●張乃紅

化療結(jié)合DC-CIK免疫治療多發(fā)性骨髓瘤患者療效及安全性評價

●張乃紅

目的：探討分析化療聯(lián)合以樹突狀細(xì)胞(DC)和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)為效應(yīng)細(xì)胞的過繼免疫治療多發(fā)性骨髓瘤(MM)的臨床療效。方法：隨機(jī)選取2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者，隨機(jī)分成兩組，對照組：25例，常規(guī)化療。觀察組：25例，化療結(jié)合DC-CIK免疫治療。觀察誘導(dǎo)前后免疫表型變化，以及兩組患者的治療總有效率。結(jié)果：誘導(dǎo)前后DC的免疫表型差異顯著，誘導(dǎo)后各表型的陽性率明顯提高，具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01。對照組的治療總有效率為80.0%，觀察組的治療總有效率為92.0%，觀察組的臨床效果要明顯優(yōu)于對照組，P＜0.05。結(jié)論：化療結(jié)合DC-CIK免疫治療多發(fā)性骨髓瘤患者療效確切，值得臨床廣泛推廣。

多發(fā)性骨髓瘤；DC-CIK免疫治療

老年人群為多發(fā)性骨髓瘤(MM)的高發(fā)人群，隨著人口老齡化的加劇，MM的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。有報道顯示[1]，DC-CIK細(xì)胞免疫治療應(yīng)用于MM，可表現(xiàn)出強(qiáng)大的抗腫瘤作用。本次研究以2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者為例，探討分析化療結(jié)合DC-CIK免疫治療MM的臨床療效及安全性，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2014年1月至2015年1月我院收治的50例MM患者，其中男性27例，女性23例，年齡18-72歲，平均年齡（61.3±6.9）歲，隨機(jī)分成兩組。對照組：25例，常規(guī)化療治療，其中男14例，女11例，平均年齡（60.4±4.5）歲。觀察組：25例，化療結(jié)合DC-CIK免疫治療。其中男13例，女12例，平均年齡（61.6±5.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：（1）符合《血液學(xué)診斷即療效標(biāo)準(zhǔn)》中對MM的診斷；（2）骨髓細(xì)胞學(xué)、血M蛋白檢查、X線檢查確診；（3）骨髓異常漿細(xì)胞＞15%；（4）均為首次診斷患者，預(yù)計生存期＞6個月；排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并心、肝、腎等重要臟器功能不全者；（2）化療禁忌癥患者；（3）隨訪資料不全者；（4）中途滑脫者。所有患者均知曉本次研究內(nèi)容，并自愿簽署知情同意書。兩組患者的一般資料方面，如年齡、性別、病程等方面兩組患者無統(tǒng)計學(xué)差異，P＞0.05，因此有可比性。

1.2 試劑與儀器

患者外周血單個核細(xì)胞采用PBS(Hy Clone)及人淋巴細(xì)胞分離液(TBD)分離洗滌；rhIL-2、rhIFN-γ（美國Peprotech公司）；無血清培養(yǎng)液（美國Gibco公司）、anti-CD3（BD公司）。流式單抗(CD4-FITC、CD25-APC、CD127-PE)、溶血素、PE同型對照、APC、洗滌液（均購自BD公司）；美國BDFACSCalibur流式細(xì)胞儀。

1.3 治療方法

對照組：常規(guī)化療治療?；煼桨溉缦拢旱厝姿?表柔比星+長春長辛方案、地塞米松+硼替佐米+吡柔比星方案、地塞米松+環(huán)磷酰胺+表柔比星+長春地辛方案，化療周期為三個周期以上。觀察組：在對照組化療基礎(chǔ)上，聯(lián)合DC-CIK免疫治療。具體方案如下：

1.3.1 DC-CIK誘導(dǎo)[3]

取患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)，貼壁培養(yǎng)后消化成懸浮細(xì)胞，在 1640培 養(yǎng) 液 中 加 入 IL-1(100U/ml)、IL-2(500U/ml)、IFN-γ(1000U/ml)、CD3mAb(100ng/ml)，進(jìn)行CIK培養(yǎng)，每兩天更換一次培養(yǎng)液，于第七天進(jìn)行收集。剩余貼壁細(xì)胞加GM-CSF和IL-4，每三天補(bǔ)充一次新鮮因子，第六天加入自體Ag-DC。取培養(yǎng)到第八天的PBMC和Ag-DC，加入PE標(biāo)記的HLAⅡmAb10μl以及FITC標(biāo)記的CD86mAb、CD83mAb10μl，流式細(xì)胞儀測定。將收集到的CIK培養(yǎng)液分為Ag-DCCIK培養(yǎng)組（Ag-DC：CIK=1∶10）和單純CIK培養(yǎng)液培養(yǎng)組，24小時后，取CIK、Ag-DC-CIK和PBMC，加入FITC標(biāo)記mAb對CD3表達(dá)進(jìn)行檢測，CD8、CD56通過加入PE標(biāo)記mAb檢查。

1.3.2 細(xì)胞回輸[4]

每次治療前48小時，對DC、CIK進(jìn)行細(xì)菌、真菌、內(nèi)霉素檢測，確保無污染后繼續(xù)培養(yǎng)，于第十四天將CIK細(xì)胞（Ag-DC致敏）離心、洗滌，25ml的人血白蛋白、20萬單位的rhIL-2、生理鹽水100ml重新制成懸浮細(xì)胞，2h內(nèi)回輸至患者體內(nèi)。

1.3.3 細(xì)胞的免疫表型分析

培養(yǎng)第八天，將CD1a、CD86、HLA-DR、CD83、CD80mAb分別加入抗原負(fù)載DC，成熟前后的DC免疫表型利用流式細(xì)胞儀檢測。

