奚 悅，李敬林

·論著·

·中醫(yī)·中西醫(yī)結合研究·

三黃糖腎康顆粒對早期糖尿病腎病模型大鼠微炎癥狀態(tài)的影響

奚 悅1，李敬林2*

目的探討三黃糖腎康顆粒對早期糖尿病腎病模型大鼠微炎癥狀態(tài)的影響。方法研究時間為2012年8—10月，SPF級Wistar大鼠90只，雌雄各半，隨機選取10只作為正常對照組，給予常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)；其余80只隨機分為模型組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，各16只，均給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)。1周后除正常對照組大鼠外其余各組大鼠均予以鏈脲佐菌素(STZ)溶液42 mg/kg一次性腹腔注射，誘導糖尿病模型，8只大鼠造模失敗；余72只大鼠2周后收集24 h尿液檢測尿微量清蛋白(MALB)以判定早期糖尿病腎病模型是否成功，其中6只大鼠糖尿病腎病模型造模失敗。實驗過程中，模型組3只大鼠死亡，西藥組1只大鼠死亡，中藥低劑量組、中藥高劑量組各有2只大鼠死亡。正常對照組和模型組均給予蒸餾水灌胃，中藥預防組大鼠自早期糖尿病腎病造模成功日起即開始給藥，連續(xù)給藥10周；其余各組造模成功2周后，分別給予相應藥物灌胃，連續(xù)給藥8周。西藥組給予貝那普利灌胃，中藥高劑量組使用濃度為3.84 g/ml的三黃糖腎康顆粒藥液，中藥預防組和中藥低劑量組使用濃度為1.28 g/ml的三黃糖腎康顆粒藥液。實驗結束后測定大鼠血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、MALB、血清β2-微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清及腎臟組織中C反應蛋白(CRP)，腎臟組織中核因子κB(NF-κB)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、細胞表面趨化因子受體2(CCR2)mRNA及蛋白表達水平，光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)變化(HE染色和PAS染色)。結果模型組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組FBG、HbA1c、MALB高于正常對照組(P<0.01)；西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組FBG、HbA1c、MALB、血清及腎臟組織中CRP，腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平均低于模型組(P<0.01)；中藥預防組FBG、MALB低于西藥組、中藥低劑量組、中藥高劑量組(P<0.05)。正常對照組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠BUN低于模型組(P<0.01)；中藥低劑量組大鼠BUN高于正常對照組(P<0.05)。模型組大鼠血清及腎臟組織中CRP，腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平均高于正常對照組(P<0.01)。中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠腎臟組織中NF-κB mRNA及蛋白表達水平均高于中藥預防組(P<0.01)。西藥組大鼠腎臟組織中NF-κB mRNA及蛋白表達水平高于中藥預防組、而低于中藥低劑量組(P<0.01)。中藥預防組大鼠腎臟組織中MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平低于西藥組及中藥低、高劑量組(P<0.05)；西藥組MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平低于中藥低、高劑量組(P<0.05)。西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠腎臟病理變化程度明顯輕于模型組。結論三黃糖腎康顆?？捎行Ы档吞悄虿∧I病模型大鼠FBG、HbA1c、MALB、BUN、血清及腎臟組織中CRP，下調(diào)腎臟組織NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平，改善腎臟形態(tài)學病變,減輕糖尿病腎病微炎癥狀態(tài)。

糖尿病腎?。淮笫?；炎癥；三黃糖腎康

奚悅，李敬林.三黃糖腎康顆粒對早期糖尿病腎病模型大鼠微炎癥狀態(tài)的影響[J].中國全科醫(yī)學，2017，20(30)：3770-3775.[www.chinagp.net]

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糖尿病腎病是糖尿病常見的嚴重并發(fā)癥之一，迄今為止，其確切發(fā)病機制尚未完全闡明。近年來，隨著中醫(yī)學研究的不斷深入，如何應用中藥防治糖尿病腎病的發(fā)生、發(fā)展已引起了醫(yī)學工作者的關注。本研究通過觀察三黃糖腎康顆粒對糖尿病腎病模型大鼠血糖(FBG)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、尿微量清蛋白(MALB)、血清β2-微球蛋白(β2-MG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清及腎臟組織中C反應蛋白(CRP)、腎臟組織中核因子κB(NF-κB)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)及細胞表面趨化因子受體2(CCR2)mRNA及蛋白表達水平、腎臟病理的影響，探討三黃糖腎康顆粒對早期糖尿病腎病微炎癥狀態(tài)的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 研究時間為2012年8—10月，SPF級Wistar大鼠90只，雌雄各半，平均體質(zhì)量(280±20)g，購于遼寧長生生物技術有限公司，動物合格證號：SCDK2010-0001。大鼠購入后適應性飼養(yǎng)1周，自由飲水，實驗前常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)，隔天更換1次墊料。開始實驗后，按照分組給予常規(guī)顆粒飼料或高脂高糖飼料喂養(yǎng)，糖尿病模型建立成功后需1 d更換2次墊料。

