趙躍萍，張 博，劉美君，侯雨杉，孫萌萌，李 清，袁菲陽，蘇 紅，邰 賀

(武警遼寧省總隊醫(yī)院內(nèi)分泌與代謝病科1、燒傷整形科2，遼寧 沈陽 110034)

磺胺嘧啶銀聯(lián)合蘆薈燒傷膏對糖尿病大鼠末梢循環(huán)障礙及足潰瘍的保護作用

趙躍萍1，張 博2，劉美君1，侯雨杉2，孫萌萌1，李 清1，袁菲陽1，蘇 紅1，邰 賀1

(武警遼寧省總隊醫(yī)院內(nèi)分泌與代謝病科1、燒傷整形科2，遼寧 沈陽 110034)

目的 研究磺胺嘧啶銀聯(lián)合蘆薈燒傷膏對糖尿病大鼠足潰瘍的保護作用并探討其機制。方法 選取清潔級性成熟Wistar大鼠90只制成糖尿病大鼠模型，將成功造模的80只大鼠按照隨機數(shù)表法分為末梢循環(huán)障礙模型組與足潰瘍模型組，每組均40只。成功造模且符合研究要求的末梢循環(huán)障礙模型組(n=35)按照隨機數(shù)表法分為對照組(n=18)與觀察組(n=17)，足潰瘍模型組(n=36)按照隨機數(shù)表法分為對照組(n=18)與觀察組(n=18)，所有大鼠均給予磺胺嘧啶涂抹患處，觀察組在此基礎(chǔ)上給予蘆薈燒傷膏，連續(xù)給藥35 d，治療期間(1周、2周、3周)記錄末梢循環(huán)障礙大鼠足底皮溫、疼痛閾值，記錄足潰瘍大鼠潰瘍面愈合情況及其外周血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)。結(jié)果 末梢循環(huán)障礙模型組大鼠治療過程中各個時間點觀察組的足底溫度高于對照組，而疼痛閾值低于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。足潰瘍模型組大鼠治療過程中各個時間點比較觀察組潰瘍愈合率、外周血清血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)均高于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論 磺胺嘧啶銀聯(lián)合蘆薈燒傷膏能很好地改善糖尿病大鼠的末梢循環(huán)引起的溫度及痛覺遲鈍，與此同時能通過提高VEGF的表達促進足潰瘍大鼠潰瘍面愈合。

糖尿病足；潰瘍；末梢循環(huán)障礙；血管內(nèi)皮生長因子；磺胺嘧啶銀；蘆薈燒傷膏

糖尿病的嚴重并發(fā)癥末之一是梢微循環(huán)障礙，長期高糖狀態(tài)能導致末梢血管狹窄而導致相應(yīng)的細胞與組織缺血缺氧，在早期臨床表現(xiàn)中為下肢皮膚溫度降低、痛覺遲鈍，受外界的物理或化學損傷導致的潰瘍出現(xiàn)時，其愈合速度與程度均明顯低于健康人群[1]。臨床上常用的促進潰瘍面愈合的藥物有磺胺嘧啶銀，具有一定的抗菌消炎、保護創(chuàng)面與促進創(chuàng)面愈合的功效，同時在糖尿病足潰瘍治療中也有較大的應(yīng)用價值[2]。作為治療燒傷的常用藥物蘆薈，在民間已經(jīng)得到廣泛使用，多糖化合物是其主要有效成分，具有很好的保護創(chuàng)面、抗炎、促進表皮修復等功效[3]，此外蘆薈對末梢循環(huán)具有一定的調(diào)節(jié)功效[3]，但是磺胺嘧啶銀對外周微循環(huán)是否有調(diào)節(jié)作用還未有研究，而糖尿病足合并潰瘍面的出現(xiàn)可加重末梢微循環(huán)障礙，從而形成惡性循環(huán)，因此研究其對創(chuàng)面的修復及其改善其末梢循環(huán)的效果及其作用機制中選擇磺胺嘧啶銀聯(lián)合蘆薈有一定的實踐價值。既往蘆薈膏僅僅用作于燒傷患者而用于微循環(huán)障礙治療方面還未有報道，這將為今后的臨床工作提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選用90只近交系健康Wistar大鼠(中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供；周齡8～10周，體質(zhì)量210～230 g(雌鼠)、230～250 g(雄鼠)；80只成功造模成糖尿病大鼠按照隨機數(shù)字表法分為末梢循環(huán)障礙研究組和足潰瘍模型研究組，每組40只，分別進行建立足潰瘍(Ⅱ度燙傷)大鼠模型(成功36只)與建立末梢循環(huán)障礙大鼠模型(成功35只)，且將兩個實驗?zāi)Ｐ徒M分別按照隨機數(shù)表法分為對照組與觀察組兩個亞組，兩個模型組大鼠中的對照組與觀察組造模前基線資料差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1和表2。

