丁 黎，劉瑞娟

（1.中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室 南京 210009；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450003）

中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的思與行＊

丁 黎1＊＊，劉瑞娟2

（1.中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室 南京 210009；2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部 鄭州 450003）

隨著當(dāng)今中藥現(xiàn)代化的發(fā)展需求，中藥研究不僅在體外尋找其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，而且應(yīng)深入探討其在體內(nèi)的處置過程，定量評(píng)價(jià)中藥各化學(xué)成分間的相互作用。因此，中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究顯得尤為迫切。中藥及其復(fù)方的藥代動(dòng)力學(xué)研究，對(duì)系統(tǒng)地闡明和揭示中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，闡明其配伍或組方的原理，科學(xué)地指導(dǎo)臨床合理用藥，促進(jìn)中醫(yī)藥的現(xiàn)代化具有重要的意義。本文結(jié)合研究實(shí)例，對(duì)中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的目的和意義，特殊性和難點(diǎn)及常用研究方法等科學(xué)問題進(jìn)行分析與總結(jié)，希望對(duì)學(xué)者們有所幫助，共同推動(dòng)中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的發(fā)展。

中藥 藥代動(dòng)力學(xué) 物質(zhì)基礎(chǔ) 相互作用 中藥現(xiàn)代化

中藥（Traditional Chinese Medicine,TCM）及其復(fù)方是我國(guó)歷代醫(yī)家經(jīng)過長(zhǎng)期實(shí)踐積累的寶貴財(cái)富，其作為一種重要的藥用資源用于疾病的預(yù)防和治療已有幾千年的歷史。近來也吸引西方國(guó)家對(duì)其進(jìn)行越來越多的研究和應(yīng)用[1,2]。但是，中藥中效應(yīng)成分從體外如何吸收進(jìn)入體內(nèi)，效應(yīng)成分如何在體內(nèi)分布、代謝和排泄，對(duì)于這些動(dòng)力學(xué)過程人們卻知之甚少，中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究正是闡明這些問題的根本途徑[3]。近年來，中藥效應(yīng)成分藥代動(dòng)力學(xué)得到極大關(guān)注。通過對(duì)中藥藥代動(dòng)力學(xué)的研究，可以更科學(xué)更系統(tǒng)地闡明中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為探索中藥組方原理提供科學(xué)依據(jù)；為設(shè)計(jì)及優(yōu)選中藥給藥方案提供基礎(chǔ)和依據(jù)；為研究古方、篩選新方、開發(fā)新藥提供科學(xué)依據(jù)和方法；推動(dòng)中藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化[4]。

1 中藥藥代動(dòng)力學(xué)的定義

中藥藥代動(dòng)力學(xué)是借助于動(dòng)力學(xué)原理，研究中藥單方制劑、復(fù)方制劑、中藥制品、中藥提取物中的效應(yīng)成分、毒性成分、及代表性成分等在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄（Absorption，Distribution，Metabolism and Excretion，ADME）的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律及其體內(nèi)時(shí)-量或時(shí)-效關(guān)系，并用數(shù)學(xué)模型提供藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的一門學(xué)科[4]。它是在西藥藥代動(dòng)力學(xué)研究基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一個(gè)研究領(lǐng)域，是中藥藥理學(xué)、體內(nèi)藥物分析與藥物代謝動(dòng)力學(xué)相互結(jié)合、相互滲透而形成的。中藥成分復(fù)雜，成分微量，未知和干擾因素較多，其藥代動(dòng)力學(xué)的研究較通常的化學(xué)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)研究更為復(fù)雜，面臨諸多困難、問題和挑戰(zhàn)[5-7]。

2 中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的目的和意義

中藥用于疾病的預(yù)防和治療已有幾千年的歷史，有效性已得到驗(yàn)證。那么，中藥是哪些效應(yīng)成分進(jìn)入體內(nèi)發(fā)揮作用？這些成分如何從體外吸收進(jìn)入體內(nèi)？如何在體內(nèi)分布、代謝和排泄？這些都是目前亟待闡明的關(guān)鍵科學(xué)問題。為闡明這些科學(xué)問題，中藥的藥代動(dòng)力學(xué)研究應(yīng)運(yùn)而生。中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的目的和意義主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面。

2.1 闡明和揭示中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制

中藥能夠產(chǎn)生藥理作用，產(chǎn)生療效，其作用無論來自本身存在的化學(xué)物質(zhì)，組方配伍后產(chǎn)生出新的物質(zhì)，通過機(jī)體作用產(chǎn)生出代謝產(chǎn)物，還是調(diào)動(dòng)在體的化學(xué)物質(zhì)或機(jī)體的反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生藥理作用，必定存在一定的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制。通過研究中藥體內(nèi)過程的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，可以闡明中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，為中藥傳統(tǒng)理論提供科學(xué)的闡釋。此處以藥動(dòng)-藥效相結(jié)合的方法研究雙黃連口服液抗菌作用藥效物質(zhì)基礎(chǔ)為例，來介紹這一問題的研究思路，如圖1。

