張 厚 ，宋延秋 ，陳廣軍

1.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院(南陽 473000)，2.南陽醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校第三附屬醫(yī)院(南陽 473000)

黃芪總皂苷對脾虛大鼠胃黏膜損傷的抑制作用和血流量的改善作用研究*

張 厚1，宋延秋1，陳廣軍2

1.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第二附屬醫(yī)院(南陽 473000)，2.南陽醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校第三附屬醫(yī)院(南陽 473000)

目的:探討黃芪總皂苷對脾虛大鼠胃黏膜損傷的抑制作用和黏膜血流量的改善作用研究。方法:隨機(jī)將60只SPF級SD雄性大鼠分為5組：正常組、模型組和黃芪總皂苷小、中、高劑量組。除正常組之外，其余各組建立大鼠脾虛模型，待造模4周后，小、中、高劑量組給予黃芪總皂苷灌胃，劑量分別為25、50、100 mg/kg，正常組、模型組給予相同體積的生理鹽水灌胃。各組持續(xù)灌胃2周。觀察各組大鼠的指標(biāo)。結(jié)果: 與正常組對比，模型組的黏膜血流量、腸道灌流液IgA和血清NO、SOD、IgG均明顯的降低，血清MDA升高(P<0.01)；與模型組對比，黃芪總皂苷各劑量組的黏膜血流量、腸道灌流液IgA和血清NO、SOD、IgG均升高，黏膜損傷指數(shù)和血清MDA降低(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論: 黃芪總皂苷能抑制脾虛大鼠黏膜損傷，改善黏膜血流量，這可能與提高機(jī)體免疫功能和抑制脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。

黃芪是中醫(yī)方劑中最常用的中藥之一，其中黃芪總皂苷是黃芪的活性組分，屬于從中藥黃芪提取的皂苷類成分[1]。黃芪總皂苷在抗氧化、抗炎、抗菌、抗衰老、增加免疫功能等方面有較大的作用[2]。中醫(yī)認(rèn)為，脾虛證是指脾氣不足，失其健運(yùn)，主要表現(xiàn)為腹脹納呆、倦怠乏力、面色萎黃、少氣懶言、消瘦、大便溏薄、舌淡苔白、脈緩弱等。黃芪能補(bǔ)肺健脾，實(shí)衛(wèi)斂汗，用于氣虛乏力、食少便溏等，有研究表明[3]，黃芪總皂苷對大黃脾虛大鼠胃黏膜胃泌酸具有調(diào)節(jié)作用。因此，本文以脾虛模型大鼠為實(shí)驗(yàn)對象，觀察了黃芪總皂苷對大鼠黏膜損傷的抑制作用及改善黏膜血流量的作用。

材料與方法

1 動(dòng) 物 60只SPF級SD雄性大鼠，體質(zhì)量為180～220 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號0003677。

2 主要儀器 BIO-RAD酶標(biāo)儀Xmark(美國BIO-RAD伯樂公司)；LD-5M立式低速冷凍離心機(jī)(四川蜀科儀器有限公司)；ABM-6L型冷凍包埋機(jī)(湖北安立信醫(yī)療實(shí)業(yè)有限公司)；CUT6062全自動(dòng)旋轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)(德國slee公司)；KD-P漂烘片機(jī)(上海隆拓儀器設(shè)備有限公司)；ZYJ-1000型金相顯微鏡(上海兆儀光電科技有限公司)。

3 藥品及試劑 黃芪總皂苷(分光光度法純度95.8%，自制)。

4 方 法

4.1 分組、模型建立及給藥方法:隨機(jī)將60只SPF級SD大鼠分為正常組、模型組和黃芪總皂苷小、中、高劑量組。除正常組之外，其余各組建立大鼠脾虛模型[4]：參照破氣苦降加饑飽失常法，將大黃、枳實(shí)、厚樸以2∶3∶3的比例，水煎，制成1kg/L藥液，隔日灌胃，同時(shí)隔日喂食，持續(xù)4周。正常組隔日給予0.9%生理鹽水灌胃，同時(shí)隔日喂食。在造模后，小、中、高劑量組給予黃芪總皂苷灌胃，劑量分別為25、50、100 mg/kg，正常組和模型組給予相同體積的0.9%生理鹽水灌胃。各組持續(xù)灌胃2周，每天2次，早晚各一次。

