延長(zhǎng)產(chǎn)品貨架期的目的,而且還可以根據(jù)害蟲(chóng)發(fā)生期進(jìn)行貯藏期調(diào)控,利于把握生物防治與害蟲(chóng)發(fā)生同步進(jìn)行。趙利偉\[22\]和孫守慧等\[23\]對(duì)白蛾周氏嚙小蜂進(jìn)行冷藏后發(fā)現(xiàn),老熟幼蟲(chóng)在3 ℃冷藏60~70 d仍可保持95%以上的出蜂率。但對(duì)煙蚜繭蜂而言,其自然出蜂率也就在95.1%左右\[24\]。本研究結(jié)果表明:云南地區(qū)煙蚜繭蜂自然羽化率為94.0%。
由于煙蚜繭蜂對(duì)極端低溫的適應(yīng)性較差,唐文穎\[25\]研究發(fā)現(xiàn)溫度過(guò)低其羽化率顯著降低,隨著低溫貯藏時(shí)間的持續(xù),低溫對(duì)煙蚜繭蜂存活率的影響明顯增加,致死率明顯升高。本研究結(jié)果與其相符,即在3℃條件下,冷藏時(shí)間越長(zhǎng)死亡率越高,羽化率越低。
低溫貯藏時(shí),煙蚜繭蜂體內(nèi)水分隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,甚至脫水,從而使煙蚜繭蜂不能繼續(xù)完成發(fā)育或羽化\[26、27\]。此外低溫貯藏期間能量的消耗對(duì)煙蚜繭蜂存活率存在很大影響,持續(xù)低溫產(chǎn)生的低溫傷害積累直接影響煙蚜繭蜂體內(nèi)生理過(guò)程,可能產(chǎn)生代謝紊亂,使其不能正常發(fā)育\[28\]。結(jié)合相關(guān)研究看來(lái),低溫處理后不同地域煙蚜繭蜂羽化率有一定差異,相同處理10℃冷藏后,北京和江西兩個(gè)地區(qū)煙蚜繭蜂羽化率分別為84.98%和70.63%\[14、29\]。這是否表明與北方滯育型煙蚜繭蜂相比,南方非滯育型煙蚜繭蜂耐寒能力更差,故低溫冷藏后其羽化率更低。
基于前人研究結(jié)果,對(duì)云南煙區(qū)煙蚜繭蜂(蛹)體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累與轉(zhuǎn)化做進(jìn)一步探討。結(jié)果表明,冷藏初期煙蚜繭蜂大量積累糖類和脂肪,消耗蛋白;隨著冷藏時(shí)間的延長(zhǎng),糖類優(yōu)先被利用,大量分解轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì),脂肪含量有所下降;冷藏后期隨著糖類的消耗殆盡,蛋白大量分解轉(zhuǎn)化為糖類和脂肪。冷藏期間,蛋白質(zhì)與脂肪存在此消彼長(zhǎng)的關(guān)系,而糖類與蛋白質(zhì)、脂肪之間又存在明顯的相互轉(zhuǎn)化現(xiàn)象,明確冷藏過(guò)程中煙蚜繭蜂(蛹)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和轉(zhuǎn)化和積累可為后期設(shè)計(jì)冷藏方案提供理論參考,但至于這些代謝物質(zhì)是如何調(diào)控?zé)熝晾O蜂的生理過(guò)程以及與其滯育機(jī)理是否有關(guān)還需進(jìn)一步研究。研究還表明,僵蚜羽化率隨冷藏時(shí)間的延長(zhǎng)而不斷降低。
參考文獻(xiàn):
[1]
Uckan F,Ergi˙N E. Temperature and Food Source Effects on Adult Longevity of Apanteles galleriae Wilkinson(Hymenoptera: Braconidae)\[J\]. Environmental Entomology,2003,32(3):441~446.