圖1 雙黃連口服液抗菌作用藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究思路

將雙黃連口服液濃縮后灌胃給予大鼠，在無菌條件下采集不同時(shí)間點(diǎn)的血清。一部分血清用來做抑菌活性試驗(yàn)，評(píng)價(jià)其體內(nèi)藥效動(dòng)力學(xué)過程，抗菌效應(yīng)成分在體內(nèi)的濃度隨時(shí)間變化，其濃度高，在培養(yǎng)皿上的抑菌斑就大，抑菌斑直徑的對(duì)數(shù)值與藥物濃度呈線性關(guān)系，抑菌斑直徑對(duì)數(shù)值隨時(shí)間變化曲線就相當(dāng)于藥效-時(shí)間曲線。另一部分血清用來研究雙黃連口服液指紋圖譜中的指紋特征成分的體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，即檢測(cè)入血成分，各成分指紋峰的峰面積大小代表其血藥濃度高低，峰面積隨時(shí)間的變化作為成分的血藥濃度-時(shí)間曲線。將各成分的血藥濃度-時(shí)間曲線和藥效-時(shí)間曲線作對(duì)比，選擇達(dá)峰時(shí)間和半衰期比較接近藥效-時(shí)間曲線的成分，比如圖2中E成分的血藥濃度-時(shí)間曲線和藥效-時(shí)間曲線很接近，就可將E分離出來，驗(yàn)證是否有藥效，這樣可以提高篩選有效成分的速度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果示意圖見圖2。

圖2 雙黃連口服液指紋特征成分的藥動(dòng)-藥效研究結(jié)果示意圖

2.2 為中藥復(fù)方組方原理提供科學(xué)依據(jù)

中藥復(fù)方較為復(fù)雜，有關(guān)中醫(yī)藥的理論較多，如：整體觀、辨證論治、臟腑學(xué)說、君臣佐使等等，這些屬于中醫(yī)藥獨(dú)特的理論體系和精髓。近年來，有研究者提出“藥對(duì)”學(xué)說，藥對(duì)是中醫(yī)臨床常用的相對(duì)固定的兩藥味的配伍組合，是中藥配伍應(yīng)用中的最小單元，“藥對(duì)”的配伍機(jī)制，多從藥物相互作用的角度來解釋。藥物相互作用的發(fā)生機(jī)制有多種[8]，比如代謝類型、競(jìng)爭(zhēng)靶點(diǎn)類型、競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合類型等，其中代謝類型的藥物相互作用最為常見，人體主要的I相和II相代謝酶[9]如圖3所示。T.Osana等[10]研究了10名健康志愿者分別在連續(xù)服用200 mg伊曲康唑或安慰劑，4天后口服0.5 mg溴替唑侖藥物，伊曲康唑?qū)蝿┝靠诜逄孢騺鏊幮W(xué)藥動(dòng)學(xué)的影響，結(jié)果見圖4，伊曲康唑是CYP3A4的抑制劑，溴替唑侖的主要代謝酶是CYP3A4，因此當(dāng)伊曲康唑和溴替唑侖合用時(shí)，伊曲康唑使得溴替唑侖的代謝酶被抑制，溴替唑侖的血藥濃度下降緩慢，半衰期延長(zhǎng)，暴露量大大增加。

藥物間相互作用原理也可闡釋中藥復(fù)方配伍機(jī)制。以甘草配伍為例，甘草是最常用的中藥材之一，是很多中藥復(fù)方中具有代表性的“使藥”，發(fā)揮藥物-藥物相互作用。甘草在治療疾病中與其它中藥配伍主要發(fā)揮以下三種作用：（1）增強(qiáng)其他中藥的藥效；（2）降低其他中藥的毒性；（3）對(duì)中藥復(fù)方進(jìn)行調(diào)味矯味。它的作用原理見圖5[11,12]，甘草的藥效成分包括甘草酸、甘草次酸、光甘草定、甘草素等，它們是CYP450酶的誘導(dǎo)劑或抑制劑，假設(shè)某一中藥的毒性成分是被CYP2C19代謝的，這一毒性成分若和甘草合用，甘草中的甘草酸等多個(gè)成分可以誘導(dǎo)它的代謝酶CYP2C19，使其在體內(nèi)快速消除，從而起到減毒的作用。假設(shè)某一藥效成分是被CYP3A4代謝的，這一成分和甘草合用，甘草中的甘草酸等多個(gè)成分可以抑制它的代謝酶CYP3A4，使其體內(nèi)代謝消除減慢，體內(nèi)的藥物濃度增高，發(fā)揮藥效藥效時(shí)間延長(zhǎng)。因此，中藥的“君臣佐使”正是利用了中藥中各成分間相互作用的原理而發(fā)揮作用的。古人云：“藥有個(gè)性之特長(zhǎng)，方有合群之妙用”，所謂合群之妙用，正是合理利用藥物的相互作用原理來增效減毒，使藥物更好地發(fā)揮藥效，降低毒性。

圖3 人體內(nèi)主要的代謝酶類型及其含量比例示意圖[9]

圖4 10名健康志愿者分別在連續(xù)服用200 mg伊曲康唑（●）或安慰劑（○）4天后口服0.5 mg溴替唑侖，其血漿中溴替唑侖藥物濃度-時(shí)間曲線圖[10]