4.2 觀察指標(biāo): ①一般形態(tài)：觀察大鼠的外觀行為學(xué)；②黏膜損傷：采用Guth標(biāo)準(zhǔn)[5]評價(jià)黏膜損傷程度；③免疫球蛋白A(Ig A)：待最后一次灌胃給藥后，禁食不禁水24 h，腸灌洗液灌胃4次，2 ml/次，收集腸灌洗液，采用ELISA法測定其中Ig A的含量；④黏膜血流量：麻醉大鼠，采用激光多普勒微循環(huán)血流儀測定胃體大彎、小彎、胃竇的血流量，取各處的平均值作為黏膜血流量；⑤血清一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、免疫球蛋白G (IgG)：取大鼠腹主動(dòng)脈血，采用ELISA法測定血清NO、MDA、Ig G的含量及SOD活性；⑥黏膜病理學(xué)：取同一部位的病變胃黏膜組織，采用甲醛固定、石蠟包埋、切片、HE染色等步驟，在光鏡下觀察黏膜病理學(xué)情況。

結(jié) 果

1 對一般形態(tài)的影響 正常組精神狀態(tài)好，行動(dòng)靈活，食欲佳，皮毛光澤，大小便正常，體重增加，未見異常；余各組出現(xiàn)以下變化：排便次數(shù)增多，便形稀溏，肛門污穢；少動(dòng)、扎堆、懸空拉尾抵抗力減弱；毛發(fā)枯亂、無光澤，皮肉瘦削，食欲較差，進(jìn)食量明顯減少；鼻、眼有血性分泌物。黃芪總皂苷各劑量組在治療后上述癥狀和體征逐漸消失，絕大多數(shù)大鼠基本恢復(fù)正常。

2 對胃黏膜形態(tài)學(xué)的影響 正常組大鼠胃組織細(xì)胞排列緊密、有序，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，腺體完整，未見明顯異常；模型組大鼠黏膜組織遭到破壞，上皮細(xì)胞脫落、壞死，腺體排列紊亂，黏膜下層水腫，炎性細(xì)胞浸潤，腺體擴(kuò)張，有紅細(xì)胞外滲；高劑量組可見少量上皮細(xì)胞脫落，損傷情況均輕于模型組，中劑量組與低劑組可見上皮細(xì)胞局部脫落，黏膜損傷稍重于高劑量組，均輕于模型組,見圖1。

圖1 黃芪總皂苷對脾虛大鼠胃黏膜病理學(xué)影響(HE染色×200)

3 對胃黏膜損傷、黏膜血流量及免疫功能的影響 與正常組對比，模型組的黏膜血流量明顯降低 (P<0.01)；與模型組對比，各劑量組的黏膜損傷指數(shù)降低，黏膜血流量升高 (P<0.05或P<0.01),與正常組對比，模型組的血清IgG、腸道灌流液IgA均明顯的降低 (P<0.01)；與模型組對比，各劑量組的血清IgG、腸道灌流液IgA均升高 (P<0.01)，見表1。

表1 黃芪總皂苷對脾虛大鼠胃黏膜損傷、黏膜血流量及免疫功能的影響

注：與正常組對比，#P<0.01；與模型組對比，△P<0.05，▲P<0.01

4 對血清的NO、SOD及MDA的影響 與正常組對比，模型組的血清的NO、SOD降低，MDA升高 (P<0.01)；與模型組對比，各劑量組的血清的NO、SOD升高，MDA降低(P<0.01)，見表2。

討 論

脾虛證以消化吸收功能障礙為主要表現(xiàn)，正常大鼠的胃黏膜損傷可自我修復(fù)，若脾氣不足，致使黏膜防御機(jī)能低下，最終導(dǎo)致黏膜損害，黏膜的壞死往往伴有微血管的損傷、黏膜的高滲。有研究報(bào)道[6]，破氣苦降加饑飽失常法造模形成的脾虛模型癥狀與臨床脾虛證表現(xiàn)非常類似。大黃因其性苦寒，損傷脾胃，因此，在大黃苦寒瀉下基礎(chǔ)上改進(jìn)的破氣苦降加饑飽失常法是目前較普遍運(yùn)用的一種造模方法，且簡單易行。在造模期間，正常組大鼠未見異常，其余各組出現(xiàn)排便次數(shù)增多、毛發(fā)枯亂、無光澤、食欲較差等癥狀少，這結(jié)果說明造模后大鼠的癥狀與脾虛證臨床表現(xiàn)非常吻合。

表2 黃芪總皂苷對脾虛大鼠血清NO、SOD及MDA的影響

注：與正常組對比，*P<0.05，#P<0.01；與模型組對比，△P<0.05，P<0.01

黃芪總皂苷對黏膜保護(hù)及損傷后修復(fù)具有重要作用[7]。各劑量組的黏膜損傷指數(shù)較模型組降低，表明黃芪總皂苷有降低黏膜損傷指數(shù)作用，能減輕脾虛大鼠黏膜損傷程度。各劑量組可見上皮細(xì)胞脫落，損傷情況均輕于模型組，這提示黃芪總皂苷能保護(hù)黏膜上皮細(xì)胞，減輕黏膜損傷。

