黃英梅 畢健平 張洪英 李軍 曲才杰 王慶毅 黃勇 姜玉暇

266011青島大學(xué)附屬青島市市立醫(yī)院皮膚科

窄譜中波紫外線對(duì)尋常性銀屑病患者外周血纖溶酶及CC趨化因子配體20水平的影響

黃英梅 畢健平 張洪英 李軍 曲才杰 王慶毅 黃勇 姜玉暇

266011青島大學(xué)附屬青島市市立醫(yī)院皮膚科

目的研究窄譜中波紫外線（NB?UVB）治療對(duì)尋常性銀屑病患者外周血中纖溶酶及CC趨化因子配體20（CCL20）水平的影響。方法60例進(jìn)行期尋常性銀屑病患者均采用NB?UVB照射治療，每周3次，共治療8周。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)銀屑病患者NB?UVB照射前后及50例健康體檢者（對(duì)照組）外周血血漿中纖溶酶和CCL20水平。結(jié)果60例患者治療后銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分（2.54±1.64）顯著低于治療前（10.26±3.14），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=17.40，P＜0.05），且NB?UVB治療的有效率達(dá)87%（52/60）。治療前，銀屑病患者外周血中纖溶酶［（180.07±40.62）μg/L］及CCL20水平［（422.41±129.87）pg/L］均顯著高于對(duì)照組［（76.30±26.92）μg/L，t=15.45；（205.33± 49.89）pg/L，t=11.15；均P＜0.05］。治療后銀屑病患者外周血纖溶酶［（148.22±40.05）μg/L］及CCL20的表達(dá)量［（329.67±100.73）pg/L］均顯著低于治療前（t=4.97、6.44，均P＜0.05），但仍顯著高于對(duì)照組（t=10.82、7.95，均P＜0.05）。治療前，銀屑病患者外周血纖溶酶與CCL20水平呈正相關(guān)（r=0.57，P＜ 0.05），纖溶酶、CCL20水平均與PASI評(píng)分呈正相關(guān)（r=0.49、0.62，均P＜0.05）。結(jié)論NB?UVB照射可能通過降低銀屑病患者外周血纖溶酶及CCL20的水平發(fā)揮治療作用。

銀屑??；紫外線療法；纖維蛋白溶酶；趨化因子CCL20

銀屑病真皮乳頭部的血管內(nèi)皮損傷及活化可引起凝血及抗凝血功能異常，使機(jī)體處于高凝狀態(tài)，從而繼發(fā)纖溶系統(tǒng)亢進(jìn)如纖溶酶水平升高，預(yù)防血栓形成。纖溶酶除了纖溶功能，還是一個(gè)潛在的炎癥細(xì)胞激活劑，具有促炎癥作用［1］。CC趨化因子配體20（CCL20）被認(rèn)為是T細(xì)胞及樹突細(xì)胞強(qiáng)有力的趨化物［2］，而這些細(xì)胞在銀屑病的炎癥機(jī)制中發(fā)揮重要作用。窄譜中波紫外線（NB?UVB）近年來被廣泛應(yīng)用于治療銀屑病，療效較好，不良反應(yīng)少，患者依從性較強(qiáng)。我們用NB?UVB治療進(jìn)行期尋常性銀屑病患者，并對(duì)患者治療前后血漿中纖溶酶和CCL20水平進(jìn)行檢測(cè)，探討纖溶酶和CCL20在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用。

一、對(duì)象與方法

1.對(duì)象：收集2015年11月至2016年5月在青島市市立醫(yī)院皮膚科就診的進(jìn)行期尋常性銀屑病患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合進(jìn)行期尋常性銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，皮損泛發(fā)，總面積超過體表面積的50%；②無其他系統(tǒng)性疾病或皮膚疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期、哺乳期婦女及年齡＜16歲的青少年；②患者有光敏性疾病或既往有紫外線過敏史；③最近2周曾外用糖皮質(zhì)激素類、維A酸制劑及免疫抑制劑者，近4周內(nèi)曾系統(tǒng)應(yīng)用治療銀屑病的藥物、光敏性藥物或接受過光療者；④有高血壓、冠心病、凝血功能異?；蜓翰≌?；⑤不能配合復(fù)診的患者。