從整體觀點(diǎn)出發(fā)研究中藥的藥代動(dòng)力學(xué)特征，可以為組方配伍原理提供科學(xué)依據(jù)。本課題組利用大鼠研究了雙花百合片（Shuanghua Baihe Tablets，SBT）中小檗堿及其它成分與苦地丁中紫堇靈之間的藥物-藥物相互作用[13]，本實(shí)驗(yàn)將大鼠隨機(jī)分成四組，每組6只，分別灌胃給藥雙花百合片（SBT，含有紫堇靈、小檗堿和其它成分）、紫堇靈和小檗堿純品的混合物（與SBT中含有同等劑量的紫堇靈和小檗堿）、紫堇靈純品（與SBT中含有同等劑量的紫堇靈），靜脈注射紫堇靈純品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6，紫堇靈純品在大鼠體內(nèi)生物利用度較低，消除速度快；與灌胃給予紫堇靈純品相比，灌胃給予含有同等劑量紫堇靈的SBT時(shí)，紫堇靈的末端消除半衰期t1/2約延長(zhǎng)3倍，達(dá)峰濃度Cmax和血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC0-12分別增加了46.5%和34.2%。結(jié)果表明大鼠灌胃給予SBT時(shí)，紫堇靈的生物利用度增加和消除半衰期延長(zhǎng)。與紫堇靈組相比，紫堇靈和小檗堿組中，紫堇靈的Cmax和AUC0-12分別增加了11.1倍和5.0倍。結(jié)果表明小檗堿可顯著增加紫堇靈在大鼠體內(nèi)血漿暴露量（Cmax和AUC0-12），小檗堿與紫堇靈之間存在藥物-藥物相互作用，這也警示紫堇靈與小檗堿合用時(shí)存在潛在毒性的風(fēng)險(xiǎn)。有趣的是，SBT組中紫堇靈暴露量的增加程度要小于紫堇靈合用小檗堿組中紫堇靈暴露量的增加程度。這表明小檗堿可以顯著改變紫堇靈在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，同時(shí)SBT中其他成分對(duì)紫堇靈藥動(dòng)學(xué)行為的影響也是不可忽略的，這也體現(xiàn)了中藥復(fù)方中各組分之間增效減毒配伍機(jī)制的妙處。

2.3 為設(shè)計(jì)及優(yōu)選中藥給藥方案提供基礎(chǔ)和依據(jù)

長(zhǎng)期以來，中藥多以經(jīng)驗(yàn)給藥或辨證用藥為主，多數(shù)情況缺乏藥代動(dòng)力學(xué)研究資料的支持。通過中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究可明確中藥中有效成分在體內(nèi)吸收、分布、代謝、排泄等過程的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，獲得其藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，從而可以科學(xué)地?cái)M定給藥方式、給藥劑量、給藥間隔及確定療程，從而可提高其臨床整體治療水平。

圖5 甘草活性成分調(diào)節(jié)的主要CYP450酶亞型示意圖

圖6 血漿中紫堇靈的平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖[13]

以黃楊寧（Cyclovirobuxine D）片為例，它是黃楊科植物小葉黃楊所含的一種生物堿制劑，已上市多年。q其說明書中的用藥方式為口服，1次2 mg，1日3次。該藥物治療心絞痛臨床效果好，但是按照說明書連續(xù)使用1周左右后會(huì)出現(xiàn)四肢麻木，頭暈等副作用。部分醫(yī)生將黃楊寧片的服藥方式改成：連續(xù)用藥5天，停藥2天，然后再連續(xù)用藥5天。這種服藥方式不但保證了黃楊寧片的療效，而且基本避免了其副作用。根據(jù)此種現(xiàn)象，研究人員進(jìn)行了如下研究，給6例健康志愿者單次口服2 mg黃楊寧片，繪制血漿平均藥-時(shí)曲線，半衰期為33.8 h；再按照黃楊寧片的說明書連續(xù)給藥5天，第6天采血，繪制平均藥-時(shí)曲線，結(jié)果[14]顯示（圖7），連續(xù)給藥5天后，黃楊寧在人體內(nèi)蓄積，其暴露量與服藥的第1天相比增加了5-7倍。結(jié)合黃楊寧的這一藥動(dòng)學(xué)特征，再考慮到按照黃楊寧片說明書連續(xù)用藥1周左右后會(huì)出現(xiàn)較多副作用，故將服藥方式改為“連續(xù)用藥5天，停藥2天，然后再連續(xù)用藥5天”就可以避免副作用發(fā)生。按照藥品說明書的服藥方法服藥5天后病人體內(nèi)的藥物濃度蓄積達(dá)到較高的穩(wěn)態(tài)血藥濃度，易產(chǎn)生毒副作用。藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)結(jié)果說明需降低黃楊寧片的每日服藥劑量，降低其連續(xù)服藥后的穩(wěn)態(tài)血藥濃度，以減小其毒副作用。通過黃楊寧的藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)，得到其在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征，選擇合理的臨床給藥方式與給藥劑量，可以避免其穩(wěn)態(tài)血藥濃度蓄積過高而產(chǎn)生毒副作用。

圖7 6例健康志愿者按照說明書單次、多次口服黃楊寧片后的平均黃楊寧血藥濃度-時(shí)間曲線[14]

2.4 為選擇合理給藥途徑及合適劑型提供依據(jù)

中藥及其提取物的制劑研發(fā)需要制定合理的給藥途徑和藥物劑型，其需要結(jié)合體內(nèi)藥效和體內(nèi)藥代研究來確定。甘利欣，是甘草酸二銨的注射劑，臨床用于慢性病毒性肝炎的治療效果非常明顯，市場(chǎng)銷量很好。甘利欣做成注射劑非常合適，若做成口服制劑，則吸收較差，該藥物的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示其絕對(duì)生物利用率僅有3%左右，因此口服給藥不是甘利欣（甘草酸二銨）合適的給藥途徑。因此，只有通過體內(nèi)藥代研究，才能提供最直接的給藥途徑或劑型選擇的依據(jù)，才能真正達(dá)到中藥制劑的質(zhì)量可控、高效、低毒的目的。