表1 完成研究的末梢循環(huán)障礙模型組大鼠造模前基線資料比較

表2 完成研究的足潰瘍模型組大鼠造模前基線資料比較

1.2 主要試劑與儀器 云南萬綠生物有限公司產(chǎn)品：200:1庫拉索蘆薈凝膠凍干粉；山東健康藥業(yè)有限公司產(chǎn)品：磺胺嘧啶銀粉；美國Sigma公司產(chǎn)品：鏈脲佐菌素；Sigma公司產(chǎn)品：外周血清VEGF水平檢測試劑盒(ELISA法)。使用美國Sigma公司生產(chǎn)的ASD-310S型低溫離心機。

1.3 方法

1.3.1 實驗動物的處理 (1)大鼠環(huán)境適應(yīng)期：將90只SD大鼠雌雄分開飼養(yǎng)1周(每籠4只，人工控溫20℃～26℃，12 h光照，12 h黑暗，顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水取食)；(2)糖尿病大鼠造模期：誘導建立糖尿病大鼠模型，將40只大鼠禁食水12 h后以30 mg/kg的劑量標準腹腔注射鏈脲佐菌素(用新鮮配制的0.1 mmol/L，pH值為4.4的枸櫞酸鈉緩沖液配制，現(xiàn)用現(xiàn)配)，3周后所有大鼠禁食水12 h后按照2 g/kg的標準灌胃葡萄糖溶液(200 g/L)，2 h后采尾緣靜脈血測定血糖值，70只成功造模(血糖＞11.1 mmol/L代表糖尿病大鼠模型建立成功)[5]；(3)注射鏈脲佐菌素第9周后將40只大鼠腹腔注射濃度為20 g/L的戊巴比妥鈉(40 mg/kg)進行麻醉后固定好四肢，并取左后足底37 mm2皮膚的面積進行100℃水蒸氣熏蒸5 s而造成Ⅱ度燙傷(以病理診斷為準，有35只達到標準)周圍循環(huán)障礙與Ⅱ度燙傷潰瘍模型大鼠建立，將另外40只大鼠建立末梢循環(huán)障礙模型進行足部低溫處理，浸置呈有冰水的不銹鋼盆鋼板表面的40只大鼠，每天行走10 min，連續(xù)進行兩周，最終36只造模成功。兩組大鼠在當日連續(xù)給予藥物35 d，其中對照組大鼠每日8時給予磺胺嘧啶銀粉末(用生理鹽水混勻呈泥狀物后涂抹于患處)，每日18時給予麻油涂抹患處；觀察組大鼠每日8時給予磺胺嘧啶銀粉末(用生理鹽水混勻呈泥狀物后涂抹于患處)，每日18時給予蘆薈燒傷膏，末梢循環(huán)障礙組大鼠治療過程中(1周、2周、3周)記錄大鼠足底皮溫、疼痛閾值，足潰瘍模型組大鼠治療過程中(1周、2周、3周)記錄潰瘍面愈合情況及其外周血清VEGF水平。

1.3.2 足底皮溫與痛閾測定方法 檢測大鼠左后足底溫度與疼痛閾值是在室溫條件下采取紅外溫度儀及其足底測試儀。檢測皮膚溫度時要注意以免損傷皮膚，輻射熱光照限值為60 s；必須要在大鼠安靜的條件下進行測定疼痛閾值，且要連續(xù)在每次檢測間隔不少于5 min情況下進行3次后取平均值[4]。

1.4 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均值±標準差)表示，計量資料兩組間比較采用兩個獨立樣本t檢驗，組內(nèi)治療時間點與前一時間點比較采用配對樣本t檢驗，組內(nèi)各個時間點比較采用重復測量方差分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 末梢循環(huán)障礙大鼠模型足底皮溫比較該模型的兩組大鼠治療前足底溫度比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；兩組大鼠的足底溫度在治療后的前兩周均低于治療前，而于治療后的第3周皮溫開始升高，且觀察組高于治療前，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而對照組與治療前足底溫度比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表 3。

表3 末梢循環(huán)障礙大鼠模型足底溫度比較（s）

2.2 末梢循環(huán)障礙大鼠模型痛閾比較 兩組大鼠治療前痛閾比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，兩組大鼠的痛閾隨著治療均逐漸降低，且觀察組低于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表4。

