鐘 倩，牛 剛，劉 芳，劉婉敏，張偉健，練曉勤，魏繼紅

(1.江門市中心醫(yī)院 婦科，廣東 江門529000；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

檢測血清腫瘤型丙酮酸激酶在子宮內(nèi)膜癌中的臨床意義

鐘 倩1，牛 剛2，劉 芳1，劉婉敏1，張偉健1，練曉勤1，魏繼紅1

(1.江門市中心醫(yī)院 婦科，廣東 江門529000；2.中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院)

目的檢測正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥(單純型增生、復(fù)雜型增生、不典型增生)和子宮內(nèi)膜癌患者的血清腫瘤型丙酮酸激酶(Tu M2-PK)，探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并初步分析其在子宮內(nèi)膜癌中的臨床意義。方法選取2009年8月至2010年8月在江門市中心醫(yī)院婦科行子宮切除術(shù)或診斷性子宮內(nèi)膜刮除術(shù)的患者140例，其中正常子宮內(nèi)膜患者30例，子宮內(nèi)膜增生癥55例(單純型增生15例，復(fù)雜型增生20例，不典型增生20例)，子宮內(nèi)膜癌55例，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA方法)檢查其血清中的Tu M2-PK的濃度水平。結(jié)果①正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥患者中的血清Tu M2-PK水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與子宮內(nèi)膜癌患者比較有顯著性差異(P<0.01)；②子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK水平與手術(shù)分期及病理分級有相關(guān)性，即手術(shù)分期Ⅲ與分期Ⅰ-Ⅱ、病理分級G3與G1-G2之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05；P<0.01)，但與患者年齡、術(shù)前血清CA125值、肌層浸潤深度、腹水細胞學(xué)無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論子宮內(nèi)膜良性病變的患者與子宮內(nèi)膜癌患者的血清Tu M2-PK水平比較有顯著性差異(P<0.01)，子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK水平與手術(shù)分期及病理分級密切相關(guān)，提示其有望成為子宮內(nèi)膜癌臨床診斷的生物學(xué)標(biāo)志之一，對臨床診斷治療有一定作用。

子宮內(nèi)膜癌；腫瘤型丙酮酸激酶(Tu M2-PK)；血清

(ChinJLabDiagn,2017,21:1701)

在我國，根據(jù)區(qū)域的不完全統(tǒng)計，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)上升趨勢[1]。由于子宮內(nèi)膜癌的確切病因不明，臨床上無法針對病因?qū)ψ訉m內(nèi)膜癌進行早期診斷。本文采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA方法)檢查正常子宮內(nèi)膜(NE)、子宮內(nèi)膜增生癥內(nèi)膜(EH)、子宮內(nèi)膜癌(EC)患者血清中Tu M2-PK的濃度水平探討其在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中的作用，并初步分析其與子宮內(nèi)膜癌臨床、病理因素的關(guān)系，報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象選取2009年8月至2010年8月在江門市中心醫(yī)院婦科行子宮切除術(shù)或診斷性子宮內(nèi)膜刮除術(shù)的患者140例，其中正常子宮內(nèi)膜患者30例(增生期、分泌期各15例)。子宮內(nèi)膜增生癥55例(單純型增生15例，復(fù)雜型增生20例，不典型增生20例)。子宮內(nèi)膜癌55例(G110例，G224例，G321例)，其中內(nèi)膜樣腺癌49例，其余類型6例(其中腺棘癌、腺鱗癌各3例)。病理分期按2009年FIGO標(biāo)準(zhǔn)：其中Ⅰ期25例(IA期14例，IB期11例)，Ⅱ期15例，Ⅲ期15例，其中III期患者包括只侵及盆腔淋巴結(jié)者11例、只侵及陰道者1例、侵及漿膜或輸卵管者3例。

1．2臨床特點(1)臨床表現(xiàn)：正常內(nèi)膜患者中月經(jīng)異常20例(66.7%)，不孕10例(33.3%)；子宮內(nèi)膜增生癥患者中月經(jīng)紊亂者34例(61.3%)，經(jīng)期延長、經(jīng)量增多者19例(34.5%)，絕經(jīng)后陰道流血2例(3.6%)；子宮內(nèi)膜癌患者中月經(jīng)紊亂25例 (45.4%)，絕經(jīng)后陰道流血29例(52.7%)，陰道排液1例(1.8%)。(2)年齡：正常子宮內(nèi)膜患者為24歲-54歲，平均年齡為38歲；子宮內(nèi)膜增生癥患者年齡為38歲-62歲，平均年齡為45歲；子宮內(nèi)膜癌患者年齡為32-73歲，平均年齡為50歲；(3)生育史：正常內(nèi)膜患者未孕10例，生育1胎6例，生育二胎及以上14例；子宮內(nèi)膜增生癥患者中3例未孕，僅生育1胎20例，生育二胎或以上32例；內(nèi)膜癌患者中未孕5例，生育1胎4例，生育二胎或以上46例；(4)高血壓、糖尿病病史：正常子宮內(nèi)膜患者合并高血壓病2例，糖尿病1例，無合并癥27例；子宮內(nèi)膜增生癥患者合并高血壓病3例，糖尿病2例，同時合并高血壓病和糖尿病2例，無合并癥48例；內(nèi)膜癌患者同時合并高血壓、糖尿病有4例，單純合并高血壓者為9例、合并糖尿病者7例，無糖尿病或高血壓病合并癥35例。