2.5 推動(dòng)中藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化

中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究不僅可以揭示藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、方劑組方原理和配伍規(guī)律；還為初步化學(xué)成分篩選、劑型設(shè)計(jì)、質(zhì)量評(píng)估和給藥方案制訂提供依據(jù)，故能夠提高藥物的臨床控制程度，更好地指導(dǎo)臨床用藥，推動(dòng)中藥的現(xiàn)代化和國(guó)際化[15]。

3 中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的特殊性和難點(diǎn)

由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性、中藥藥效的多效性和中醫(yī)臨床應(yīng)用的辨證施治及復(fù)方配伍的中醫(yī)特色等特點(diǎn)，使得中藥藥動(dòng)學(xué)研究有別于化學(xué)藥藥動(dòng)學(xué)研究，有其特殊性和復(fù)雜性[16]。

3.1 中藥成分及其體內(nèi)過程的復(fù)雜性

中藥成分的復(fù)雜性，表現(xiàn)在單味中藥含有多種成分，復(fù)方成分更為復(fù)雜，且配伍后的各成分可能發(fā)生變化。中藥是一個(gè)復(fù)雜的體系，不論是單味中藥還是中藥復(fù)方，均為含有大量化學(xué)成分，而且有些成分含量極微。這些客觀存在的問題均構(gòu)成其藥效學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)研究的難點(diǎn)，其原因可能是發(fā)揮藥效是多種成分相互作用產(chǎn)生的綜合結(jié)果，難以系統(tǒng)、全面地分析中藥藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.2 研究方法的難度

多數(shù)中藥發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不確定，使藥代動(dòng)力學(xué)研究的目標(biāo)化學(xué)成分選擇困難；目標(biāo)化學(xué)成分在復(fù)方中的含量低，其血、尿和組織中的濃度無法檢測(cè)；多種成分同時(shí)吸收入血，其體內(nèi)代謝物均可能干擾測(cè)定，這增加了生物樣品測(cè)定的難度；因中藥材的特殊性，中藥制劑中所含成分的含量往往不確定，只規(guī)定含量不低于某個(gè)值，而藥動(dòng)學(xué)研究是需要確定劑量的，劑量不同藥動(dòng)學(xué)特征有可能不同，這也給藥代動(dòng)力學(xué)研究增加了難度。中藥藥代動(dòng)力學(xué)與化學(xué)藥藥代動(dòng)力學(xué)的研究方法比較見表1。

3.3 中藥的整體觀難以認(rèn)識(shí)

中藥的藥效往往是多種化學(xué)成分相互作用所產(chǎn)生的綜合效果，其復(fù)雜性導(dǎo)致藥動(dòng)學(xué)測(cè)定指標(biāo)選擇困難，到底選擇哪些指標(biāo)能代表該中藥的藥效往往是一個(gè)難以定論的問題。中藥藥動(dòng)學(xué)研究必須考慮中藥配伍的真正內(nèi)涵，辨證論治，君臣佐使等原則是中醫(yī)用藥的精髓，因而整體觀思想應(yīng)該在中藥藥動(dòng)學(xué)研究中體現(xiàn)。因此，如何從體整體觀研究中藥藥代動(dòng)力學(xué)是一挑戰(zhàn)。

表1 中藥藥代動(dòng)力學(xué)與化藥藥代動(dòng)力學(xué)的研究方法比較

4 中藥人體藥代動(dòng)力學(xué)研究方法

中藥藥代動(dòng)力學(xué)的研究方法包括藥物濃度法、生物效應(yīng)法以及中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究的新理論、新方法，如整體藥動(dòng)學(xué)。最常用的是藥物濃度法。

4.1 藥物濃度法

該法通過測(cè)定給藥后不同時(shí)間的血藥濃度，得到血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，然后通過房室分析或非房室分析方法學(xué)或生理藥動(dòng)學(xué)模型，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，從而闡明效應(yīng)成分在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。此法適用于效應(yīng)成分明確的中藥或中藥制劑的藥動(dòng)學(xué)研究，也是評(píng)價(jià)藥代動(dòng)力學(xué)特征最常用最準(zhǔn)確的一種方法。該法對(duì)于新藥開發(fā)、中藥作用機(jī)制的闡明及臨床合理用藥具有重要的意義。有學(xué)者[15]認(rèn)為被選用于藥動(dòng)學(xué)研究的指標(biāo)性成分應(yīng)該具備以下特征：能代表復(fù)方的主要藥效成分；是藥物的質(zhì)控指標(biāo)；在靶器官內(nèi)有較高的分布；其體內(nèi)濃度與復(fù)方藥效在時(shí)間上具有密切聯(lián)系；能被吸收入血；具有可檢測(cè)性等。

4.2 相關(guān)分析技術(shù)

主要包括高靈敏度、高通量的生物樣品分析技術(shù)和中藥多組份同時(shí)定量分析技術(shù)。中藥制劑中成分多種多樣，且結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，含量一般都很低。進(jìn)人體內(nèi)后，原藥及代謝物在血漿、膽汁、尿液等體液中的含量往往只有ng或pg級(jí)水平。一般的方法如高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）等難以檢測(cè)，且前處理操作繁瑣，從基質(zhì)中分離的難度也很大。液相色譜與質(zhì)譜串聯(lián)的技術(shù)(LC-MS)將色譜技術(shù)的高分離能力與質(zhì)譜技術(shù)的高靈敏，及結(jié)構(gòu)解析能力成功結(jié)合，成為應(yīng)用廣泛、潛能巨大的分析技術(shù)，為中藥藥動(dòng)學(xué)的快速測(cè)定分析提供了一個(gè)重要技術(shù)手段。中藥人體藥代動(dòng)力學(xué)的試驗(yàn)流程一般為：文獻(xiàn)調(diào)研、預(yù)試驗(yàn)→選擇具有代表性的有效成分→臨床試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)→預(yù)試驗(yàn)確定分析成分、采血點(diǎn)和線性范圍→臨床試驗(yàn)方案修訂→分析方法方案設(shè)計(jì)→方法學(xué)確證→正式臨床試驗(yàn)→分析測(cè)定生物樣品→數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析及藥動(dòng)學(xué)評(píng)價(jià)→試驗(yàn)報(bào)告。

