陳俊良，李 莉

(昌江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 昌江 572700)

昌江縣地中海貧血的基因型分析

陳俊良，李 莉

(昌江縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南 昌江 572700)

目的 了解昌江縣地中海貧血的基因型及分布特點(diǎn)。方法 收集2015年2月至2017年4月在昌江縣人民醫(yī)院進(jìn)行地中海貧血基因檢測(cè)的1 328人，采用Gap-PCR法檢測(cè)3種常見(jiàn)的缺失型α地中海貧血基因和PCR反向點(diǎn)雜交(PCR-RDB)法檢測(cè)17個(gè)常見(jiàn)突變位點(diǎn)的β地中海貧血基因，數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果 昌江縣地中海貧血檢出率為33.43%，其中α地中海貧血占總地中海貧血的84.01%，前四位α地中海貧血的基因型及構(gòu)成比分別是-α4.2/αα (36.46%)、-α3.7/αα (36.19%)、--SEA/αα (11.8%)，-α3.7/-α4.2(7.77%)；β地中海貧血占總地中海貧血的9.91%，檢出四種突變類型，其基因型及構(gòu)成比分別是CD41-42(63.64%)、IVSⅡ-654(15.91%)、-28(11.36%)、CD17(9.09%)；αβ復(fù)合型地中海貧血27例，占總地中海貧血的6.08%，主要以CD41-42合并α4.2/αα和-α3.7/αα為主。結(jié)論 昌江縣地中海貧血基因的檢出率較高，以α地中海貧血居多，分布具有區(qū)域性的特點(diǎn)。

地中海貧血；基因型；基因檢測(cè)

地中海貧血(thalassemia)簡(jiǎn)稱地貧，是一種常染色體隱性的遺傳病，由于體內(nèi)珠蛋白合成功能降低甚至喪失引起小紅細(xì)胞、低色素的貧血[1]，在我國(guó)主要以α和β型的地貧最常見(jiàn)[2]，主要分布在我國(guó)的南方，特別是廣東省、廣西省及海南省發(fā)病率較高。由于重型α地貧患兒大多數(shù)在懷孕的中晚期宮內(nèi)死亡，而重型β地貧患兒除了定期輸血、除鐵治療和造血干細(xì)胞移植外，尚無(wú)有效的治愈方法，只能通過(guò)生育前進(jìn)行胎兒的地貧基因檢測(cè)，提早發(fā)現(xiàn)并終止妊娠，從而避免重型地貧患兒的出生[3]。本次通過(guò)跨躍斷裂位點(diǎn)聚合酶反應(yīng)(Gap-PCR)和聚合酶鏈反應(yīng)反向斑點(diǎn)法(PCR-RDB)分子診斷技術(shù)對(duì)α、β地貧進(jìn)行相應(yīng)的基因檢測(cè)，了解昌江縣地貧的基因型及分布特點(diǎn)，為該地區(qū)地貧的防控提供比較準(zhǔn)確可靠的信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2015年2月份至2017年4月份在昌江縣人民醫(yī)院參與過(guò)α、β地貧基因檢查的1 328人，年齡8個(gè)月～53歲，男性432人，女性896人，所有檢查對(duì)象或其家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集和處理 用檸檬酸鈉抗凝管采集靜脈血2 mL，及時(shí)送檢，如不能及時(shí)送檢暫放冰箱2℃～8℃冷藏。

1.2.2 基因型檢測(cè) 所采集的標(biāo)本送往廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心，采用Gap-PCR法對(duì)3種常見(jiàn)的缺失型α地貧基因進(jìn)行檢測(cè)，采用PCR反向點(diǎn)雜交(PCR-RDB)法對(duì)17個(gè)常見(jiàn)突變位點(diǎn)的β地貧基因進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用描述性方法，分析昌江縣地貧基因型及構(gòu)成比；計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 地貧基因檢出率 本次地貧檢出率為33.43%(444/1 328)，其中α地貧占總地貧的84.01%(373/444)，β地貧占總地貧的9.91%(44/444)，αβ 復(fù)合型地貧占總地貧的6.08%(27/444)。