1.2 藥品及試劑 三黃糖腎康組成：黃精40 g，黃芪40 g，黃連6 g，虎杖30 g，澤蘭20 g，水蛭粉6 g；免煎顆粒為江蘇省江陰制藥廠生產(chǎn)。貝那普利由北京諾華制藥有限公司提供，批號為0804X1077。常規(guī)顆粒飼料、高脂高糖飼料購自沈陽市前民飼料加工廠。鏈脲佐菌素(STZ)(Sigma公司)。HbA1c檢測試劑盒，購于美國普萊默斯HPLC分析系統(tǒng)。β2-MG檢測試劑盒，購于寧波瑞源生物科技有限公司。Scr、BUN測試盒，購于寧波瑞源生物科技有限公司。CRP檢測ELISA試劑盒，購于上海越研生物科技有限公司。兔抗大鼠NF-κB、MCP-1及CCR2抗體，購于Santa公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗分組及造模 適應性飼養(yǎng)1周后，對各組大鼠進行稱重，按體質(zhì)量編為1～90號，隨機選取10只作為正常對照組，給予常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)；其余80只給予高脂高糖飼料喂養(yǎng)，隨機分為模型組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，各16只。1周后除正常對照組大鼠外其余各組大鼠均予以STZ溶液42 mg/kg一次性腹腔注射，誘導糖尿病模型。糖尿病模型評價標準：注射STZ溶液后72 h，空腹血糖≥16.7 mmol/L，為糖尿病造模成功。有8只大鼠未成模，剔除實驗。2周后檢測剩余72只大鼠及正常對照組24 h尿液MALB，與正常對照組比較有統(tǒng)計學差異即認為早期糖尿病腎病模型建立成功。其中有6只大鼠早期糖尿病腎病模型造模失敗，剔除實驗。實驗過程中，模型組3只大鼠死亡，西藥組1只大鼠死亡，中藥低劑量組、中藥高劑量組各有2只大鼠死亡。實驗結束時各組大鼠數(shù)量分別為正常對照組(10只)、模型組(13只)、西藥組(13只)、中藥預防組(12只)、中藥低劑量組(10只)、中藥高劑量組(10只)。

1.3.2 給藥方法 正常對照組和模型組均給予1 ml·100 g-1·d-1蒸餾水灌胃。按照人與大鼠間給藥量的等效換算，中藥預防組大鼠自糖尿病腎病造模成功日起即開始給藥，連續(xù)給藥10周；其余各組造模成功2周后，分別給予相應藥物灌胃，連續(xù)給藥8周。西藥組給予貝那普利灌胃，給藥量按照正常成人給藥量等效換算為成年大鼠給藥量，即0.9 mg·kg-1·d-1。每100 g三黃糖腎康顆粒溶于384 ml蒸餾水制成濃度為3.84 g/ml的藥液，供中藥高劑量組使用，給藥量為1 ml；將其稀釋3倍至濃度為1.28 g/ml，供中藥預防組和中藥低劑量組使用，給藥量為1 ml。

1.4 取材 實驗結束前1 d，采集各組大鼠尿液以檢測MALB。實驗結束前12 h，各組大鼠禁食，但不禁水。次日肌肉注射10%水合氯醛4 ml/kg麻醉，經(jīng)腹主動脈穿刺采集動脈血，分別置于促凝管和抗凝管內(nèi)，各4 ml，抗凝管立即送檢，促凝管靜置1 h，2 500 r/min，離心10 min，吸取上清液，存放于凍存管中，-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆?。采血后立即摘取各組大鼠左側(cè)腎臟，去除被膜，浸泡于4%多聚甲醛溶液中固定，4 ℃保存?zhèn)溆靡宰霾±頇z查；摘取各組大鼠右腎留取100～200 mg腎皮質(zhì)，進行Western blotting法及RT-PCR檢測。