4.3 臨床藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)需考慮的問題

采樣點(diǎn)的確定對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果具有重大的影響，在進(jìn)行中藥復(fù)方制劑的藥動(dòng)學(xué)臨床試驗(yàn)時(shí)，因中藥成分復(fù)雜，采樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)要兼顧多個(gè)有效成分，必要時(shí)需進(jìn)行多個(gè)臨床試驗(yàn)。具體參照臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則中的規(guī)定開展試驗(yàn)。

圖8 雙花百合片的藥味組成及君臣佐使關(guān)系

5 典型實(shí)例介紹：雙花百合片中多組分的人體藥代動(dòng)力學(xué)研究[17]

5.1 藥物及研究背景

雙花百合片是揚(yáng)子江藥業(yè)的上市品種，由黃連、苦地丁、板藍(lán)根、紫草、金銀花、淡竹葉、蛇膽、地黃、百合、細(xì)辛10味中藥組成，其君臣佐使關(guān)系見圖8。雙花百合片于2012年獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局的生產(chǎn)批件（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20123033）。本品為薄膜衣異型片，除去薄膜衣后顯棕黑色；氣清香，味苦。主要功能為清熱瀉火，解毒涼血。用于輕型復(fù)發(fā)性口腔潰瘍心脾積熱證，癥見口腔粘膜反復(fù)潰瘍，灼熱疼痛，口渴，口臭，舌紅苔黃等。含量測(cè)定規(guī)定小檗堿的含量不得少于18 mg/片。

5.2 復(fù)方中成藥藥動(dòng)學(xué)研究檢測(cè)成分的確定

根據(jù)君臣佐使的關(guān)系，查找文獻(xiàn)進(jìn)行調(diào)研。首選中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中檢測(cè)和鑒別的化學(xué)成分，當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒有明確定量成分和鑒別成分時(shí)，則按照以下順序確定藥動(dòng)學(xué)檢測(cè)成分：第一步，按中藥配伍的君、臣、佐、使的先后順序，從文獻(xiàn)中分別檢索與中藥說明書中藥效一致的單味藥材中的效應(yīng)成分；第二步，對(duì)復(fù)方中成藥進(jìn)行含量測(cè)定，確定“第一步”中檢索到的各化學(xué)成分是否在制劑中可以檢測(cè)到，含量如何；第三步，用大鼠或人進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，確定制劑中可以檢測(cè)到的成分哪些是可以吸收入血的；最后將吸收入血成分確定為藥動(dòng)學(xué)研究對(duì)象。

圖9 雙花百合片提取流程

按照上述方法檢索雙花百合片的化學(xué)成分，主要為生物堿類、醌類、有機(jī)酸和其他類成分。其中君藥黃連主要是小檗堿成分，臣藥苦地丁主要成分為紫堇靈和乙酰紫堇靈，臣藥紫草主要成分為紫草素和乙酰紫草素，佐藥金銀花主要成分是綠原酸和木犀草素，佐藥蛇膽主要成分為牛黃酸。

5.2.1 雙花百合片中主要化學(xué)成分的定性鑒別與結(jié)構(gòu)解析

對(duì)雙花百合片進(jìn)行提取，流程見圖9，利用LCTOF/MS分析技術(shù)在雙花百合片中尋找鑒定上述化學(xué)成分，并進(jìn)行定性分析和結(jié)構(gòu)解析。

ESI正離子模式下，鑒別出17個(gè)化合物，兩個(gè)未知化合物，這些化合物多為生物堿類成分，源于君藥黃連和臣藥苦地丁兩味藥材；ESI負(fù)離子模式下，鑒別出16個(gè)化合物，分別來自于佐藥金銀花和蛇膽。將雙花百合片灌胃給予大鼠后，觀察大鼠血漿和尿液樣品中是否能找到上述鑒定的33個(gè)化合物，再結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研和LC-MS/MS分析結(jié)果，選擇了11個(gè)與復(fù)方藥理作用相關(guān)的入血活性成分作為雙花百合片復(fù)方的指標(biāo)成分，這11個(gè)指標(biāo)成分分別為：小檗堿、表小檗堿、小檗紅堿、木蘭花堿、黃連堿、巴馬汀、藥根堿、紫堇靈、乙酰紫堇靈、綠原酸和牛磺膽酸，各指標(biāo)性成分的結(jié)構(gòu)式見圖10和圖11。

圖10 雙花百合片中生物堿類指標(biāo)性成分結(jié)構(gòu)式

5.2.2 雙花百合片中主要生物堿類化學(xué)成分的含量測(cè)定

測(cè)定雙花百合片中入血成分的含量，測(cè)得雙花百合片（批號(hào)：14032311，規(guī)格：0.6 g/片）每片中11個(gè)指標(biāo)性成分的各成分含量如下：小檗堿18.01堿量（合片（批號(hào)：、黃連堿5.11堿量（合片（批號(hào)、表小檗堿5.38堿量（合片（批號(hào)、藥根堿2.42±0.07 mg、木蘭花堿1.90±0.07 mg、小檗紅堿1.04±0.07 mg、巴馬汀4.92±0.07 mg、紫堇靈0.465±0.07 mg：學(xué)、乙酰紫堇靈0.061±0.07 mg：學(xué)、綠原酸0.91±0.07 mg和?；悄懰?.62±0.07 mg，其中小檗堿的含量為18.01 mg/片，符合規(guī)定。根據(jù)含量測(cè)定的結(jié)果換算給藥劑量。

