韓瑩 李鐵男 劉文力 金春琳 程欣 劉奕 賀莎 吳善東

110003沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院皮膚科（韓瑩、李鐵男、劉文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（劉奕、賀莎、吳善東）

白癜風(fēng)患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗體及抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體的檢測(cè)

韓瑩 李鐵男 劉文力 金春琳 程欣 劉奕 賀莎 吳善東

110003沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院皮膚科（韓瑩、李鐵男、劉文力、金春林、程欣）；杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司（劉奕、賀莎、吳善東）

目的探討白癜風(fēng)患者血清中抗酪氨酸酶IgG抗體（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體（TRP?1 IgG）與白癜風(fēng)的關(guān)系。方法用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定檢測(cè)260例白癜風(fēng)患者和50例健康對(duì)照血清中TYR IgG和TRP?1 IgG的含量。結(jié)果白癜風(fēng)組TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽(yáng)性率57.31%（149/260），TYR IgG陽(yáng)性率37.3%（97/260），TRP?1 IgG陽(yáng)性率33.5%（87/260），均明顯高于對(duì)照組（χ2=25.441、21.630，P＜0.01）。TYR IgG陽(yáng)性與TRP?1 IgG陽(yáng)性不相關(guān)（r=-0.032，P＞0.05）。白癜風(fēng)組TYR IgG陽(yáng)性率男女間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但TRP?1 IgG陽(yáng)性率女性高于男性（χ2=5.811，P＜0.05）。白癜風(fēng)TYR IgG陽(yáng)性率 ≤ 20歲（35.9%）與＞20歲（38.3%）比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而TRP?1 IgG陽(yáng)性率 ≤ 20歲組明顯高于＞20歲組（χ2=6.498，P＜0.05）。結(jié)論檢測(cè)TYR IgG和TRP?1 IgG可為白癜風(fēng)的診斷和治療提供一定依據(jù)。

白癜風(fēng)；一元酚單氧酶；女性；青少年；抗酪氨酸酶IgG抗體；抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白?1 IgG抗體

白癜風(fēng)是一種常見(jiàn)的皮膚病，其病因有自身免疫、神經(jīng)內(nèi)分泌、自身細(xì)胞毒、黑素細(xì)胞破壞、遺傳、病毒及其他學(xué)說(shuō)，但沒(méi)有一種學(xué)說(shuō)能完整解釋其發(fā)病機(jī)制。有研究顯示，白癜風(fēng)患者體內(nèi)存在高滴度抗酪氨酸酶抗體（anti?tyrosinase IgG antibody，TYR IgG）［1?4］和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白 1 IgG 抗體（anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody，TRP ?1 IgG）［1，3，5］，揭示白癜風(fēng)與這 2種抗體水平有關(guān)。本研究檢測(cè)了260例白癜風(fēng)患者血清的TYR IgG和TRP?1 IgG，探討與白癜風(fēng)的關(guān)系。

一、對(duì)象與方法

1.對(duì)象：2012年6月至2013年12月，在沈陽(yáng)市第七人民醫(yī)院皮膚科就診的白癜風(fēng)患者260例中男132例，女128例，平均26歲（7個(gè)月至73歲）；按年齡分為≤20歲組106例，平均12.8歲；＞20歲組154例，平均34.4歲。健康對(duì)照組50例為健康體檢者，其中男26例，女24例；≤20歲14例，＞20歲36例，平均24歲（2～62歲）。本研究通過(guò)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，受檢者均簽署知情同意書(shū)。

2.試劑和儀器：TYR IgG和TRP?1 IgG試劑盒由杭州浙大迪迅生物基因工程有限公司提供。PW?960型全自動(dòng)96孔洗板機(jī)為深圳市匯松科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品，MK3型酶標(biāo)分析儀為美國(guó)Thermo公司產(chǎn)品。

3.方法：取白癜風(fēng)患者及健康對(duì)照組外周血3 ml，分離血清置-70℃冰箱保存。血清中TYR IgG和TRP?1 IgG檢測(cè)用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。血清50倍稀釋作為樣品，設(shè)立校準(zhǔn)品，按常規(guī)ELISA法操作顯色后于450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（A值），以校準(zhǔn)品濃度為X軸，對(duì)應(yīng)的A值為Y軸。根據(jù)校準(zhǔn)曲線(xiàn)求得樣品測(cè)定濃度，乘以稀釋倍數(shù)即為待測(cè)血清的TYR IgG和TRP?1 IgG的濃度。所有標(biāo)本均檢測(cè)3孔，數(shù)值取3孔均值。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)用SPSS 19.0軟件進(jìn)行處理。檢測(cè)數(shù)據(jù)用±s表示，陽(yáng)性率比較用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