1.5 觀察指標和測定方法 采用葡萄糖氧化酶法測定FBG,高壓液相層析法測定HbA1c,免疫透射比濁法測定MALB,乳膠增強免疫比濁法測定各組大鼠血清β2-MG,肌酐酸氧化酶法檢測各組大鼠Scr,脲酶-谷氨酸脫氫酶連續(xù)監(jiān)測法檢測各組大鼠BUN，ELISA法測定各組大鼠血清及腎臟組織CRP。采用HE、PAS染色方法，觀察各組大鼠腎臟組織病理變化。采用Western blotting法和RT-PCR檢測各組大鼠腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平,引物設計見表1。

表1 引物設計

注：NF-κB=核因子κB，MCP-1=單核細胞趨化蛋白-1，CCR2=細胞表面趨化因子受體2

2 結果

2.1 各組間FBG、HbA1c、MALB、血清β2-MG比較 各組間FBG、HbA1c、MALB比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。模型組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組FBG、HbA1c、MALB高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組FBG、HbA1c、MALB均低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；中藥預防組FBG、MALB低于西藥組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表2)。

2.2 各組大鼠Scr、BUN比較 各組大鼠Scr比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。各組大鼠BUN比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。正常對照組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠BUN低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；中藥低劑量組大鼠BUN高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表3)。

Table2 Comparison of FBG,HbA1c，MALB and β2-MG in different groups

組別只數(shù)FBG(mmol/L)HbA1c(%)MALB(mg/L)血清β2-MG(mg/L)正常對照組107.37±1.196.22±0.9325.46±2.440.06±0.01模型組1330.12±2.59a23.91±5.22a74.85±5.60a0.12±0.02西藥組1321.04±1.72abc13.01±2.56ab52.67±6.49abc0.08±0.01中藥預防組1218.57±1.72ab12.69±3.84ab41.89±6.23ab0.08±0.01中藥低劑量組1022.35±2.32abc14.96±3.22ab64.57±7.31abc0.09±0.01中藥高劑量組1020.38±1.91abc13.52±3.43ab58.17±6.03abc0.08±0.01F值131.34827.62393.9300.989P值<0.001<0.001<0.0010.432

注：FBG=血糖，HbA1c=糖化血紅蛋白，MALB=尿微量清蛋白，β2-MG=β2-微球蛋白；與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01；與中藥預防組比較，cP<0.05

表3 各組大鼠Scr、BUN比較

注：Scr=血肌酐，BUN=尿素氮；與正常對照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.01

2.3 各組大鼠血清及腎臟組織中CRP比較 各組大鼠血清及腎臟組織中CRP比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。模型組大鼠血清及腎臟組織中CRP高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠血清及腎臟組織中CRP低于模型組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01，見表4)。

2.4 各組大鼠腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平比較 各組大鼠腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。模型組大鼠腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平均高于正常對照組、西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。西藥組大鼠腎臟組織中NF-κB mRNA及蛋白表達水平低于中藥低劑量組、而高于中藥預防組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠腎臟組織中NF-κB mRNA及蛋白表達水平均高于中藥預防組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。西藥組MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平低于中藥低、高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；中藥預防組大鼠腎臟組織中MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平低于西藥組及中藥低、高劑量組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05，見表5)。

2.5 各組大鼠腎臟組織病理變化 HE染色：低倍鏡(×100)下觀察，正常對照組大鼠腎小球、腎小管及系膜基質(zhì)未見明顯病理變化；高倍鏡(×400)下觀察，模型組腎小球硬化，系膜細胞及系膜基質(zhì)增生，腎小管上皮細胞空泡變性；西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠腎臟病理變化程度明顯輕于模型組，中藥預防組大鼠腎臟的腎小球及腎小管比正常對照組大鼠稍微增大；西藥組與中藥高劑量大鼠腎臟腎小球體積大小相當，但均大于正常對照組(見圖1A、C、E、G、I、K，本文圖1彩圖見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應文章)。

PAS染色：正常對照組大鼠腎小球、腎小管及系膜基質(zhì)未見明顯病理變化，腎臟組織PAS染色未見陽性物質(zhì)；模型組大鼠腎臟組織可見廣泛的PAS染色陽性物質(zhì)，主要位于小葉中央部，腎小球基底膜增厚，系膜基質(zhì)明顯增多，腎小球彌漫性病變，小動脈玻璃樣變，腎小球內(nèi)部偶見圓形、橢圓形或錐形的結節(jié)，個別腎小球荒廢；而各治療組及中藥預防組大鼠腎臟PAS染色呈弱陽性，西藥組可見彌漫腎小球硬化，系膜基質(zhì)和細胞外基質(zhì)明顯增多，腎小管萎縮；中藥預防組可見腎小球系膜基質(zhì)輕度增多，腎小球基底膜及腎小管無病變；中藥低劑量組大鼠可見節(jié)斷性腎小球硬化，腎小球系膜基質(zhì)增多，基底膜增厚；中藥高劑量組可見腎小球系膜基質(zhì)及系膜細胞增多，腎小球基底膜無變化，腎小管無病變(見圖1B、D、F、H、J、L)。