5.3 生物樣本中雙花百合片主要藥效成分的分析方法的建立

藥動(dòng)學(xué)主要研究體內(nèi)血漿中藥物濃度變化規(guī)律和尿液中的排泄特征，因此分別建立雙花百合片主要活性成分血藥濃度測(cè)定方法和尿藥濃度測(cè)定方法，具體內(nèi)容詳見文獻(xiàn)報(bào)道[18-20]。

5.4 雙花百合片中多組分的人體藥代動(dòng)力學(xué)研究

5.4.1 遵守試驗(yàn)倫理

試驗(yàn)要嚴(yán)格遵守赫爾辛基宣言，臨床試驗(yàn)方案由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)；研究者在受試者開始試驗(yàn)前將試驗(yàn)的相關(guān)信息充分告知受試者，受試者于試驗(yàn)前均自愿簽署知情同意書。

5.4.2 設(shè)計(jì)臨床試驗(yàn)方案

按照?qǐng)D12方案給藥，試驗(yàn)藥物：雙花百合片（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20123033），規(guī)格：0.6 g/片，服藥方式：空腹口服，單次給藥一次4片，多次給藥一天3次每次4片，健康受試者：12名，男女各半。

5.4.3 采樣時(shí)間點(diǎn)

單次給藥時(shí)分別在給藥前（0 h）及給藥后0.25，0.5，0.75，1，1.33，1.67，2，2.5，3，4，5，6，8，12，24，48，72和96 h采集血液；多次給藥時(shí)，連續(xù)給藥5天，于第12，13，14天早晨給藥前采集靜脈血以測(cè)定谷濃度，第14天采血時(shí)間同單次給藥。

尿液收集時(shí)間分別在單次給藥前（0 h）及給藥0-2，2-4，4-8，8-12，12-24，24-36，36-48，48-60，60-72 h后分段采集。

5.4.4 試驗(yàn)結(jié)果

12名健康受試者單、多次給藥后9種生物堿的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖13和圖14；12名受試者單次（多次）口服雙花百合片后9種生物堿類成分的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表2，表3；男、女受試者分別單次口服雙花百合片后9種生物堿的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較見表4；12名健康受試者單、多次給藥后綠原酸（A）和?；悄懰幔˙）的平均血藥濃度-時(shí)間曲線比較圖見圖15；雙花百合片給藥后綠原酸在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表5；男、女受試者分別單次口服雙花百合片后綠原酸的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較見表6；受試者單次口服雙花百合片后尿液中九種生物堿和綠原酸的累積排泄量和累積排泄率見表7。

圖11 雙花百合片中有機(jī)酸類指標(biāo)性成分結(jié)構(gòu)式

圖12 雙花百合片臨床試驗(yàn)給藥方案

5.4.5 試驗(yàn)小結(jié)與討論

受試者單次給藥后，大多成分在體內(nèi)吸收快，血藥濃度達(dá)峰時(shí)間為1.0-2.7 h，t1/2相差較大，如綠原酸（1.3 h），小檗堿（48.5 h）。性別差異不會(huì)影響木蘭花堿、小檗紅堿、紫堇靈、乙酰紫堇靈和綠原酸在人體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程；女性受試者中小檗堿的lnAUC0-96、MRT0-96和CL/F、黃連堿的MRT0-96、表小檗堿的lnAUC0-96和MRT0-96、藥根堿的 lnAUC0-96和 lnCmax、巴馬汀的lnAUC0-96和MRT0-96，比男性受試者的相應(yīng)參數(shù)要高1-4倍。單次、多次兩種給藥方式下，雙花百合片中主要成分的Tmax無顯著性變化。多次給藥后表小檗堿、藥根堿、巴馬汀、紫堇靈和乙酰紫堇靈的暴露量增加到單次給藥的2倍以上，紫堇靈增加到了單次給藥的5-6倍；但這些成分在最后一次給藥的96 h后基本可從體內(nèi)消除。連續(xù)口服雙花百合片5天（每次4片，每天3次）后，小檗堿、黃連堿、木蘭花堿、小檗紅堿、紫堇靈、乙酰紫堇靈和綠原酸的血藥濃度均可達(dá)到穩(wěn)態(tài)，且穩(wěn)態(tài)血藥濃度波動(dòng)較小。

圖13 12名健康受試者單、多次給藥雙花百合片后小檗堿、黃連堿、表小檗堿、藥根堿、木蘭花堿和小檗紅堿的平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖

圖14 12名健康受試者單、多次給藥雙花百合片后巴馬汀、紫堇靈和乙酰紫堇靈的平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖

表2 受試者單次口服雙花百合片后9種生物堿類成分的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（n=12）

表3 受試者多次口服雙花百合片后9種生物堿類成分的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（n=12）