\[2\]吳興富,李天飛,魏佳寧,等. 溫度對(duì)煙蚜繭蜂發(fā)育、生殖的影響\[J\]. 動(dòng)物學(xué)研究,2000,21(3):192~198.endprint
\[3\]陳文龍,閆玉芳. 冷藏處理對(duì)煙蚜繭蜂羽化率及壽命的影響\[J\]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2012,34(8):1~5.
\[4\]詹莜國(guó),王夸平. 煙蚜繭蜂商品化生產(chǎn)及其存在的問(wèn)題與對(duì)策\[J\]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(6):123~126.
\[5\]李玉艷. 煙蚜繭蜂滯育誘導(dǎo)的溫光周期反應(yīng)及滯育生理研究\[D\]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院,2011.
\[6\]王志剛,劉勇,劉莉,等. 山東煙區(qū)煙蚜繭蜂規(guī)模繁殖技術(shù)研究\[J\]. 安徽農(nóng)學(xué)通報(bào),2016,22(14):41~42.
\[7\]畢章寶,季正端. 煙蚜繭蜂Aphidins gifuensis Ashmead生物學(xué)研究Ⅱ.成蟲(chóng)生物學(xué)及越冬\[J\]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1994(2):38~44.
\[8\]廖偉,盧順友,張慶珠,等. 煙蚜繭蜂生態(tài)學(xué)特性研究進(jìn)展\[J\]. 湖南農(nóng)業(yè)科學(xué),2016(1):101~103.
\[9\]谷星慧,楊碩媛,余硯碧,等. 云南省煙蚜繭蜂防治桃蚜技術(shù)應(yīng)用\[J\]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào),2015,31(1):1~7.
\[10\]郭婷婷,凌飛,張順益,等. 梨小食心蟲(chóng)滯育與非滯育幼蟲(chóng)過(guò)冷卻能力與體內(nèi)主要生化物質(zhì)含量\[J\]. 應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào),2013,50(6):1514~1518.
\[11\]Li Y P,Goto M,Lei D,et al. Diapause development and acclimation regulating enzymes associated with glycerol synthesis in the Shonai ecotype of the rice stem borer larva,Chilo suppressalis,walker\[J\]. Journal of Insect Physiology,2002,48(3):303~310.
\[12\]丁惠梅,馬罡,武三安,等. 滯育昆蟲(chóng)小分子含量變化研究進(jìn)展\[J\]. 應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào),2011,48(4):1060~1070.
\[13\]Hahn D A,Denlinger D L. Hahn DA,Denlinger DL. Meeting the energetic demands of insect diapause: Nutrient storage and utilization. Journal of Insect Physiology\[J\]. Journal of Insect Physiology,2007,53(8):760~773.
\[14\]李玉艷,張禮生,陳紅印,等. 煙蚜繭蜂滯育誘導(dǎo)的溫光周期反應(yīng)\[J\]. 應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào),2013,50(3):718~726.
\[15\]張紅梅,陳福壽,王燕,等. 低溫貯藏對(duì)煙蚜繭蜂蛹的影響\[J\]. 動(dòng)物學(xué)研究,2011,32(suppl): 25~28.
\[16\]Van H E. Rapid determination of glycogen and sugars in mosquitoes\[J\]. Journal of the American Mosquito Control Association,1985,1(3):299~301.
\[17\]Pennington J E,Nussenzveig R H,Van Heusden M C. Lipid transfer from insect fat body to lipophorin: comparison between a mosquito triacylglycerol-rich lipophorin and a sphinx moth diacylglycerol-rich lipophorin\[J\]. Journal of Lipid Research,1996,37(37):1144~1152.
\[18\]Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein using the principle of protein dye binding\[J\]. Analytical Biochemistry,1976,72(s 1–2):248–254.
\[19\]任小云,齊曉陽(yáng),安濤,等. 滯育昆蟲(chóng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的積累、轉(zhuǎn)化與調(diào)控\[J\]. 應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào),2016,53(4):685~695.
