韋曉文，陳曉微，楊雪華，龍燕華，蔣 捷，宋德志，高興新*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西 南寧 530021）

大葉桉制劑對(duì)燒傷創(chuàng)面細(xì)菌的抑制作用

韋曉文1，陳曉微1，楊雪華1，龍燕華1，蔣 捷1，宋德志2，高興新3*

（1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣西 南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，廣西 南寧 530021；3.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西 南寧 530021）

目的探討大葉桉制劑對(duì)燒傷創(chuàng)面細(xì)菌的抑制作用。方法 采用最低抑菌濃度（MIC）和紙片瓊脂擴(kuò)散法對(duì)燒傷創(chuàng)面細(xì)菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。結(jié)果 紙片瓊脂稀釋法結(jié)果顯示大葉桉對(duì)銅綠假單胞菌的抑菌效果表現(xiàn)為3株低敏，構(gòu)成比為75%，1株不敏感，構(gòu)成比為25%；大葉桉對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌效果表現(xiàn)為1株低敏感，構(gòu)成比為100%。結(jié)論 大葉桉制劑對(duì)燒傷創(chuàng)面細(xì)菌銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌抑菌效果不明顯。

金黃色葡萄球菌；銅綠假單胞菌；抑制作用

近年來(lái)，不合理的廣泛應(yīng)用廣譜抗生素致使燒傷患者的常見(jiàn)的細(xì)菌感染的菌種和對(duì)抗生素的敏感性發(fā)生了變化，而且耐藥的細(xì)菌逐漸的增加，使感染不受控制，導(dǎo)致治療細(xì)菌感染越來(lái)越困難。[1]

中醫(yī)藥對(duì)組織刺激小，無(wú)過(guò)敏，殺菌力強(qiáng)，對(duì)肝腎功能無(wú)影響，感染創(chuàng)面植皮不影響植皮成活，并有一定的抗?jié)B血作用[2]。其中以大葉桉比較有代表性。大葉桉性寒味苦，具有消炎止痛、止癢收斂之功效；藥敏試驗(yàn)具有廣譜抗菌作用，對(duì)多種細(xì)菌如葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌等均具有較強(qiáng)的抑菌作用，特別對(duì)金黃色葡萄球菌極度敏感，有很好的殺菌作用[3]。本研究探討大葉桉對(duì)細(xì)菌的抑菌作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 植物材料和供試菌種來(lái)源

大葉桉枝葉采集于南寧高峰林場(chǎng)，取葉片晾干后做為供試材料。供試菌種由廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院提供。

1.1.2 主要試劑

牛肉膏-蛋白胨培養(yǎng)基①固體培養(yǎng)基成品。②肉湯培養(yǎng)基成品。

1.2 方法

1.2.1 菌液、大葉桉制劑制備

在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)刮取菌種接種到無(wú)菌肉湯中，放在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h。用1000 mL蒸餾水和50 g大葉桉干葉煮沸，制備成45 mL的大葉桉制劑。

1.2.2 細(xì)菌計(jì)數(shù)

采取平板計(jì)數(shù)法。取菌液用0.9%的無(wú)菌生理鹽水進(jìn)行10倍系列稀釋后，取1 mL置90 MM空培養(yǎng)基后，加入12 mL的固體培養(yǎng)基混勻?；靹蚝蠓旁?7°恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。

1.2.3 MIC測(cè)定

用二倍稀釋法測(cè)MIC。取7支無(wú)菌試管，標(biāo)1～7號(hào)，分別加入1 mL無(wú)菌肉湯培養(yǎng)基。1～7號(hào)試管分別加入稀釋1000倍的菌液0.1 mL，混勻后放在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)24 h后，取1～7號(hào)試管的0.2 mL混合液分別放入直徑為60 mm的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，觀察固體培養(yǎng)基有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)。無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的最小濃度為細(xì)菌的最小抑菌濃度[5]。