為提高藥物的安全性和有效性，藥動(dòng)學(xué)特征是新藥設(shè)計(jì)需考慮的關(guān)鍵特性之一。藥動(dòng)學(xué)研究可以為闡明和解釋臨床用藥之間發(fā)生的復(fù)雜的相互作用提供幫助。本研究中發(fā)現(xiàn)，紫堇靈的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（Cmax，AUC和t1/2）在單次和多次兩種給藥方式下有顯著性的差異。與單次給藥相比，多次給藥后紫堇靈的血漿暴露量顯著增加，t1/2明顯延長(zhǎng)，Tmax則無明顯變化。導(dǎo)致這些結(jié)果的原因可能與雙花百合片中十味中藥的配伍及相互作用有關(guān)。與化學(xué)藥物不同，中草藥成分復(fù)雜，其治療疾病產(chǎn)生臨床療效通常是多成分整體作用的結(jié)果[11]，這些共存的多個(gè)化合物可能導(dǎo)致藥代動(dòng)力學(xué)的相互作用[21]，這就是當(dāng)今研究較為熱門的中藥-藥物和中藥-中藥相互作用。細(xì)胞色素P450的誘導(dǎo)和抑制是產(chǎn)生草藥-藥物相互作用的最常見的機(jī)制。同樣，草藥中的化學(xué)成分可能是CYP450酶的底物、抑制劑或誘導(dǎo)劑，從而對(duì)合用藥物的藥代動(dòng)力學(xué)產(chǎn)生影響[22]。有研究證明紫堇靈主要由CYP2C9和CYP3A4代謝，但同時(shí)又是這兩種酶的抑制劑[23]。黃連（Rhizoma Coptidis）是雙花百合片復(fù)方中的君藥，小檗堿是黃連中含量最高的效應(yīng)成分。另有研究顯示，連續(xù)多次服用小檗堿可以抑制CYP2D6、CYP2C9和CYP3A4的活性，故與小檗堿合并用藥時(shí)，應(yīng)注意中藥-西藥發(fā)生相互作用[24]。因此，我們推測(cè)本試驗(yàn)多次給藥后紫堇靈的Cmax和AUC的增加，是由它本身被CYP2D6、CYP2C9和CYP3A4代謝的量較少導(dǎo)致的；同時(shí)這也導(dǎo)致了紫堇靈在體內(nèi)的半衰期的延長(zhǎng)和清除速率的減慢；這些結(jié)果剛好和我們對(duì)紫堇靈及其在雙花百合片中的潛在相互作用研究的結(jié)果[13]相一致。

表4 男、女受試者分別單次口服雙花百合片后9種生物堿的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)比較（n=6）

圖15 健康受試者單、多次給藥雙花百合片后綠原酸（A）和?；悄懰幔˙）的平均血藥濃度-時(shí)間曲線圖

此外，與文獻(xiàn)[25]報(bào)道的中國(guó)健康受試者單次口服單一成分小檗堿片劑后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)相比較，服用雙花百合片后小檗堿血藥濃度達(dá)峰時(shí)間Tmax（1.6 h）明顯短于單一成分片劑（小檗堿片）中小檗堿的血藥濃度達(dá)峰時(shí)間（9.8 h）；雙花百合片中小檗堿的暴露量（Cmax與AUC）與劑量之比是文獻(xiàn)中單一成分片劑（小檗堿片）的2-3倍，消除半衰期t1/2顯著延長(zhǎng)，從28.6 h（小檗堿片）到48.5 h（雙花百合片）。這表明雙花百合片中的其他成分可以增強(qiáng)小檗堿的吸收速度和生物利用度。小檗堿主要由CYP1A2、CYP3A4和CYP2D6代謝[26]，這就暗示雙花百合片中紫堇靈和其他成分可能會(huì)抑制小檗堿的代謝，在后續(xù)研究中將對(duì)此進(jìn)行探討。有關(guān)雙花百合片中中藥-西藥或中藥-中藥相互作用以及配伍機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

牛磺膽酸是由肝細(xì)胞分泌的膽汁酸與?；撬峤Y(jié)合形成的內(nèi)源性物質(zhì)，因此人體血漿中含有一定濃度的?；悄懰?。本試驗(yàn)中受試者服用雙花百合片后血漿中牛磺膽酸濃度-時(shí)間曲線并沒有顯著的特征性，這是人體膽囊每天有生理節(jié)律性的分泌牛磺膽酸與雙花百合片釋放的?；悄懰岬目傮w表現(xiàn)。同時(shí)?；悄懰嵩隗w內(nèi)的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝會(huì)受到機(jī)體的多方面調(diào)控以維持其在體內(nèi)的平衡[27]，這又進(jìn)一步增加了?；悄懰嵩隗w內(nèi)處置過程的復(fù)雜性，因此試驗(yàn)未能得到?；悄懰峋唧w的藥動(dòng)學(xué)特征。

健康受試者單次口服雙花百合片后，在72 h內(nèi)尿液中小檗堿、黃連堿、表小檗堿、藥根堿、木蘭花堿、小檗紅堿、巴馬汀、紫堇靈、乙酰紫堇靈和綠原酸的累積排泄率為0.01%-6.5%。結(jié)果顯示雙花百合片中的這些主要成分以原型的形式從腎臟排泄的量較少?？赡苓@些成分在體內(nèi)被廣泛代謝，可能與葡萄糖醛酸或磺酸結(jié)合形成II相代謝物，或者生物轉(zhuǎn)化后形成相應(yīng)的I相代謝物，最終以代謝物的形式排泄。因此為了考察這些成分的主要代謝途徑和物料平衡，有關(guān)它們?cè)隗w內(nèi)的代謝和處置過程還仍需進(jìn)一步研究。