銀屑病患者60例，其中男34例，女26例，年齡21～64（41.95±12.26）歲；病程6個(gè)月至40年，其中位數(shù)（P25～P75）為11（3～20）年。銀屑病患者的皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)（PASI）評(píng)分為4.9～ 18.6（10.26± 3.14）分。健康對(duì)照組為50例同期健康體檢者，兩組性別和年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究通過青島市市立醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書。

2.主要試劑和儀器：采用SS?06紫外線光療儀（上海希格瑪高技術(shù)公司）全身照射NB?UVB，波長(zhǎng)311～313 nm。纖溶酶和CCL20酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒為武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司產(chǎn)品。

3.治療方法：患者均采用NB?UVB照射治療，首次劑量根據(jù)患者的皮損而定，一般為0.4～0.6 J/cm2，以后每次增加0.1 J/cm2，劑量上限為2.5 J/cm2。照射過程中若出現(xiàn)紅斑（+），皮色呈淡粉或淡棕色，無水腫及壓痛為最理想反應(yīng)，若出現(xiàn)紅斑（++）、水皰、壓痛，應(yīng)停止治療，臨床上按日光性灼傷處理。待癥狀消失后，應(yīng)用原劑量的80%照射，每次增加0.05 J/cm2，每周照射3次，共治療8周。

4.療效判斷：根據(jù)銀屑病患者治療前后PASI評(píng)分評(píng)估病情改善程度，病情改善率（%）=（治療前PASI評(píng)分－治療后PASI評(píng)分）/治療前PASI評(píng)分×100%。按治愈、顯效、好轉(zhuǎn)、無效4級(jí)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)療效：改善率＞90%為治愈，60%～90%為顯效，20%～59%為好轉(zhuǎn)，＜20%為無效，有效率=（治愈例數(shù)+顯效例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

5.外周血血漿中纖溶酶和CCL20水平測(cè)定：采集受檢者抗凝靜脈血2 ml，室溫下3 000 r/min（離心半徑15 cm）離心10 min，提取血漿，分裝入凍存管中，置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。采用ELISA法檢測(cè)外周血血漿中纖溶酶和CCL20水平，具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A值），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品濃度。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示，病例組治療前后PASI評(píng)分比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，病例組治療前后PASI評(píng)分值比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)性分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

二、結(jié)果

1.臨床療效及不良反應(yīng)：見表1。60例銀屑病患者均完成24次光療，平均累計(jì)劑量（30.5±4.7）J/cm2。隨著光療次數(shù)增加，皮損PASI評(píng)分逐漸下降，治療前后差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=238.85，P＜0.05），且光療24次后PASI評(píng)分顯著低于光療前（t=17.40，P＜ 0.05）。光療24次時(shí)，治愈24例，顯效28例，好轉(zhuǎn)8例，有效率87%。光療中無1例終止治療，未出現(xiàn)光毒反應(yīng)。患者均有不同程度皮膚干燥，外用潤(rùn)膚劑可緩解，并有不同程度皮膚色素沉著；出現(xiàn)皮膚灼熱、紅斑者5例，給予減量或暫停治療后即可恢復(fù)，不影響治療。

2.外周血中纖溶酶及CCL20表達(dá)：治療前，患者組纖溶酶及CCL20表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組（t=15.45、11.15，均P＜0.05）；治療后均顯著低于治療前（t=4.97、6.44，均P＜0.05），但仍高于對(duì)照組（t=10.82、7.95，均P＜ 0.05），見表2。

3.相關(guān)性分析：治療前銀屑病患者外周血纖溶酶與CCL20水平呈正相關(guān)（r=0.57，P＜ 0.05），纖溶酶、CCL20水平與PASI評(píng)分均呈正相關(guān)（r=0.49、0.62，均P＜ 0.05）。

三、討論

尋常性銀屑病真皮乳頭部血管增生、迂曲擴(kuò)張，管壁輕度增厚［3］。血管新生與血管內(nèi)皮損傷活化有關(guān)，后者可引起一系列凝血及抗凝血功能異常。本研究顯示，尋常性銀屑病患者治療前外周血血漿中纖溶酶水平顯著高于對(duì)照組。Li等［4］對(duì)健康小鼠耳部皮膚注射纖溶酶，28 d后注射部位皮膚產(chǎn)生明顯的銀屑病樣皮損，且CCL20、白細(xì)胞介素（IL）?17、IL?23、干擾素γ、腫瘤壞死因子α、IL?6、IL?1和IL?22等炎癥因子較正常小鼠耳部皮膚顯著增加，表明纖溶酶可能在銀屑病發(fā)病過程中起促炎癥作用。