2.2 α與β地貧的基因類型及其分布 本次檢出373例α地貧和44例β地貧，其基因型和構(gòu)成比見(jiàn)表1，前四位α地貧的基因型及構(gòu)成比分別是-α4.2/αα(36.46%)、-α3.7/αα(36.19%)、--SEA/αα(11.8%)，-α3.7/-α4.2(7.77%)。根據(jù)臨床特點(diǎn)區(qū)分，靜止型271例，所占比例為72.65%；標(biāo)準(zhǔn)型92例，所占比例為24.67%；中間型10例，所占比例為2.68%；本次檢測(cè)的α地貧三種基因型(靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型和中間型)的構(gòu)成比與海口市[4]、瓊海市[5]和三亞市[6]進(jìn)行比較，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=262.253，P＜0.01)，這四個(gè)地區(qū)的α地貧基因型分布見(jiàn)表2。另外檢出的β地貧主要以CD41-42突變?yōu)橹鳎?8例，占β地貧的63.64%。只檢出四種突變類型，其基因型以及構(gòu)成比分別是：CD41-42(63.64%)、IVSⅡ-654(15.91%)、-28(11.36%)、CD17(9.09%)。昌江縣、海口市[4]、瓊海市[5]和三亞市[6]的前四位β地貧基因型分布比較見(jiàn)表3。

表1 昌江縣α和β地貧基因型及構(gòu)成比

表2 四個(gè)地區(qū)的α地貧基因型分布[例(%)]

2.3 αβ復(fù)合型地貧基因類型及其分布 本次檢測(cè)出αβ復(fù)合型地貧27例，占總地貧的6.08%，以CD41-42合并α4.2/αα和-α3.7/αα為主，其基因類型及其分布如表4所示。

表4 昌江縣αβ復(fù)合型地貧基因型

表3 四個(gè)地區(qū)主要的β地貧基因型分布(%)

3 討論

本次研究發(fā)現(xiàn)昌江縣地貧檢出率為33.43%，檢出373例α地貧基因，占總地貧基因的84.01%，排列前四位的α地貧基因型為靜止型-α4.2/αα (36.46%)、靜止型-α3.7/αα (36.19%)、標(biāo)準(zhǔn)型-SEA/αα (11.8%)以及標(biāo)準(zhǔn)型-α3.7/-α4.2(7.77%)。本次結(jié)果顯示，昌江縣地貧檢出率明顯高于海南省的平均水平(23.46%)[7]，主要α地貧基因型為-α4.2/αα (左缺失)和-α3.7/αα (右缺失)，也是昌江縣和三亞市的主要α地貧類型，在海南省黎族人群中分布最廣泛，但?？谑泻铜偤Ｊ兄饕?SEA/αα，也被稱為東南亞缺失型，是我國(guó)南方最常見(jiàn)的地貧類型。而昌江縣α地貧基因型的分布與?？谑?、瓊海市和三亞市比較差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，可能由于各自的地理位置、氣候變化以及不同的民族人群之間相互的融合、通婚等有一定的關(guān)系，導(dǎo)致海南省四個(gè)地區(qū)之間的α地貧基因型既有相同點(diǎn)又有各自的特點(diǎn)。由于α地貧靜止型只缺失一個(gè)基因，也少有臨床癥狀，血液學(xué)指標(biāo)多數(shù)在正常參考范圍內(nèi)，用傳統(tǒng)的血液學(xué)分析方法篩查難以區(qū)分，因此在靜止型地貧的高發(fā)區(qū)，有必要做基因診斷來(lái)篩查地貧，從而避免出現(xiàn)漏檢。

本次研究發(fā)現(xiàn)昌江縣β地貧44例，占總地貧的9.91% ，只 檢 出 CD41-42(63.64%)、IVSⅡ -654(15.91%)、-28(11.36%)和 CD17(9.09%)四種突變類型，說(shuō)明昌江縣β地貧的突變類型比較少，沒(méi)有其他地區(qū)復(fù)雜，主要突變類型為CD41-42，與?？谑小偤Ｊ泻腿齺喪惺窍嗤?，其他IVSⅡ-654、-28及CD17的檢出率也都非常高，而且其檢出率大小排列順序也基本相同，這與張續(xù)業(yè)等[8]和徐衛(wèi)華等[9]的報(bào)道結(jié)果相一致。由此可見(jiàn)，海南省各地區(qū)主要的β地貧突變類型基本相同，沒(méi)有明顯的差異。