總之，本試驗(yàn)的研究結(jié)果為后期考察雙花百合片用于治療口腔黏膜炎患者的安全性和有效性的研究奠定基礎(chǔ)。目前，雙花百合片在國(guó)內(nèi)正在進(jìn)行用于口腔黏膜炎治療藥物的IV期臨床試驗(yàn)的一系列評(píng)估，本研究為指導(dǎo)雙花百合片的臨床合理用藥及其作用機(jī)制的研究提供參考，為推動(dòng)雙花百合片的國(guó)際化和現(xiàn)代化提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

6 展望

中藥藥代動(dòng)力學(xué)經(jīng)歷了幾十年的研究歷程，現(xiàn)代藥理學(xué)研究也已證明中藥復(fù)方藥效的發(fā)揮并不是簡(jiǎn)單的單味藥藥理作用的簡(jiǎn)單相加或毒性作用的抵消或相減，而是多成分、多靶點(diǎn)的綜合，是方中藥物各成分之間發(fā)生的協(xié)同、制約或改性等作用的綜合效果[4]。近年來，中藥藥代動(dòng)力學(xué)的研究廣泛借鑒數(shù)學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)等學(xué)科的研究方法，已經(jīng)從針對(duì)于單一成分發(fā)展為同時(shí)監(jiān)測(cè)眾多成分和眾多生物效應(yīng)。隨著研究方法和技術(shù)的發(fā)展，中藥藥代動(dòng)力學(xué)得到了較快的發(fā)展，基于藥物濃度法、生物效應(yīng)法以及PK/PD結(jié)合模型等各種中藥藥代動(dòng)力學(xué)研究新方法新思路已經(jīng)在不同中藥中得到了應(yīng)用和驗(yàn)證?，F(xiàn)代數(shù)學(xué)模型和動(dòng)力學(xué)原理成功地被應(yīng)用于中藥多組分藥代動(dòng)力學(xué)研究，客觀科學(xué)地研究了中藥復(fù)方在人體內(nèi)吸收、分布、代謝和消除過程的規(guī)律，為中藥多組分藥代動(dòng)力學(xué)的研究，為中藥現(xiàn)代化開創(chuàng)了新研究思路。中藥或其復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理作用機(jī)制和安全性評(píng)價(jià)是中藥現(xiàn)代化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。中藥的安全性問題是中藥現(xiàn)代化進(jìn)程中的瓶頸，正確評(píng)價(jià)中藥的毒副作用，明確中藥毒性機(jī)制及其物質(zhì)基礎(chǔ)，科學(xué)合理使用中藥，對(duì)減少或杜絕中藥毒性具有重要意義。中醫(yī)藥是中華民族的寶貴財(cái)富，2015年屠呦呦因發(fā)現(xiàn)青蒿素而獲得諾貝爾獎(jiǎng)，再度引發(fā)了人們對(duì)中藥的關(guān)注與激情；2016年3月全國(guó)政協(xié)十二屆四次會(huì)議上，有關(guān)促進(jìn)和規(guī)范中醫(yī)藥發(fā)展的話題再次成為了關(guān)注熱點(diǎn)，相信隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展及科研工作者的不懈努力，中醫(yī)藥定會(huì)邁進(jìn)國(guó)際的醫(yī)藥舞臺(tái)，彰顯和發(fā)揮獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和魅力。

表5 受試者單次、多次口服雙花百合片后綠原酸的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（Mean±SD）

表6 男、女受試者分別單次口服雙花百合片后綠原酸的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（n=6）

表7 受試者單次口服雙花百合片后尿液中九種生物堿成分和綠原酸的累積排泄量和累積排泄率(n=12)

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Consideration and Exploration on Pharmacokinetic Study of Traditional Chinese Medicine

Ding Li1,Liu Ruijuan2
(1.Department of Pharmaceutical Analysis,China Pharmaceutical University,Nanjing 210009,China;2.Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450003,China)

With the development of traditional Chinese medicine(TCM)modernization,the study of TCM is not only limited to clarify the chemical material basis in vitro,but also to further study the fate of active components contained in TCM in vivo as well as the interaction and effect among them.It is to say that the pharmacokinetic(PK)study of TCM is needed.The results of PK study of TCM are useful for investigating its mechanism of action,reasonable use of TCM in clinic and modernization of TCM.In this paper,some scientific issues,including the purpose and significance of PK study of TCM,its particularity,difficulty and commonly used research methods,were analyzed and summarized combining with research examples.The authors hoped that it would be helpful for the scholars and promote the development of PK study of TCM.

Traditional Chinese medicine,pharmacokinetics,material basis,interaction,modernization of traditional Chinese medicine

10.11842/wst.2017.07.005

R36

A

2017-05-16

修回日期：2017-07-15

＊ 國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)面上項(xiàng)目（81573387）：基于生物條碼專屬分離和放大-質(zhì)譜檢測(cè)標(biāo)簽增敏的體內(nèi)蛋白多肽類藥物定量分析新方法研究，負(fù)責(zé)人：丁黎；國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)面上項(xiàng)目（81273482）：以代謝激活理論為導(dǎo)向的中藥潛在肝損成分質(zhì)譜快速識(shí)別及其致毒關(guān)聯(lián)度研究，負(fù)責(zé)人：丁黎；；鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院青年基金（YNQN2017134）：以反應(yīng)性代謝物為導(dǎo)向的質(zhì)譜快速識(shí)別中藥潛在肝損傷成分的研究，負(fù)責(zé)人：劉瑞娟。

＊＊ 通訊作者：丁黎，博士，教授，博士生導(dǎo)師，主要研究方向：藥物分析與藥代動(dòng)力學(xué)研究。

（責(zé)任編輯：陳 寧，責(zé)任譯審：王 晶）