研究發(fā)現(xiàn)［5］，纖溶酶與其受體膜聯(lián)蛋白Ⅱ結(jié)合后，在核因子κB信號(hào)通路的調(diào)節(jié)下刺激樹突細(xì)胞產(chǎn)生CCL20。王愛民等［6］發(fā)現(xiàn)，銀屑病患者皮損區(qū)和非皮損區(qū)中核因子κBp65、CCL20表達(dá)明顯高于正常對(duì)照皮膚。本研究也顯示，尋常性銀屑病患者治療前外周血中CCL20表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，且治療前纖溶酶與CCL20水平也呈正相關(guān)。趨化因子CCL20是人體循環(huán)免疫中 Th17細(xì)胞的化學(xué)激活劑［7?8］，而Th17細(xì)胞及相關(guān)因子與銀屑病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。同時(shí)，CCL20通過與其唯一配體CCR6結(jié)合，形成CCL20/CCR6軸，對(duì)T細(xì)胞及樹突細(xì)胞產(chǎn)生特異的趨化作用［2］，而這些細(xì)胞在銀屑病炎癥機(jī)制中發(fā)揮重要作用。本研究顯示，銀屑病患者經(jīng)NB?UVB照射治療后，纖溶酶和CCL20表達(dá)水平均顯著降低，且明顯低于治療前水平，但仍顯著高于對(duì)照組。推測(cè)纖溶酶和CCL20在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中可能發(fā)揮一定的促炎癥作用。

表1 窄譜中波紫外線治療60例尋常性銀屑病患者的臨床療效及PASI評(píng)分

表2 窄譜中波紫外線治療尋常性銀屑病患者前后血漿纖溶酶和CC趨化因子配體20（CCL20）水平變化（±s）

表2 窄譜中波紫外線治療尋常性銀屑病患者前后血漿纖溶酶和CC趨化因子配體20（CCL20）水平變化（±s）

注：a：與治療前比較，P ＜ 0.05；b：治療前后比較，P ＜ 0.05；c：與健康對(duì)照組比較，P＜0.05

組別健康對(duì)照組銀屑病患者組治療前治療后例數(shù)50纖溶酶（μg/L）76.30±26.92a CCL20（pg/L）205.33±49.89a 60 60 180.07±40.62b 148.22±40.05c 422.41±129.87b 329.67±100.73c

本研究顯示，NB?UVB照射治療尋常性銀屑病取得較好療效，有效率為87%。研究表明［9］，NB?UVB照射可有效抑制表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖，減輕炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度；還可降低銀屑病患者血清中Th1型細(xì)胞因子的水平，使Th1/Th2細(xì)胞因子趨向于正常狀態(tài)。此外，NB?UVB還有抗微血管增生的作用［10］。Metwally等［11］研究發(fā)現(xiàn)，NB?UVB照射可以降低銀屑病患者皮損中纖溶酶水平，本研究也證實(shí)NB?UVB照射可以降低銀屑病患者外周血中纖溶酶及CCL20水平。

總之，纖溶酶和CCL20可能在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中起一定的促炎癥作用，而NB?UVB照射可能通過降低銀屑病患者外周血中纖溶酶及CCL20的水平發(fā)揮治療作用。

［1］Li Q,Laumonnier Y,Syrovets T,et al.Plasmin triggers cytokine induction in human monocyte ?derived macrophages［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol,2007,27（6）:1383?1389.DOI:10.1161/ATVBAHA.107.142901.

［2］Liao F,Rabin RL,Smith CS,et al.CC?chemokine receptor 6 is expressed on diverse memory subsets of T cells and determines responsiveness to macrophage inflammatory protein 3 alpha［J］.J Immunol,1999,162（1）:186?194.

［3］趙辨.中國(guó)臨床皮膚病學(xué)［M］.南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社,2010:1011.

［4］Li Q,Ke F,Zhang W,et al.Plasmin plays an essential role in amplification of psoriasiform skin inflammation in mice［J/OL］.PLoS One,2011,6（2）:e16483［2016?07?01］.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3032787/.DOI:10.1371/journal.pone.0016483.

［5］Li X,Syrovets T,Simmet T.The serine protease plasmin triggers expression of the CC?chemokine ligand 20 in dendritic cells via Akt/NF?κB?dependent pathways［J/OL］.J Biomed Biotechnol,2012,2012:186710［2016?07?01］.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3480669/.DOI:10.1155/2012/186710.