除此之外，本次研究還檢出七種類型的αβ復(fù)合型地貧27例，占總地貧基因的6.08%。主要以CD41-42合并-α4.2/αα和-α3.7/αα居多，占αβ復(fù)合型地貧的74.07%，可能是α地貧基因型-α4.2/αα和-α3.7/αα與β地貧中的CD41-42在昌江縣地貧中分布廣泛的原因。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，αβ復(fù)合型地貧的患者，無(wú)論與α或β地貧的患者婚配，下一代均可能生出中或重型地貧的患兒，如果雙方都是αβ復(fù)合型地貧患者，生出重型患兒的概率將會(huì)大大提升[10]。由于αβ復(fù)合型地貧只顯示出HbA2和(或)HbF水平升高等β地貧所具有的血液學(xué)方面的特征，而掩蓋了α地貧，僅僅通過(guò)血液學(xué)方面的特征很難鑒別出αβ復(fù)合型地貧和β地貧，因此對(duì)于β地貧的攜帶者，應(yīng)該同時(shí)檢測(cè)β和α地貧基因型，建議采用準(zhǔn)確率高的PCR-RDB法進(jìn)行β地貧的基因檢測(cè)[11]，并采用Gap-PCR法進(jìn)行α地貧的基因檢測(cè)[12]，提高檢出率，以免漏診，從而降低重或中型地貧患兒的出生率。

本研究初步了解了昌江縣地貧的基因類型和分布特點(diǎn)，對(duì)本地的地中海貧血防治具有重要的意義。近年來(lái)海南省各市縣計(jì)劃生育服務(wù)站免費(fèi)對(duì)婚前夫婦及產(chǎn)前孕婦進(jìn)行常規(guī)的地貧篩查及基因檢測(cè)，在重型地貧患兒出生防范方面取得很大的進(jìn)步。但偏遠(yuǎn)的貧困地區(qū)由于地貧防治宣傳力度仍不足，部分育齡夫婦還沒(méi)有意識(shí)到地貧的危害性，加上強(qiáng)制性婚前檢查制度已取消，導(dǎo)致每年仍有少數(shù)的重型地貧患兒出生。根據(jù)重型地貧的規(guī)范性輸血治療原則[13]，每5周至少要輸血一次，每次200 mL/10 kg，估算一名重型地貧患兒一年至少要輸2 086 mL的紅細(xì)胞懸液。目前在本院進(jìn)行長(zhǎng)期輸血治療的重型地貧患兒15人，一年至少需要3.129萬(wàn)mL的紅細(xì)胞懸液，而海南省血液中心血庫(kù)長(zhǎng)期供血緊張，導(dǎo)致部分患兒不能及時(shí)輸血治療而影響生存質(zhì)量。另外，長(zhǎng)期反復(fù)輸血的地貧患兒還需要去鐵治療，其治療費(fèi)用也非常昂貴，即使醫(yī)療保險(xiǎn)也僅能報(bào)銷部分的醫(yī)療費(fèi)用，這對(duì)患兒的家庭和社會(huì)都是極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，有必要建立一個(gè)由政府主導(dǎo)的地貧基因防控網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)及更加完善的地貧篩查防范體系，從而實(shí)現(xiàn)重型地貧患兒零出生率的理想目標(biāo)。

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Genotypes of thalassemia in Changjiang County.CHEN Jun-liang,LI Li.Department of Clinical Laboratory,

Changjiang People's Hospital,Changjiang 572700,Hainan,CHINA

Objective To understand the genotypes and distribution characteristics of thalassemia in Changjiang County.Methods From February 2015 to April 2017,1 328 people from Changjiang People's Hospital were examined for the genetic test of thalassaemia.Gap-PCR was utilized to detect three common genes in deletional α-thalassemia,and PCR-reverse dot blot(PCR-RDB)assay was applied to detect 17 common mutation sites in β-thalassemia.SPSS17.0 software was used in the statistical analysis.Results The positive rate of thalassemia in Changjiang County was 33.43%,and α-thalassemia took up 84.01%in all detected thalassemia.The ranking genotypes in α-thalassemia were-α4.2/αα(36.46%),α3.7/αα (36.19%),--SEA/αα (11.8%)and-α3.7/-α4.2(7.77%),respectively;β-thalassemia took up 9.91%in all detected thalassemia with four mutated types detected,namely,CD41-42(63.64%),IVSⅡ-654(15.91%),-28(11.36%)and CD17(9.09%);there were 27 cases of α-β compound type of thalassemia,with a proportion of 6.08%in all thalassemia cases.CD41-42 with α4.2/αα or-α3.7/αα was the main form in genotype.Conclusion The positive rate of thalassemia gene is relatively high in Changjiang County with a major form of α-thalassemia,and the distribution of thalassemia has regional characteristics.

Thalassemia;Genotype;Gene detection

R556

A

1003—6350（2017）19—3163—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.19.022

陳俊良。E-mail：chenjunliang1314@126.com

2017-04-17)