表4 各組大鼠血清及腎臟組織中CRP比較

注：CRP=C反應蛋白；與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01

表5 各組大鼠腎臟組織中NF-κB、MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白表達水平比較

注：與正常對照組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01；與西藥組比較，cP<0.01；與中藥預防組比較，dP<0.01；與中藥低量組比較，eP<0.01

注：A、B為正常對照組，C、D為模型組，E、F為西藥組，G、H為中藥預防組，I、J為中藥低劑量組，K、L為中藥高劑量組；A、C、E、G、I、K為HE染色(×400)，B、D、F、H、J、L為PAS染色(×400)

圖1 大鼠腎臟組織病理圖

Figure1 Pathological figure of rat kidney

3 討論

糖尿病腎病是糖尿病嚴重慢性并發(fā)癥之一，20%～40%的糖尿病患者可發(fā)展為終末期腎病[1]。蛋白尿是糖尿病腎病的主要表現(xiàn)。糖尿病腎病初期表現(xiàn)為MALB升高，為早期糖尿病腎病的主要特點，MALB是目前臨床診斷早期糖尿病腎病的主要指標。目前西醫(yī)治療不外乎降糖、降壓、降脂、抗凝、飲食控制等，尚無其他特效辦法，西醫(yī)治療有不良反應及用藥的局限性，而中醫(yī)對糖尿病腎病無論是臨床還是實驗研究，均取得了一定的成果，中藥在患者臨床癥狀改善率，降低Scr、尿蛋白，改善腎功能等方面均具有很大的優(yōu)勢，日益受到重視[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)三黃糖腎康具有改善糖尿病腎病病情的作用[2]，因而本研究旨在通過動物實驗進一步在機制上進行探討。

本研究模型組FBG、HbA1c、MALB最高，模型組大鼠腎臟組織病理結果可見廣泛的PAS染色陽性物質(zhì)，主要位于小葉中央部，腎小球基底膜增厚，系膜基質(zhì)明顯增多，腎小球彌漫性病變，小動脈玻璃樣變，腎小球內(nèi)部偶見圓形、橢圓形或錐形的結節(jié)，個別腎小球荒廢。以上結果提示糖尿病腎病大鼠模型造模成功。而西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠FBG、HbA1c、MALB降低，腎臟組織病理改變均有不同程度改善。Scr和BUN在一定程度上可反映腎小球濾過功能的損害程度。糖尿病的發(fā)展規(guī)律是首先出現(xiàn)BUN升高，進而出現(xiàn)腎小球濾過功能降低等病理改變。本實驗結果顯示各組間大鼠Scr比較無差異；與正常對照組比較，模型組大鼠BUN升高；與模型組比較，中藥預防組及各治療組大鼠BUN降低。據(jù)此分析，本研究中動物模型應該處于糖尿病腎病的早期，此時的Scr尚未發(fā)生變化，而模型組大鼠BUN升高，提示糖尿病腎病模型大鼠已經(jīng)出現(xiàn)蛋白質(zhì)代謝紊亂。

CRP與尿清蛋白排泄率(UAER)關系密切。研究表明，糖尿病腎病患者血清CRP較單純2型糖尿病患者和正常人高,且CRP隨著UAER的升高而升高；提示炎癥參與了糖尿病腎病的發(fā)生和發(fā)展,且炎性反應程度與糖尿病腎病的不同階段密切相關[3]。本實驗結果顯示，模型組大鼠血清及腎臟組織中CRP高于其他各組，提示CRP與糖尿病腎病病情相關，病情越重，血清及腎臟組織中CRP越高。

NF-κB是參與炎性反應的重要轉(zhuǎn)錄因子，存在于多種組織細胞中，與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展相關,由NF-κB誘導的細胞因子表達加重了持續(xù)的炎性反應。有研究表明，NF-κB可能是導致糖尿病腎病的重要中心環(huán)節(jié)，NF-κB被激活后可啟動其下游的多種細胞因子轉(zhuǎn)錄[4]。此外，單核巨噬細胞的趨化積聚對腎臟損傷有著重要影響，MCP-1被認為是引起其作用的重要調(diào)節(jié)因子，影響巨噬細胞浸潤和腎小球硬化[5]。NF-κB，MCP-1/CCR2信號通路影響糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，在糖尿病腎病中發(fā)揮著不可或缺的重要作用。