［6］王愛民,陸捷潔,許玉軍,等.銀屑病患者皮損Toll樣受體4、核因子-κBp65、CC趨化因子配體20的表達(dá)［J］.中華皮膚科雜志,2013,46（9）:640?643.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2013.09.009.

［7］Homey B,Dieu?Nosjean MC,Wiesenborn A,et al.Up?regulation of macrophage inflammatory protein?3 alpha/CCL20 and CC chemokine receptor 6 in psoriasis［J］.J Immunol,2000,164（12）:6621?6632.DOI:10.4049/jimmunol.164.12.6621.

［8］Kagami S,Rizzo HL,Lee JJ,et al.Circulating Th17,Th22,and Th1 cells are increased in psoriasis［J］.J Invest Dermatol,2010,130（5）:1373?1383.DOI:10.1038/jid.2009.399.

［9］賀紅霞,白莉.窄譜中波紫外線治療尋常性銀屑病的療效觀察［J］.中華皮膚科雜志,2008,41（3）:194?195.DOI:10.3321/j.issn:0412?4030.2008.03.019.

［10］李福民,王雪,段西凌,等.窄譜中波紫外線對(duì)尋常性銀屑病血管調(diào)節(jié)因子的作用機(jī)制研究［J］.中華皮膚科雜志,2009,42（3）:163?166.DOI:10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2009.03.006.

［11］Metwally D,Sayed K,Abdel HR,et al.Reduction in tissue plasmin:a new mechanism of action of narrowband ultraviolet B in psoriasis［J］.Clin Exp Dermatol,2015,40（4）:416?420.DOI:10.1111/ced.12517.

Effects of narrow?band ultraviolet B on levels of plasmin and CC chemokine ligand 20 in peripheral blood of patients with psoriasis vulgaris

Huang Yingmei,Bi Jianping,Zhang Hongying,Li Jun,Qu Caijie,Wang Qingyi,Huang Yong,Jiang Yuxia
Department of Dermatology,Qingdao Municipal Hospital,Qingdao University,Qingdao 266011,China

Zhang Hongying,Email:zhhy1023@163.com

ObjectiveTo investigate the effects of narrow?band ultraviolet B（NB?UVB）therapy on the levels of plasmin and CC chemokine ligand 20（CCL20）in peripheral blood of patients with psoriasis vulgaris.MethodsA total of 60 patients with psoriasis vulgaris in progressive stage were treated with NB?UVB radiation thrice a week for 8 weeks.Enzyme?linked immunosorbent assay（ELISA）was performed to detect the levels of plasmin and CCL20 in the peripheral blood of the patients before and after the treatment,as well as in the peripheral blood of 50 healthy controls.ResultsAfter the treatment,psoriasis area and severity index（PASI）scores in patients were significantly decreased compared with those before the treatment（2.54±1.64vs.10.26±3.14,t=17.40,P＜0.05）,and the response rate was up to 87%（52/60）.Before the treatment,levels of plasmin and CCL20 were both significantly higher in the patient group than in the control group（plasmin:180.07 ± 40.62 μg/Lvs.76.30 ± 26.92 μg/L,t=15.45,P＜0.05;CCL20:422.41±129.87 pg/Lvs.205.33±49.89 pg/L,t=11.15,P＜0.05）.After the treatment,levels of plasmin（148.22 ± 40.05 μg/L）and CCL20（329.67 ± 100.73 pg/L）in patients were significantly decreased compared with those before the treatment（t=4.97,6.44,P＜ 0.05）,but still significantly higher than those in controls（t=10.82,7.95,P＜ 0.05）.Before the treatment,the level of plasmin was positively correlated with the level of CCL20 in peripheral blood of the patients（r=0.57,P＜ 0.05）,and the levels of plasmin and CCL20 were both positively correlated with the PASI score（r=0.49,0.62,respectively,bothP＜ 0.05）.ConclusionNB?UVB radiation may exert a therapeutic effect on psoriasis vulgaris by reducing levels of plasmin and CCL20 in peripheral blood of patients.

Psoriasis;Ultraviolet therapy;Fibrinolysin;Chemokine CCL20

張洪英，Email：zhhy1023@163.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2017.08.011

2016?08?01）

（本文編輯：周良佳 顏艷）