1.2.4 K-B紙片擴(kuò)散法

用無(wú)菌棉簽蘸取實(shí)驗(yàn)菌液，均勻的涂抹整個(gè)固體培養(yǎng)基，在無(wú)菌環(huán)境下取沾有大葉桉制劑的圓濾紙片（直徑為6.0 mm，蘸取制劑10 μL），貼在固體培養(yǎng)基上。在37°溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h，用尺子量取抑菌直徑[6]。

2 結(jié) 果

2.1 大葉桉制劑對(duì)燒傷創(chuàng)面細(xì)菌的MIC

本次實(shí)驗(yàn)主要菌種以銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌為主。在MIC測(cè)定中，固體培養(yǎng)基均出現(xiàn)細(xì)菌的生長(zhǎng)，提示稀釋后濃度的大葉桉對(duì)銅綠假單胞菌，金黃色葡萄球菌無(wú)明顯的抑菌濃度，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)棄用。

2.2 采用紙片瓊脂稀釋法（表1）

表1 大葉桉的抑菌敏感度（n，%）

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示大葉桉煎劑對(duì)燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢(shì)菌種銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌的抑制作用較弱。本作者認(rèn)為，抑菌效果不明顯可能與培養(yǎng)基，大葉桉制劑的有效成分存在著揮發(fā)性、細(xì)菌生物被膜關(guān)系等因素有關(guān)。

有報(bào)道稱(chēng)適宜的培養(yǎng)基、接近中性的藥敏試紙、每毫升1.5億個(gè)細(xì)菌的濃度是實(shí)驗(yàn)室普通細(xì)菌藥敏分析實(shí)驗(yàn)取得最佳結(jié)果的必要條件[7]。培養(yǎng)基的選擇，目前應(yīng)用最多的為M-H 瓊脂培養(yǎng)基，作者使用固體肉湯培養(yǎng)基可能是導(dǎo)致大葉桉煎劑對(duì)銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌抑制作用較弱的原因。

作者推測(cè)可能大葉桉中的有抑菌作用的成分沸點(diǎn)較低，在煎煮過(guò)程中揮發(fā)，有相關(guān)的報(bào)道，大葉桉揮發(fā)成分中，碳?xì)浠衔镎紦]發(fā)油總量的20.83%，含氧化合物占78.24%；而在確認(rèn)的水溶性成分中，皆為含氧化合物[8]。有可能本實(shí)驗(yàn)采集的大葉桉葉的抑菌活性物質(zhì)的濃度較低，作者將取不同季節(jié)的大葉桉葉做對(duì)燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢(shì)菌種做抑菌實(shí)驗(yàn)，具體機(jī)制有待進(jìn)一步探索。

抑菌效果不明顯可能與細(xì)菌生物膜形成有關(guān)系，細(xì)菌生物膜（bacterialbi。film，BF）的產(chǎn)生可能起著重要的作用。目前生物膜引起的微生物耐藥明顯增加，約65%的人類(lèi)細(xì)菌感染與生物膜有關(guān)。傳統(tǒng)抗生素治療對(duì)細(xì)菌生物被膜引起的感染效果欠佳。迄今為止，如何根治細(xì)菌生物被膜引起的感染仍然是臨床上相當(dāng)棘手的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)中，針對(duì)綠膿假單胞菌和金黃色葡萄球菌的藥敏實(shí)驗(yàn)有著不同的結(jié)果，對(duì)同一種細(xì)菌不同次實(shí)驗(yàn)的而結(jié)果亦有差異，很有可能是由于實(shí)驗(yàn)用細(xì)菌形成生物被膜，導(dǎo)致大葉桉制劑的抑菌作用不明顯，難以形成有效的抑菌環(huán)。細(xì)菌生物膜在耐藥形成中都發(fā)揮一定作用，但都不是惟一的，可能是多因素協(xié)同作用所致。目前這方面的研究仍然存在很多問(wèn)題，還需進(jìn)一步的探討。

總之，本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大葉桉煎劑對(duì)燒傷創(chuàng)面的優(yōu)勢(shì)菌銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用不明顯，其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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R979.4

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ISSN.2095-8242.2017.051.9981.02

本文編輯：趙小龍

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