白癜風(fēng)組與健康對(duì)照組的性別和年齡構(gòu)成比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.254，2.882，均P＞ 0.05）。健康對(duì)照組TYR IgG檢測(cè)值為（17.920±4.297）U/ml，TRP?1 IgG為（14.251 ±6.172）U/ml，白癜風(fēng)組 TYR IgG 檢測(cè)值為（29.468±14.532）U/ml，TRP?1 IgG 為（26.159 ± 17.417）U/ml。取健康對(duì)照組的x+3×s為陽(yáng)性閾值，TYR IgG和TRP?1 IgG的陽(yáng)性閾值分別為30.811和32.767 U/ml。據(jù)此陽(yáng)性閾值，白癜風(fēng)組TYR IgG陽(yáng)性率為37.31%（97/260），TRP?1 IgG的陽(yáng)性率為33.46%（87/260），健康對(duì)照組陽(yáng)性率均為0，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=25.441，21.630，均P＜ 0.01）。白癜風(fēng)組TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽(yáng)性149例，占57.31%（149/260）。白癜風(fēng)組TYR IgG陽(yáng)性率與TRP?1 IgG陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.841，P＞0.05）。TYR IgG和TRP?1 IgG結(jié)果均為陽(yáng)性的患者僅為35例，比率為13.5%（35/260）。Spearman相關(guān)性分析表明：TRP?1 IgG與TYR IgG檢測(cè)結(jié)果不相關(guān)（r=-0.032，P=0.612）。見(jiàn)表1。

三、討論

研究認(rèn)為，白癜風(fēng)的諸多發(fā)病原因中自身免疫占有重要地位［2?4，6］，甚至認(rèn)為白癜風(fēng)是一種自身免疫性疾?。?］。白癜風(fēng)發(fā)病與黑素生物合成密切相關(guān)，黑素是以酪氨酸為基礎(chǔ)物質(zhì)合成的生物聚合體［7］，是一種膠體性色素，與金屬離子有高度親和力［2，8］，合成和沉積于黑素細(xì)胞的亞細(xì)胞器特殊的溶酶體黑素體內(nèi)［7］。黑素形成需要多步生化反應(yīng)，3種黑素生成相關(guān)酶TYR、TRP?1和TRP?2分別參與催化黑素形成多個(gè)反應(yīng)中的3、1、1個(gè)不同反應(yīng)，并發(fā)揮各自的作用。這3種蛋白都包含一個(gè)跨膜區(qū)和富含組氨酸、半胱氨酸的序列，相互作用，共同形成200 000～700 000的多聚體復(fù)合物，共同組成酪氨酸酶基因蛋白家族［7］。

據(jù)報(bào)道，白癜風(fēng)患者TYR IgG陽(yáng)性率為10.9%（5/46）［4］，36%（7/18）［2］，61%（16/26）［9］；本文為 37.31%，顯著高于健康對(duì)照組（P＜0.01）；白癜風(fēng)患者TRP?1 IgG陽(yáng)性率為5.7%（3/53）［3］和34%（13/38）［5］，本文為33.46%，顯著高于健康對(duì)照組（χ2=21.630，P＜0.01），與上述報(bào)道基本一致。各研究中TYR IgG和TRP?1 IgG的陽(yáng)性率差異較大，可能與不同檢測(cè)方法或患者分組［1］、地域、種族差異等原因有關(guān)。本文TYR IgG和（或）TRP?1 IgG陽(yáng)性率達(dá)57.31%（149/260），支持白癜風(fēng)的自身免疫學(xué)說(shuō)。本文TYR IgG和TRP?1 IgG均陽(yáng)性?xún)H占13.46%（35/260），且Spearman相關(guān)性分析表明二者陽(yáng)性不相關(guān)（r=-0.032，P＞0.05），提示TYR IgG與TRP?1 IgG在白癜風(fēng)發(fā)病的自身免疫機(jī)制各自發(fā)揮不同的作用。本文白癜風(fēng)組TRP?1 IgG陽(yáng)性率女性高于男性，≤20歲組高于＞20歲組，提示TRP?1 IgG可能是女性和青少年白癜風(fēng)發(fā)病的一個(gè)因素，對(duì)TRP?1 IgG相關(guān)的女性和青少年白癜風(fēng)探討更有效的臨床治療可能有指導(dǎo)意義。本研究?jī)H限于沈陽(yáng)地區(qū)，標(biāo)本數(shù)量有限，尚待對(duì)白癜風(fēng)患者的TYR IgG與TRP?1 IgG檢測(cè)與白癜風(fēng)的分型、分期、病程，治療結(jié)果進(jìn)行比較，研究其相關(guān)性。

表1 白癜風(fēng)患者性別和年齡段抗酪氨酸酶抗體（TYR IgG）和抗酪氨酸酶相關(guān)蛋白1 IgG抗體（TRP?1 IgG）陽(yáng)性率比較［例（%）］

