1.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001；2.貴州醫(yī)科大學(xué)神奇民族醫(yī)藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550005

杞明眼保膠囊的提取工藝研究

蘇松柏1呂海濤1張麗麗2黃健1湯瑾1朱迪1

1.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽(yáng) 550001；2.貴州醫(yī)科大學(xué)神奇民族醫(yī)藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550005

目的優(yōu)選杞明眼保膠囊的提取工藝。方法以出膏率和大黃酚的含量為指標(biāo)，用高效液相色譜儀測(cè)定含量，采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選杞明眼保膠囊的最佳提取工藝。結(jié)果煎煮次數(shù)、煎煮時(shí)間對(duì)出膏率影響很大，其次為加水量，最佳提取工藝為加10倍量體積的水，提取3次，每次90min。結(jié)論通過驗(yàn)證，優(yōu)選出最佳提取工藝穩(wěn)定可行。

杞明眼保膠囊；提取工藝；正交實(shí)驗(yàn)；高效液相色譜法

杞明眼保膠囊(眼保Ⅱ號(hào)膠囊)是經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院老中醫(yī)李宗智多年的臨床研究，根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)理論研制而成的純中藥復(fù)方制劑，由決明子、丹參、山藥、茯苓等15味中藥組成[1-2]。具有清肝養(yǎng)肝、滋腎明目之功效，能促進(jìn)視網(wǎng)膜細(xì)胞修復(fù)，增強(qiáng)玻璃體的穩(wěn)固性，預(yù)防視網(wǎng)膜剝離。主要用于近視、視疲勞、眼底血管病變、眼底視網(wǎng)膜病變的治療，經(jīng)過多年的臨床觀察其療效顯著。本課題在對(duì)杞明眼保膠囊進(jìn)行深度開發(fā)研究的基礎(chǔ)上，以中醫(yī)藥理論為指導(dǎo)，主要對(duì)原提取工藝進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化[3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100型高效液相色譜(HPLC)儀，包括四元泵，自動(dòng)進(jìn)樣器，VWD檢測(cè)器，柱溫箱，(美國(guó)Agilent公司)；AB265-S型電子分析天平(瑞士Metler Toledo公司)；KQ-200KDB型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2試藥 大黃酚對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110769-200514)；甲醇為色譜純?cè)噭?，水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純，藥材飲片均從貴州省濟(jì)仁堂藥材有限公司購(gòu)買。

2 方法

2.1 提取工藝設(shè)計(jì) 以決明子中有效成分大黃酚的提取量和干膏得率作為雙考察指標(biāo)，采用高效液相色譜法測(cè)定大黃酚的含量，采用抗干燥失重的方法測(cè)定干膏得率。選擇容積比、提取次數(shù)、提取時(shí)間3個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平。試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案見表1。

表1 因素水平設(shè)計(jì)方案

2.2 大黃酚的測(cè)定方法 先稱取丹參100g，用8倍量80%的乙醇水浴鍋上回流提取2次，每次2h[1]，所得的丹參藥渣平均分成10份。按處方比例稱取其他藥材140g共9份，將9份醇提后的丹參藥渣加入復(fù)方中，按正交試驗(yàn)方案提取，將煎煮好的藥液均用40目篩過濾，合并每1個(gè)實(shí)驗(yàn)的濾液，濃縮，濃縮器從大容量轉(zhuǎn)移到小容量，移至恒重的蒸發(fā)皿中濃縮至稠膏狀，然后轉(zhuǎn)移至烘箱中，在100℃下烘干。接著在105℃下烘30min，后轉(zhuǎn)移至恒溫干燥箱中干燥30min，得干膏(計(jì)算出干膏的重量，計(jì)算干膏率)見表2。按供試品溶液的制備方法制備，采用高效液相色譜法測(cè)定并計(jì)算大黃酚的含量。

表2 杞明眼保膠囊提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent C18(150mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：無水甲醇-0.1%磷酸溶液(87:13)，用前以0.45μm微孔濾膜濾過；流速：1.0mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；進(jìn)樣量：10μL；以外標(biāo)法測(cè)定。柱溫：25℃。理論塔板數(shù)按大黃酚計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃酚對(duì)照品約5.63mg，置50mL量瓶中，加甲醇超聲溶解，用甲醇定容至刻度，搖勻，制成112.6μg/mL大黃酚溶液，再精密吸取1mL置10mL量瓶中，制成11.26μg/mL大黃酚溶液，用0.45μm微孔濾膜濾過，按上述測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定。如圖1所示。

2.2.3 供試品溶液的制備 分別取所得提取濃縮干燥好的干浸膏約2.5g，精密稱定，置200mL具塞錐瓶中，加甲醇50mL，精密吸取，稱定重量，置水浴上加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾。精密吸取續(xù)濾液25mL，置于150mL燒杯中，水浴上蒸干，殘?jiān)?0%的鹽酸溶液30mL，置水浴上加熱水解1h，放冷，用三氯甲烷振搖萃取4次，每次用30mL，合并4次三氯甲烷溶液，水浴上回收溶劑至干，殘?jiān)眉状既芙猓?0mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。用0.45μm微孔濾膜濾過，按上述色譜分析條件測(cè)定。如圖1所示。

2.2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 取未加決明子藥材的處方，加10倍量水提取2次，每次60min提取，濾過，干燥。所得的陰性對(duì)照品干浸膏按供試品溶液的制備方法操作，即得。用0.45μm微孔濾膜濾過，按上述色譜分析條件測(cè)定。如圖1所示。