\[20\]馮慧. 昆蟲(chóng)生物化學(xué)分析法\[M\]. 北京:農(nóng)業(yè)出版社,1989.
\[21\]宋修超. 煙蚜繭蜂對(duì)麥蚜及低溫的適應(yīng)性研究\[D\]. 濟(jì)南:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.
\[22\]趙利偉. 白蛾周氏嚙小蜂繁育特性及遺傳多態(tài)性研究\[D\]. 沈陽(yáng):沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué),2010.
\[23\]孫守慧,趙利偉,祁金玉,等. 白蛾周氏嚙小蜂成蟲(chóng)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)及低溫貯藏蟲(chóng)期的研究\[J\]. 中國(guó)生物防治學(xué)報(bào),2012,28(3):320~325.
\[24\]方永祥. 冷藏及短時(shí)高低溫脅迫對(duì)煙蚜繭蜂發(fā)育及生殖的影響\[D\]. 福州:福建農(nóng)林大學(xué),2013.
\[25\]唐文穎,張燕,鄭方強(qiáng),等. 變溫對(duì)煙蚜繭蜂低溫貯藏存活特性的影響\[J\]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,44(3):493~499.
\[26\]Ghazy N A,Suzuki T,Amano H,et al. Humidity-controlled cold storage of Neoseiulus californicus,(Acari: Phytoseiidae): effects on male survival and reproductive ability\[J\]. Journal of Applied Entomology,2013,137(5):376~382.endprint
\[27\]陳珍珍. 煙蚜繭蜂Aphidius gifuensis Ashmead的低溫適應(yīng)及冷藏后成蜂生物學(xué)研究\[D\]. 福州:福建農(nóng)林大學(xué),2014.
\[28\]趙靜,王甦,郭曉軍,等. 寄生蜂低溫貯藏研究進(jìn)展\[J\]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2014,47(3):482~494.
\[29\]余玲,鄭麗霞,張超群,等. 溫度及光周期對(duì)煙蚜繭蜂滯育的影響\[J\]. 煙草科技,2016,49(11):21~25.
A Preliminary Study on the Nutriment Accumulate Translation and Eclosion Rate of Cold Storage on the Pupae of Aphidius gifuensis Ahsmaed
Chen Huaxiang1, Liu Chunming2, Ni Fengping2, Huang Kun2, Wang Chao3, Wang Jin3, Wu Daoqing3, Li Hongguang2
(1. Southwest Forestry University, Yunnann 560224, China;
2. Honghe Branch of Yunnan Tobacco Company, Mile, Yunnan, 652300, China;
3. Runcai Agricultural Science and Technology Development Company Limited in Kunming, Yunnan 650224, China)
Abstract: Aphidius gifuensis Ahsmaed is a solitary endoparasitoid of aphid, which can control aphid observably. The research on diapause of A.gifuensis has great significance for factory-like multiply A.gifuensis. In order to understand the effects of the cold storage for its metabolites and eclosion rate, the aphid mummies were transferred in refrigerator at 3℃ after they were formed under the conditions of (8±0.5) ℃. Then the content change of metabolites in aphid mummies and their correlation with eclosion rate were measured. Regression analysis showed that that the sugar and axunge content of aphid mummies reduce gradually, but the protein content increased slowly at the refrigeration early. Sugar was exploited preferentially and converted into protein, at the same time the axunge content decreased increasingly with the extension of stored time. A large number of proteins were converted into sugars and axunge when the sugar was exhausted at the late stored storage. In addition to this, the eclosion rates were 86.67%, 49.33%, 15.33% and 12.67% after stored 10d, 20d, 30th and 40d, which was lower than that of the contrast significantly. There was a phenomenon that the nutrient substance in A.Gifuensis were accumulated and transformed with the extension of storage time. The rate of emergence linear equation relationship with time in temperature 3℃.
Key words: Aphidius gifuensis ahsmaed; Nutrients; Eclosion ratesendprint