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2017中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)征文通知

經(jīng)中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)批準(zhǔn)，中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)定于2017年4月20-24日在珠海維景國(guó)際大酒店召開(kāi)中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)。此次會(huì)議將發(fā)揚(yáng)歷次年會(huì)的優(yōu)良傳統(tǒng)，注重中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚病的新方法及新的研究進(jìn)展等方面的學(xué)術(shù)交流，內(nèi)容密切聯(lián)系臨床，切合皮膚科醫(yī)師的實(shí)際需求，會(huì)議將邀請(qǐng)知名專(zhuān)家做特邀演講，闡述皮膚科相關(guān)領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展，創(chuàng)造形式多樣、內(nèi)容充實(shí)、緊張熱烈、活躍互動(dòng)的學(xué)術(shù)交流形式，達(dá)到全國(guó)皮膚科中醫(yī)、西醫(yī)、中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)師共同展現(xiàn)才華、獲取知識(shí)和信息、增進(jìn)友誼的目的，欲參加會(huì)議者請(qǐng)仔細(xì)閱讀通知并在規(guī)定的時(shí)間按要求投稿。

一、投稿要求：①投稿內(nèi)容：皮膚科基礎(chǔ)研究論文、皮膚科臨床診斷和治療等方面的論文、典型與疑難病例等；②投稿方式：中文全文和400字以?xún)?nèi)的中文摘要，請(qǐng)通過(guò)電子郵件投稿，Email：pfkxh@126.com。來(lái)稿請(qǐng)注明2017會(huì)議征文，截稿日期：2017年3月1日；③會(huì)議交流形式：特邀講演、大會(huì)發(fā)言、分會(huì)發(fā)言、書(shū)面交流。

二、聯(lián)系方式：上海市黃浦區(qū)成都北路500號(hào)峻嶺廣場(chǎng)19樓1908室，上海長(zhǎng)征醫(yī)院《中國(guó)真菌學(xué)雜志》編輯部，郵編200003，Email：pfkxh@126.com，聯(lián)系人：施慧，021-81885497，手機(jī)13764560811。

Detection of anti?tyrosinase IgG antibody and anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody in sera of patients with vitiligo

Han Ying,Li Tienan,Liu Wenli,Jin Chunlin,Cheng Xin,Liu Yi,He Sha,Wu Shandong
Department of Dermatology,Shenyang No.7 People′s Hospital,Shenyang 110003,China（Han Y,Li TN,Liu WL,Jin CL,Cheng X）;Hangzhou Zheda Dixun Biological Gene Engineering Co.,Ltd,Hangzhou 310052,China（Liu Y,He S,Wu SD）

Li Tienan,Email:qiyuanmys@163.com

ObjectiveTo investigate relationships between serum levels of anti?tyrosinase IgG antibody（TYR IgG）as well as anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody（TRP?1 IgG）and vitiligo.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to detect serum levels of TYR IgG and TRP?1 IgG in 260 patients with vitiligo and 50 health controls.The threshold for defining a positive test result was set at 3 standard deviations above the mean serum level of TYR IgG or TRP?1 IgG in the healthy controls.ResultsThe positive rate of TYR IgG and/or TRP?1 IgG in the vitiligo group was 57.31%（149/260）.The positive rates of TYR IgG and TRP?1 IgG were both significantly higher in the vitiligo group than in the control group（TYR IgG:37.3%［97/260］vs.0,χ2=25.441,P＜ 0.01;TRP?1 IgG:33.5%［87/260］vs.0,χ2=21.630,P＜ 0.01）.The positive rate of TYR IgG was not associated with that of TRP?1 IgG in the vitiligo group（r=-0.032,P＞ 0.05）.Among patients with vitiligo,the positive rate of TRP?1 IgG was significantly higher in females than in males（χ2=5.811,P＜ 0.05）,as well as in patients aged ≤ 20 years than in those aged ＞ 20 years（χ2=6.498,P＜ 0.05）,while the positive rate of TYR IgG didn′t differ between females and males,or between patients aged≤ 20 years and those aged＞20 years（bothP＞0.05）.ConclusionDetection of TYR IgG and TRP?1 IgG may provide some evidence for the diagnosis and treatment of vitiligo.

Vitiligo;Monophenol monooxygenase;Femininity;Adolescent;Anti?tyrosinase IgG antibody;Anti?tyrosinase?related protein?1 IgG antibody

李鐵男，Email：qiyuanmys@163.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2017.01.013

沈陽(yáng)市科技計(jì)劃項(xiàng)目（F14?158?9?10）

Fund program:Shenyang Science and Technology Plan Project（F14?158?9?10）

2016?04?13）

（本文編輯：吳曉初）