NF-κB被研究者們視為炎性反應鏈的“基因開關”，可見其對于炎性反應發(fā)生起著至關重要的作用，多種細胞因子均受到NF-κB的影響，當NF-κB的表達受到抑制，相關的細胞因子表達也隨之下調(diào)[6]。本實驗結果顯示糖尿病腎病發(fā)生時伴隨著NF-κB表達水平的上調(diào)，機體在長期高血糖的刺激下，導致NF-κB通路被激活，從而導致NF-κB表達上調(diào)。三黃糖腎康可顯著下調(diào)NF-κB表達水平，說明其對NF-κB信號通路具有一定的抑制作用。

在腎臟疾病急性期，單核巨噬細胞通過釋放可溶性遞質(zhì)參與新月體的形成，釋放活性氧、活性氮、蛋白酶，分泌細胞因子及生長因子等物質(zhì)，造成周圍組織損傷。當炎癥進入慢性期后，單核巨噬細胞通過分泌轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)等纖維化的細胞因子促進腎間質(zhì)纖維化，腎小球硬化，最終造成腎衰竭。MCP-1可調(diào)節(jié)單核巨噬細胞表面黏附分子的表達和細胞因子的產(chǎn)生，還可激活嗜堿粒細胞，使其釋放組胺[7]，MCP-1對T細胞同樣具有趨化和激活的雙重作用[8]。

CCR2是單核細胞趨化因子的受體，MCP-1的趨化作用是通過CCR2完成的。CCR2屬于炎癥單核細胞最早的化學催化受體，研究發(fā)現(xiàn)CCR2一般表達在T淋巴細胞、樹突狀細胞以及上皮細胞上，通過配體銜接，參與介導炎性細胞的移動和激活[9]。本研究結果顯示模型組大鼠腎臟組織中MCP-1、CCR2 mRNA及蛋白的表達水平均上調(diào)，西藥組、中藥預防組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠MCP-1和CCR2 mRNA及蛋白表達水平均下調(diào)，說明三黃糖腎康顆粒對MCP-1和CCR2的表達具有一定抑制作用。

綜上所述，當糖尿病腎病發(fā)生時，高血糖激活NF-κB信號通路，由于MCP-1基因的啟動子部位存在于NF-κB的結合位點上，所以在NF-κB和轉(zhuǎn)錄活化因子-1協(xié)調(diào)作用下，導致MCP-1蛋白表達水平升高，CCR2是趨化性細胞因子MCP-1的特異性受體，當MCP-1與CCR2特異性結合后，發(fā)揮其趨化和激活單核細胞至炎癥部位的生物學作用。三黃糖腎康顆?？捎行υ撔盘栟D(zhuǎn)導通路進行阻斷，從NF-κB的激活開始，就發(fā)揮了明顯的類NF-κB抑制劑樣作用，也正是因為該通路的存在，所以對三黃糖腎康顆粒是否直接調(diào)控MCP-1和CCR2表達尚不能確定。

作者貢獻：奚悅進行實驗實施、資料收集整理、撰寫論文并對文章負責；李敬林進行實驗設計及審校。

本文無利益沖突。

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EffectofSanhuangtangshenkangGranuleontheMicroInflammatoryStateinEarlyDiabetesNephropathyModelRats

XIYue1,LIJing-lin2*

1.TheThirdAffiliatedHospitalofJinzhouMedicalUniversity，Jinzhou121000,China2.LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shenyang110032，China