2.2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為11.26μg/mL的大黃酚對(duì)照品溶液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下測(cè)定，以大黃酚進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。如圖2所示，進(jìn)行回歸處理，線性方程Y=5362.3x-0.2167，R=1.0000。結(jié)果表明大黃酚在0.01126～0.1126μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好。

2.2.6 干膏得率計(jì)算 干膏得率為所得干膏的重量與原藥材重量比的百分?jǐn)?shù)。見表2。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

綜合評(píng)分以大黃酚含量的最大值和干膏的最大值為參照，將數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化，再給出不同的權(quán)重，大黃酚的含量權(quán)重系數(shù)為0.6，干膏率權(quán)重系數(shù)為0.4。以綜合數(shù)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其中綜合評(píng)分Y=0.6×X1×100/4.46+0.4×X2×100/21.86。其直觀分析的結(jié)果見表2，方差分析的結(jié)果見表3。通過直觀分析，比較F0值，在所選因素水平范圍內(nèi)，影響因素大小順序?yàn)锳>C>B，即提取次數(shù)和時(shí)間對(duì)綜合評(píng)分影響最大，容積比影響最小。結(jié)合極差初步確定提取條件為A3B2C3，即8倍量的水煎煮3次，每次煎煮2h。結(jié)果見表2和表3。

表3 方差分析表

4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果篩選的工藝條件A3B2C3，進(jìn)行3批驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，按處方量稱取藥材，加10倍量水，煎煮3次，每次90min，結(jié)果表明大黃酚的平均提取量為4.68mg，平均干膏率為24.27%，且重現(xiàn)性好，故認(rèn)為該工藝穩(wěn)定可靠。結(jié)果見表4。

表4 杞明眼保膠囊最佳提取工藝驗(yàn)證表

5 討論

中藥復(fù)方制劑中藥物浸出率的高度低、提取工藝是復(fù)方制劑質(zhì)量控制基礎(chǔ)的重要影響因素。影響提取率的因素有很多，如提取時(shí)間、提取次數(shù)、加水量，提取的溫度、溶劑極性、溶劑濃度、浸泡時(shí)間、藥材粒度等，應(yīng)找出影響提取的主要因素，優(yōu)選出最佳的提取工藝，以提高復(fù)方的浸出率[4]。由本文結(jié)果可看出，提取次數(shù)和提取時(shí)間對(duì)所提藥物的含量和干膏得率有明顯影響，其中提取的次數(shù)是影響本制劑的主要因素。

杞明眼保膠囊的提取工藝是采用丹參乙醇提取后，將濾過的藥渣與復(fù)方其他藥材合并水提取，以君藥決明子中的大黃酚的含量和干膏率為指標(biāo)，優(yōu)選最佳的水提取工藝，筆者主要解決杞明眼保膠囊提取工藝的穩(wěn)定和可行性，盡可能地提取有效成分，以滿足臨床療效，從而為貴陽(yáng)中醫(yī)一附院臨床應(yīng)用提供安全、有效、可控的制劑，并為未來開發(fā)新藥研究奠定基礎(chǔ)，造福于廣大近視和弱視患者。

杞明眼保膠囊處方有決明子、丹參、茯苓、山藥、旱蓮草、女貞子、淡竹葉、黑芝麻、茺蔚子、南沙參、麥冬、覆盆子、連翹、石斛、刺蒺藜15味中藥材組成，在缺決明子藥材的陰性圖譜中，在大黃酚峰位置沒有峰出現(xiàn)，說明采用大黃酚為指標(biāo)成分專屬性好。

[1]張培琴.HPLC法測(cè)定眼保Ⅱ號(hào)膠囊中大黃酚的含量[J].中國(guó)藥房,2010,19(5)：1792-1793.

[2]張建玲,李宗智.眼保Ⅱ號(hào)膠囊治療青少年近視和假性近視臨床觀察[J].中成藥,2006,5(5):778-779.

[3]楊廣德,張繼業(yè),張莉,等.丹參中丹參酮IIA和隱丹參酮的提取方法研究[J].藥物分析雜志,2006,26(12):1807-1810.

[4]蘇松柏,張永萍,何焜,等. 三妙消痛貼的提取工藝研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(14):9-11.

StudyonExtractingTechnologyofQimingyanbaoCapsules

SU Songbai1LV Haitao1ZHANG Lili2HUANG Jian1TANG Jin1ZHU Di1

1.The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001,China; 2.College of Medicine, Guizhou Medical University,Guiyang 550005，China

ObjectiveTo optimize the preparation process of Qimingyanbao Capsules.MethodsThe content of chrysophanol and chrysophanol were used as indexes, samples were analyzed by HPLC.The optimum extraction process of Qimingyanbao Capsules was determined by orthogonal experiment.ResultsThe paste rate effect of was observed in decoction times and decoction time , the second was water addition,The results was regarded as the optimal extraction process, that is 10 times of water,3 times of extraction and each for 90 minutes.ConclusionExperiment has been done to prove that the optimum extraction process is stable and feasible.

Qimingyanbao Capsule；Extraction Process；Orthogonal Experiment；HPLC

R284

A

1007-8517(2017)18-0029-04

2017-07-14 編輯：陶希睿)

貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院院內(nèi)課題([2011]43號(hào)),貴州省中醫(yī)藥管理局課題(QZYY2012-14)。

蘇松柏(1984-)，男，碩士研究生，主管中藥師，研究方向?yàn)樾轮苿┘靶聞┬烷_發(fā)研究。E-mail:258183604@qq.com