1.4 療效評價[5]

多發(fā)性骨髓瘤療效評定標(biāo)準(zhǔn)分為直接指標(biāo)和間接指標(biāo)兩類。直接指標(biāo)包括：骨骼病變、漿細(xì)胞瘤、血清M蛋白以及尿本周蛋白，即骨骼病變有所改善；最大兩個漿細(xì)胞瘤直徑縮?。?0%；血清M蛋白下降＞50%；尿本白蛋白排出量減少＞50%。間接指標(biāo)包括：血漿蛋白、免疫球蛋白、血清蛋白、血細(xì)胞比容積、血清鈣、血尿素氮、骨髓漿細(xì)胞和淋巴結(jié)以及脾臟。血漿蛋白每升增加20g；免疫球蛋白、血清蛋白恢復(fù)至正常水平；血細(xì)胞比容積增加量＞0.06；血清鈣每升下降至2.485mmol；血尿素氮降低至正常水平；骨髓漿細(xì)胞數(shù)量減少至5%，淋巴結(jié)以及脾臟腫大縮?。?0%。部分緩解：達(dá)到直接指標(biāo)要求，間接指標(biāo)符合兩項(xiàng)以上；進(jìn)步：直接指標(biāo)中血清M蛋白及尿本周白蛋白降低50%，間接指標(biāo)達(dá)兩項(xiàng)以上；無效：未達(dá)到直接指標(biāo)要求，間接指標(biāo)僅達(dá)到一項(xiàng)要求。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

對所有的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計和分析，應(yīng)使用SPSS18.0軟件。組間計量資料采用t檢驗(yàn)，并用x±s表示，均以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 誘導(dǎo)前后DC的免疫表型比較

誘導(dǎo)前后DC的免疫表型差異顯著，誘導(dǎo)后各表型的陽性率明顯提高，具有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01。

表1 誘導(dǎo)前后DC的免疫表型比較（±s，%）

表1 誘導(dǎo)前后DC的免疫表型比較（±s，%）

時間 CD1a CD83 CD86 HLA-DR誘導(dǎo)前 3.13±0.49 10.13±1.02 30.13±3.12 49.12±4.11誘導(dǎo)后 45.6±4.87 68.12±6.33 84.32±5.12 86.23±5.22 P值 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

2.2 兩組患者治療總有效率比較

對照組的治療總有效率為80.0%，觀察組的治療總有效率為92.0%，觀察組的臨床效果要明顯優(yōu)于對照組，P＜0.05.見表2：

表2 兩組患者治療總有效率比較(n)

3 討論

MM是發(fā)病率僅次于非霍金奇淋巴瘤的血液系統(tǒng)惡性克隆性疾病，雖然造血干細(xì)胞移植術(shù)及一些新藥（雷利度胺、硼替佐米）的應(yīng)用，使MM患者的病情明顯得到緩解，但仍存在短期內(nèi)復(fù)發(fā)及原發(fā)耐藥現(xiàn)象的出現(xiàn)[6]。繼手術(shù)、化療、放療之后又一新型腫瘤治療手段——細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)與樹突狀細(xì)胞(DC)聯(lián)合培養(yǎng)，即DC-CIK細(xì)胞過繼免疫治療。CIK是體內(nèi)效應(yīng)細(xì)胞，具有較高的增殖速度以及癌細(xì)胞殺傷活性，具備T細(xì)胞的特異性免疫能力，可同時表達(dá)CD56、CD3，可高效準(zhǔn)確的殺傷癌細(xì)胞，而對正常細(xì)胞無不良影響，殺傷活性約為LAK細(xì)胞的50倍。DC是一種功能較強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞，受Ag刺激后可提供啟動CIK的有效信號，誘導(dǎo)特異性殺傷MM，與單純CIK相比，殺傷活性更高。本次研究結(jié)果顯示，CIK與DC聯(lián)合培養(yǎng)后，CD1a、CD56、CD86的陽性率明顯升高，患者的治療總有效率明顯高于化療組。綜上所示，化療結(jié)合DC-CIK免疫治療多發(fā)性骨髓瘤患者療效確切，值得臨床廣泛推廣。

（作者單位：山西省人民醫(yī)院血液科）

[1]顏斌.化療聯(lián)合負(fù)載自體抗原致敏的DC-CIK治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床療效及免疫學(xué)機(jī)制研究[D].川北醫(yī)學(xué)院,2013.

[2]李春霞.BD方案與VAD方案治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床觀察[D].鄭州大學(xué),2013.

[3]鄭楠.CIK細(xì)胞聯(lián)合VAD方案治療多發(fā)性骨髓瘤的療效觀察[D].濟(jì)南大學(xué),2014.

[4]趙霞,丁慧芳,劉國強(qiáng),徐敏,邢健,魯光,路希敬.DC-CIK免疫治療聯(lián)合化療對多發(fā)性骨髓瘤患者外周血T細(xì)胞亞群及Treg細(xì)胞的影響[J].現(xiàn)代免疫學(xué),2015,02（6）:130-135.

[5]趙霞,許慶,丁慧芳,徐敏,邢健,魯光,孫彩鳳,劉國強(qiáng).DC-CIK聯(lián)合化療對多發(fā)性骨髓瘤患者細(xì)胞免疫功能的影響[J].中國免疫學(xué)雜志,2015,04（5）:490-496.

[6]錢磊.細(xì)胞免疫治療聯(lián)合含硼替佐米的化療方案治療多發(fā)性骨髓瘤療效分析[D].吉林大學(xué),2014.