ObjectiveTo explore the effect of Sanhuangtangshenkang granule on the micro inflammatory state in rats with early diabetes nephropathy.MethodsThe study was conducted from August to October in 2012.The study animals were 90 grade SPF Wistar rats,female and male were half and half.10 rats were randomly selected as normal control group and fed with conventional pellet feed.The remaining 80 rats were randomly divided into model group,western medicine group,traditional Chinese medicine prevention group,traditional Chinese medicine low dose group and traditional Chinese medicine high dose group.There were 16 rats in each group,and they were fed with high fat and high sugar diet.One week later,all the rats in each group were given intraperitoneal injection of streptozotocin(STZ) solution 42 mg/kg,except for the normal control group,in order to induce diabetic model.8 rats failed to make the model;the remaining 72 rats were collected 24 h urine after 2 weeks to detect urinary microalbumin(MALB) to determine whether the early diabetic nephropathy model was successful,among them 6 rats failed to make diabetic nephropathy model.In the course of the experiment,3 rats in the model group died,1 rat in the western medicine group died,2 rats in the traditional Chinese medicine low dose group and high dose group of died,respectively.Both the normal control group and model group were given distilled water by gavage.The rats in traditional Chinese medicine prevention group began the administration at the beginning of the success of early diabetic nephropathy model,and continued for 10 weeks;the other groups were given corresponding medicine by gavage 2 weeks after the model success,and continued for 8 weeks.The western medicine group was given benazepril gavage,the traditional Chinese medicine high dose group used the liquid medicine of 3.84 g/ml Sanhuangtangshenkang concentration,the traditional Chinese medicine prevention group and the traditional Chinese medicine low dose group used the liquid medicine of 1.28 g/ml Sanhuangtangshenkang concentration.After the experiment,fasting blood glucose(FBG),glycosylated hemoglobin type A1c(HbA1c),microalbuminuria(MALB),β2 microglobulin(β2-MG)，serum creatinine(Scr),blood urea nitrogen(BUN),C-reactive protein(CRP)in serum and renal tissues，renal tissue nuclear factor κB(NF-κB),monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)and cell surface chemokine receptor 2(CCR2) mRNA and protein expression levels were detected in all rats.The renal pathological morphological changes were observed under light microscope(HE staining and PAS staining).ResultsThe FBG,HbA1cand MALB in model group,western medicine group,traditional Chinese medicine prevention group,low dose group and high dose group were higher than those in normal control group(P<0.01).The FBG,HbA1c,MALB,CRP in serum and kidney tissues,expression levels of NF-κB,MCP-1 and CCR2 mRNA and protein in kidney tissues in western medicine group,traditional Chinese medicine prevention group,low dose group,high dose group were lower than those in the model group(P<0.01).The FBG and MALB in traditional Chinese medicine prevention group were lower than those of western medicine group,traditional Chinese medicine low dose group and high dose group(P<0.05).The levels of BUN in normal control group,western medicine group,traditional Chinese medicine prevention group,low dose group and high dose group were lower than that in model group(P<0.01).The BUN in the traditional Chinese medicine low dose group was higher than that in the normal control group(P< 0.05).The CRP in serum and kidney tissues,expression levels of NF-κB,MCP-1 and CCR2 mRNA and protein in kidney tissues in model group were higher than those in normal control group(P< 0.01).The expression levels of NF-κB mRNA and protein in kidney tissues in traditional Chinese medicine low dose group and high dose group were higher than those in traditional Chinese medicine prevention group(P< 0.01).The expression levels of NF-κB mRNA and protein in kidney tissues in western medicine group were higher than those in traditional Chinese medicine prevention group,while lower than those in traditional Chinese medicine low dose group(P< 0.01).The expression levels of MCP-1 and CCR2 mRNA and protein in the rat kidney tissues in traditional Chinese medicine prevention group were significantly lower than those in western medicine group and traditional Chinese medicine low and high dose group(P< 0.05).The expression levels of MCP-1 and CCR2 mRNA and protein in western medicine group were lower than those in traditional Chinese medicine low and high dose group(P< 0.05).The renal pathological changes degree of rats in western medicine group,traditional Chinese medicine prevent group,traditional Chinese medicine low and high dose group were significantly lighter than that in the model group.ConclusionSanhuangtangshenkang granule could effectively reduce FBG，HbA1c，MALB,BUN,CRP in serum and renal tissues of rats with diabetic nephropathy model,down regulate the mRNA and protein expression levels of NF-κB，MCP-1 and CCR2，improve the renal morphological and pathological changes and alleviate the micro inflammatory state of diabetic nephropathy.

Diabetic nephropathies;Rats;Inflammation;Sanhuangtangshenkang granule

R 587.24

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2017.07.y03

2017-02-25；

2017-04-19)

(本文編輯：崔莎)

國家自然科學基金資助項目(81173153)

1.121000 遼寧省錦州市，錦州醫(yī)科大學附屬第三醫(yī)院 2.110032 遼寧省沈陽市，遼寧中醫(yī)藥大學

*通信作者:李敬林，教授，主任醫(yī)師；E-mail:jinglinli666@sina.com

*Correspondingauthor:LIJing-lin,Professor,Chiefphysician;E-mail:jinglinli666@sina.com