黏膜微循環(huán)障礙可能是組織壞死的主要原因之一，脾虛大鼠的黏膜表層微循環(huán)血液灌注不足，導(dǎo)致黏膜微血管損傷[8]。模型組的黏膜血流量較正常組明顯降低，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]。與模型組對比，各劑量組的黏膜血流量升高，黃芪總皂苷能改善黏膜微循環(huán)狀況，促進(jìn)黏膜表層微循環(huán)正常的血液灌注。劉芬等[10]研究報(bào)道，脾虛證大鼠黏膜血流量發(fā)生顯著性的改變，電鏡下可見毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)遭到破壞。黃芪總皂苷通過改善微循環(huán)狀況，保證氧和其他營養(yǎng)物質(zhì)的供給充足，為上皮細(xì)胞的再生和修復(fù)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)[11]。

黏膜損傷和微血管損傷的病理過程中產(chǎn)生大量的自由基，損傷內(nèi)皮細(xì)胞[12]。SOD是氧自由基清除因子，在維持氧化和抗氧化的平衡中發(fā)揮作用[13]。MDA可以對血管壁造成直接的損傷，形成黏膜損傷。模型組的血清的SOD較正常組降低，MDA較正常組升高，提示脾虛大鼠自由基增多，清除能力減弱。與模型組對比，各劑量組的血清的SOD升高，MDA降低，說明黃芪總皂苷減少自由基，保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，抗黏膜損傷的作用。NO是一種內(nèi)源性活性物質(zhì)，既具有保護(hù)作用，又有殺傷毒性與促炎的作用；NO在黏膜損傷后的修復(fù)及愈合過程中發(fā)揮著非常重要的作用，特別是對急性黏膜損傷具有急性保護(hù)作用[14]。本文中模型組的血清NO較正常組降低，而經(jīng)過黃芪總皂苷干預(yù)后，NO在血清中的含量又升高，這說明黃芪總皂苷能促進(jìn)NO分泌，促進(jìn)黏膜損傷后的修復(fù)。

脾為后天之本，氣血生化之源，氣主防御與胃腸道黏膜的免疫系統(tǒng)存在這一定的關(guān)聯(lián)。lgG、IgA免疫系統(tǒng)中的重要分子。黃芪總皂苷對脾虛大鼠血清IgG、腸道灌流液IgA升高作用明顯，說明黃芪總皂苷對脾虛大鼠的免疫功能具有促進(jìn)作用，這與黃芪總皂苷能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)的研究結(jié)果一致[15]。

綜上所述，黃芪總皂苷能抑制脾虛大鼠黏膜損傷，改善黏膜血液循環(huán)，這可能與提高機(jī)體免疫功能和抑制脂質(zhì)過氧化作用有關(guān)。

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StudyontheinhibitoryeffectofgastricmucosalinjuryandimprovingroleofgastricmucosalbloodflowinspleendeficientratbytotalsaponinsofAstragalus

Zhang Hou， Song Yanqiu，Chen Guangjun

The Second Affiliated Hospital of Nanyang Medical College(Nanyang473000)

Objective: To explore inhibitory effect of gastric mucosal injury and improving role of gastric mucosal blood flow in spleen deficient rat by total saponins of Astragalus. Methods: 60 SPF SD male rats were randomly divided into normal group, model group, and total saponins of Astragalus of small, medium and high dose group. In addition to normal group, the rest were established model of spleen deficient, after 4 weeks, total saponins of Astragalus of small, medium and high dose group was given total saponins of Astragalus, with dose of 25, 50 and 100 mg/kg, respectively, normal group and model group was given same volume of physiological saline lavage. Each group was continued to fill stomach for 2 weeks. Each index of rats were observed. Results: Compared with normal group, model group of gastric mucosal blood flow, IgA intestinal perfusion fluid and serum NO, SOD, IgG were significantly reduced, serum MDA increased (P<0.01); Compared with model group, gastric mucosal blood flow, IgA intestinal perfusion fluid and serum NO, SOD and IgG of total saponins of Astragalus each dose group rise, gastric mucosal damage index and serum MDA lower (P<0.05 orP<0.01). Conclusion: Total saponins of Astragalus can inhibit rat gastric mucosal injury, and improve gastric mucosal blood flow, this may be related with improving body's immune function and inhibition of lipid peroxidation.

Spleen deficient Total saponins of Astragalus Mucosal injury Immune function Animal experimentation Rats

*河南省教育廳科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(15A360023)

脾虛 黃芪總皂苷 黏膜損傷 免疫功能 動(dòng)物，實(shí)驗(yàn) 大鼠

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.10.081

(收稿：2017-02-18)