1.3方法所有病例均早晨空腹抽取外周靜脈血2 ml,靜置待血液凝固后，1-2 h內(nèi)3 500 r/min離心10 min，分離血清后于-70℃冰箱保存，所有標(biāo)本同批測定完畢。檢測過程按操作說明書進行。

1.4結(jié)果判斷30分鐘內(nèi)在波長450 nm的酶標(biāo)儀上讀取個孔的OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值描標(biāo)準(zhǔn)曲線，用樣本OD值直接代入標(biāo)準(zhǔn)曲線得出樣本濃度。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法采用Prisom4統(tǒng)計軟件及簡明統(tǒng)計分析軟件10.32分析統(tǒng)計，計數(shù)資料采用χ2檢驗，計量資料采用t檢驗，非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用秩和檢驗，P<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。ROC曲線采用SPSS11.5軟件分析處理。

2 結(jié)果

2.1血清TuM2-PK值相對于良惡性的診斷界點(cut-offpoint)

ROC曲線下面積0.844，標(biāo)準(zhǔn)誤0.035，漸進顯著性水平0.000，P<0.01,漸進95%置信區(qū)間(0.775,0.913)，cut-off值7.175，靈敏度74.5%，特異度80%。見圖1。

圖1 血清Tu M2-PK的ROC曲線

2.2血清TuM2-PK在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜癌患者中比較

通過統(tǒng)計學(xué)分析，血清Tu M2-PK在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥、子宮內(nèi)膜癌患者中水平比較具有顯著性差異(P<0.01)(見表1)。四組間兩兩比較，正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥患者中的血清Tu M2-PK水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但與子宮內(nèi)膜癌患者比較有顯著性差異(P<0.01)(見表2)。

表1 各組患者血清Tu M2-PK值比較

Hc=47.176,P<0.01

表2 各組患者血清Tu M2-PK值兩兩比較

2.3子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前術(shù)后血清TuM2-PK比較

子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前與術(shù)后第二天血清Tu M2-PK比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表3)。

表3 子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前術(shù)后血清Tu M2-PK值比較

2.4血清TuM2-PK水平與子宮內(nèi)膜癌患者臨床病理特征的關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK水平與臨床分期、病理分級密切相關(guān)(P<0.01)，即臨床分期Ⅲ與分期Ⅰ-Ⅱ有顯著性差異(P<0.01)，病理分級G3與G1-G2差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Tu M2-PK與患者年齡、術(shù)前血清CA125水平、肌層浸潤深度、腹水細胞學(xué)無相關(guān)性(P>0.05)。見表4，5。

表4 子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK與病理特征的關(guān)系

表5 子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK與臨床指標(biāo)的關(guān)系

3 討論

丙酮酸激酶(PK)是糖酵解途徑的一個關(guān)鍵酶，它有四種同工酶(L-PK、R-PK、M1-PK、M2-PK)，通常以酶的活性四聚體形式存在,分布表達具有組織特異性。M2-PK主要分布于腸、肺、胚胎以及增殖或未分化的組織中。在腫瘤細胞中，四聚體的M2-PK亞型裂解，主要為二聚體形式，而二聚體形式的M2-PK對磷酸烯醇式丙酮的親和力較弱，在腫瘤細胞中這些二聚體形式M2-PK的濃度明顯升高，呈現(xiàn)出過度表達狀態(tài)，導(dǎo)致大量糖酵解磷酸代謝物的積聚，以保證腫瘤細胞內(nèi)能量的供給[2]。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清TuM2-PK水平子宮內(nèi)膜癌患者與正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥患者差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜增生癥患者之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，而且Tu M2-PK蛋白表達水平與血清Tu M2-PK濃度水平相關(guān)系數(shù)為0.551，有中等正相關(guān)關(guān)系。這提示Tu M2-PK可能在診斷子宮內(nèi)膜癌有重要的臨床意義。Schneider 等[3]的研究亦證實，肺癌患者癌組織及血漿中的M2-PK表達水平均顯著高于正常人；周娟等[4]認為Tu M2-PK在胰腺癌診斷方面檢測價值與CA199 相仿；KoigasJ等[5]認為Tu M2-PK對腎細胞癌診斷有意義。本研究結(jié)果表明：Tu M2-PK與子宮內(nèi)膜癌的手術(shù)分期及病理分級有密切相關(guān)性，即手術(shù)分期Ⅲ期與Ⅰ-Ⅱ期、病理分級G3與G1-G2差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

