李 莎

（河南省濟(jì)源市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 濟(jì)源 459000）

乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測(cè)及其意義

李 莎

（河南省濟(jì)源市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 濟(jì)源 459000）

目的探究乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測(cè)的結(jié)果及其意義。方法 選取我院2016年1月～2017年1月來(lái)我科檢查的肝病變患者1500例，對(duì)其進(jìn)行乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測(cè)，同時(shí)針對(duì)100例健康者血液樣本實(shí)施相同檢查，觀察其病毒標(biāo)記物情況并進(jìn)行比較分析。結(jié)果 本次入選者均順利實(shí)施檢驗(yàn)，大三陽(yáng)患者的陽(yáng)性率明顯較高，同時(shí)病毒拷貝數(shù)較高，健康者相關(guān)指標(biāo)均明顯較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測(cè)的特異性和靈敏性較高，能夠?qū)颊呒膊∽龀鰷?zhǔn)確的判斷和分析，因此可以根據(jù)患者的乙肝病毒復(fù)制狀態(tài)對(duì)其實(shí)施治療，發(fā)揮臨床檢測(cè)的價(jià)值。

乙肝病毒DNA；熒光定量PCR檢測(cè)；肝病變

肝炎是臨床常見(jiàn)的傳染性疾病，因此對(duì)于肝炎的相關(guān)檢測(cè)也備受臨床關(guān)注，本次我們積極針對(duì)乙肝病毒DNA的熒光定量PCR檢測(cè)情況進(jìn)行分析，目的在于總結(jié)臨床經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年1月～2017年1月來(lái)我科檢查的肝病變患者1500例，另外納入100例健康者血液樣本，均對(duì)其實(shí)施乙肝病毒DNA的熒光定量PCR檢測(cè)；研究開(kāi)始前我們均對(duì)相關(guān)科室和工作人員說(shuō)明了研究概況，其均表示已經(jīng)知曉本次研究概況且同意支持本次研究。

1.2 方法

針對(duì)受檢者均進(jìn)行乙肝病毒DNA的熒光定量PCR檢測(cè)，檢測(cè)所用設(shè)備為達(dá)安基因DA7600設(shè)備；首先收集100 uL血清，對(duì)其中的HBV-DNA進(jìn)行提取，使用PCR的反應(yīng)液加入到HBV模板中，然后將其混勻并置于毛細(xì)管中；此后設(shè)置陰性、空白管、陽(yáng)性對(duì)照。各個(gè)反應(yīng)管均放入Roche熒光定量檢測(cè)儀實(shí)施PCR擴(kuò)增，在50攝氏度的條件下激活其UNG，然后在93攝氏度下預(yù)變性2 min，同時(shí)在93攝氏度5sec，在60攝氏度35sec，一共40個(gè)循環(huán)[1]。同時(shí)應(yīng)注意模板的工作溫度范圍應(yīng)該控制在30～99攝氏度，電源電壓控制在220±22 V。此后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用計(jì)算機(jī)對(duì)待測(cè)樣本中的HBV-DNA含量進(jìn)行測(cè)定，并針對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物實(shí)施瓊脂凝膠電泳，和陽(yáng)性模板進(jìn)行對(duì)照，如果其特異性條帶的位置和陽(yáng)性模板相同則為陽(yáng)性，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察檢測(cè)情況，同時(shí)按照乙肝患者的病情將其分為小三陽(yáng)（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+），大三陽(yáng)（HBsHg+、HBeAg+、HBcAb+），HBsAb單獨(dú)陽(yáng)性組，HBsAg單獨(dú)陽(yáng)性組。然后按照類別對(duì)其陽(yáng)性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并對(duì)比組間的病毒拷貝數(shù)（Log值）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)（n）、百分?jǐn)?shù)（%）表示，采用x2檢驗(yàn)；計(jì)量資料用“x± s表示，采用t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

本次入選者均順利實(shí)施檢驗(yàn)，大三陽(yáng)患者的陽(yáng)性率明顯較高，同時(shí)病毒拷貝數(shù)較高，健康者相關(guān)指標(biāo)均明顯較低，其詳細(xì)情況見(jiàn)下表1。

表1 乙肝病毒檢測(cè)的詳細(xì)情況（±s）

表1 乙肝病毒檢測(cè)的詳細(xì)情況（±s）

病毒拷貝數(shù)（Log值）大三陽(yáng) 900 900 100.0 7.67±0.47小三陽(yáng) 300 140 46.7 7.31±0.24 HBsAg 200 115 57.5 5.74±1.21 HBsAb 100 33 33.0 4.57±0.29健康者 100 5 5.0 3.44±0.14組別 例數(shù) HBV-DNA陽(yáng)性數(shù)HBV-DNA陽(yáng)性率

3 討 論

肝炎的發(fā)生主要是有肝炎并對(duì)感染引起，病發(fā)發(fā)生對(duì)患者的健康會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重影響，同時(shí)未經(jīng)及時(shí)治療的情況下，極有可能使得肝炎演變?yōu)楦斡不蚋伟虼宋覀儜?yīng)該早期對(duì)患者做出診斷并給予治療[2]。

目前臨床多數(shù)研究認(rèn)為，肝炎疾病的傳染性尚不能完全明顯，但是病情進(jìn)展必然和患者的病毒復(fù)制存在密切關(guān)系，此時(shí)有效的檢測(cè)方法就成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)所在[3]。熒光定量PCR檢測(cè)是近年來(lái)臨床中逐漸應(yīng)用的一種檢測(cè)方法，熒光技術(shù)在檢測(cè)中的聯(lián)合使用，使得PCR過(guò)程中的熒光信號(hào)能夠被準(zhǔn)確的反應(yīng)，從而通過(guò)其變化和檢測(cè)獲得較高的靈敏度和準(zhǔn)確性[4]。本次我們通過(guò)對(duì)相關(guān)的受檢者樣本進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，大三陽(yáng)患者的陽(yáng)性率明顯較高，同時(shí)病毒拷貝數(shù)較高，健康者相關(guān)指標(biāo)均明顯較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)說(shuō)明了乙肝病毒DNA對(duì)于患者病情程度的反應(yīng)價(jià)值，臨床可及時(shí)根據(jù)患者的檢測(cè)結(jié)果對(duì)其實(shí)施干預(yù)和治療。

綜上所訴，乙肝病毒DNA熒光定量PCR檢測(cè)的特異性和靈敏性較高，能夠?qū)颊呒膊∽龀鰷?zhǔn)確的判斷和分析，其臨床實(shí)施的意義則在于，可以根據(jù)患者的乙肝病毒復(fù)制狀態(tài)對(duì)其實(shí)施治療，最終幫助患者改善其預(yù)后。

[1]翟秀英.熒光定量PCR檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA的臨床意義[J].臨床合理用藥雜志,2014,02(8):108-109.

[2]李秀義,高冬梅,潘繼文,等.熒光定量PCR檢測(cè)乙型肝炎病毒DNA的臨床價(jià)值[J].蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,06(12):804-806.

[3]顏 敏.血清HBV-DNA熒光定量PCR檢測(cè)與乙乙肝病毒標(biāo)志物模式的相關(guān)因素探討[J].中外醫(yī)療,2014,26(10):193-194.

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ISSN.2095-8242.2017.053.10427.01

本文編輯：趙小龍