本研究中，子宮內(nèi)膜癌Ⅲ期患者主要表現(xiàn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這間接提示Tu M2-PK與淋巴結(jié)是否有轉(zhuǎn)移有關(guān)?；颊甙l(fā)生子宮內(nèi)膜癌時，促進糖異生的關(guān)鍵酶活性可能下降，而促進糖酵解的PK等酶的表達及活性則升高，使ATP失去對糖酵解的調(diào)節(jié)作用，從而使糖酵解易于進行，有利于腫瘤組織的生長，隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤逐漸增大，腫瘤細胞增多，合成的Tu M2-PK也隨逐漸增多，出現(xiàn)了Tu M2-PK的表達增加。當(dāng)子宮內(nèi)膜癌的腫瘤細胞分化程度越低，其增殖越快，腫瘤細胞代謝越旺盛，Tu M2-PK陽性表達率越高，這反映了腫瘤細胞的生物學(xué)代謝特征[6]。因此檢測子宮內(nèi)膜癌患者血清Tu M2-PK水平和組織中Tu M2-PK蛋白對其診斷和判斷預(yù)后可能具有非常重要的臨床意義。腫瘤組織學(xué)類型、分化程度、肌層浸潤深度、FIGO分期是公認影響早期子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的獨立因素[7]，術(shù)后一般應(yīng)行輔助治療，這說明Tu M2-PK檢測對患者病情的評估及治療可能有較大的臨床作用。

血清CA125水平是子宮內(nèi)膜癌最有用的腫瘤標(biāo)志物[8]。Nobuhiro[9]等認為在子宮內(nèi)膜癌中，CA125隨手術(shù)分期增加而上升，郭夢凡等[10]研究顯示CA125蛋白表達隨著組織分級的增加而升高，但本研究中，Tu M2-PK與CA125無相關(guān)性?？赡芤驗闃颖纠龜?shù)少，或者統(tǒng)計學(xué)方法比較單一，未能顯現(xiàn)兩者之間的關(guān)系，或者還需要大樣本研究確定兩者是否有相關(guān)性。

本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌患者術(shù)前與術(shù)后第二天血清Tu M2-PK值無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，這可能與術(shù)后血細胞反應(yīng)性的增加有關(guān)，淋巴細胞和粒細胞釋放Tu M2-PK所導(dǎo)致的[11，12]。Wechsel 等[13]報道發(fā)現(xiàn)外科手術(shù)后,大部分手術(shù)成功的腎細胞癌患者的M2-PK水平在六周內(nèi)恢復(fù)正常，這啟示我們，最好不要在術(shù)后幾天內(nèi)復(fù)查Tu M2-PK值，以免錯誤判斷預(yù)后，造成過度治療。

本研究中，血清Tu M2-PK的cut-off值為7.175 ng/ml，低于一般診斷值15 U/ml，可能與實驗方法不同有關(guān)，本研究采用競爭ELISA方法,標(biāo)本為血清，不同于夾心ELISA方法和標(biāo)本為血漿，至于子宮內(nèi)膜癌的Tu M2-PK陽性界值是否為7.18 ng/ml,應(yīng)該還需要大樣本的研究。

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PreliminaryinvestigationoftheclinicalsignificanceserumleveloftumorM2-pyruvatekinaseinendometrialcarcinoma

ZHONGQian,NIUGang,LIUFang,etal.

(JiangmenCenterHospital,Jiangmen529000,China)

ObjectiveThe expression of serum level of tumor M 2 -pyruvate kinase(Tu M2-PK) in patients of normal endometrial,endometrial hyperplasia (simple hyperplasia,complex hyperplasia,atypical hyperplasia) and endometrial carcinoma will be tested in this paper.Thereby we can analyze the effect of development of Tu M2-PK on endometrial carcinoma and discuss its clinical significance in endometrial cancer.MethodsWe selected 140 patients who accepted the hysterectomy or endometrial biopsy from August 2009 to August 2010 in the Gynecology at Jiangmen Central Hospital.In our sample,there are 30 cases of normal endometrial tissues,55 endometrial hyperplasia (15 simple hyperplasia,20 complex hyperplasia,20 atypical hyperplasia) and 55 endometrial carcinoma.the patients’ serum level of Tu M2-PK was examined by ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay).Results①There was no significant difference between the patients’ serum level of Tu M2-PK in normal endometrial group and endometrial hyperplasia group (P>0.05),except endometrial carcinoma group (P<0.01).②The serum level of Tu M2-PK were positive related to clinical FIGO staging and histological grade of endometrial carcinoma.That is the differences between FIGO stage III and stage I-II,histological grade 3 and grade 1-2 were significant (P<0.05;P<0.01).But Tu M2-PK had no relationship with the patients’ age,the serum level of CA125 before operation,the depth of invasion and peritoneal cytology(P>0.05).3The diagnostic cutoff value for Tu M2-PK was 7.175.The expression of Tu M2-PK in tissues and the serum level of Tu M2-PK had a moderate positive correlation that the correlation coefficient is 0.551.ConclusionThe serum level of Tu M2-PK have close relationship with clinical FIGO staging and histological grade of endometrial carcinoma.Tu M2-PK may be a useful biomarker to detect the early carcinogenesis of endometrial carcinoma,and play a certain role in the diagnosis and treatment of endometrial carcinoma.

endometrial carcinoma;tumor M2-pyruvate kinase;serum

R737.33

A

2016-03-03)

1007-4287(2017)10-1701-04