表4 末梢循環(huán)障礙大鼠模型痛閾比較（s）

2.3 足潰瘍大鼠模型潰瘍面愈合情況比較治療過程中(1周、2周、3周)觀察組愈合率明顯優(yōu)于對照組，且差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表5。

表5 足潰瘍大鼠模型潰瘍愈合情況比較[例(%)]

2.4 足潰瘍模型兩組大鼠組外周血清VEGF水平比較 治療過程中兩組大鼠VEGF均逐漸升高，且差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，治療過程中(1周、2周、3周)觀察組VEGF水平明顯優(yōu)于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表 6。

表6 足潰瘍大鼠模型外周血VEGF水平比較(s)

表6 足潰瘍大鼠模型外周血VEGF水平比較(s)

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3 討論

下肢組織壞死導致發(fā)生潰瘍是糖尿病末梢循環(huán)障礙的主要癥狀之一，潰瘍又能夠加重末梢循環(huán)障礙，從而形成惡性循環(huán)，潰瘍和末梢循環(huán)障礙相互關(guān)聯(lián)，互相影響，同時末梢循環(huán)障礙加重潰瘍面的修復，其中痛覺、溫度覺減弱是末梢循環(huán)障礙主要表現(xiàn)[6]，在本實驗中建立了糖尿病實驗大鼠模型，并在此模型的基礎(chǔ)上分別建立了兩組模型(末梢循環(huán)障礙模型與足潰瘍模型)，對設(shè)定的兩個不同狀態(tài)分別進行了研究，避免了實驗過程中的相互干擾，合并足潰瘍和末梢循環(huán)障礙是糖尿病患者往往同時存在的癥狀，因此需要尋找能同時改善兩種狀態(tài)的一種綜合治療方案。本臨床研究顯示應(yīng)用磺胺嘧啶銀聯(lián)合蘆薈燒傷膏治療糖尿病足(潰瘍與末梢循環(huán)障礙)動物實驗過程中均取得了較好的效果，且該方案符合臨床中糖尿病末梢循環(huán)障礙與潰瘍的原則[7]，但是在今后的實驗中我們將結(jié)合嚴格控制血糖的方法進行研究(本實驗未針對血糖過高給予相應(yīng)的降糖藥物)，此外本實驗沒有研究其對具體的分子水平研究。廣大學者一直重視的糖尿病足臨床治療方面研究。微血管功能障礙及其所產(chǎn)生的慢性炎性反應(yīng)是其主要病理基礎(chǔ)，同時往往合并著微循環(huán)障礙與潰瘍，微血管的重建有助于改善潰瘍的血供與提高末梢神經(jīng)功能，創(chuàng)面愈合的核心點往往是血管內(nèi)皮細胞的修復[8]，而內(nèi)源性VEGF是一種能導致血管內(nèi)皮細胞趨化與促進分泌血管內(nèi)皮生長因子進而加速了創(chuàng)面的愈合[9]。

末梢循環(huán)障礙模型組研究結(jié)果表現(xiàn)：兩組大鼠治療前足底溫度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，兩組大鼠的足底溫度在治療后的前兩周均低于治療前，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而于治療后的第3周皮溫開始升高，且觀察組高于治療前，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而對照組與治療前足底溫度差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，治療過程中觀察組皮溫始終高于對照組，且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；兩組大鼠治療前痛閾差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，兩組大鼠的痛閾隨著治療均逐漸降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，且觀察組低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明改善末梢循環(huán)功能中單獨采用磺胺嘧啶銀有一定的效果，但聯(lián)合蘆薈膏后效果更佳，與李建學等[10]研究結(jié)果相似。與此同時在潰瘍模型大鼠中治療后潰瘍愈合率均有所升高，但是蘆薈膏聯(lián)合運用磺胺嘧啶銀效果會更明顯，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，同時在治療過程中兩組大鼠VEGF均逐漸升高，且差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，治療過程中觀察組VEGF水平明顯優(yōu)于對照組，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明其濃度與創(chuàng)面愈合密切相關(guān)。本研究并未進行對改善末梢循環(huán)功能的分子學機制進行研究，以往研究證實高糖狀態(tài)下存在凋亡與抗凋亡平衡失調(diào)同氧化與抗氧化物質(zhì)平衡失調(diào)有關(guān)，導致其凋亡率增加與血管壁受到自由基攻擊的概率增加有一定的關(guān)系[10-11]，因此本研究將在今后的研究中去進行證實。此外臨床中常用的能較好的抑制微血管病變的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI)來促進組織修復[12]，在后續(xù)的研究中將加入該類藥物進行研究(同時采用降糖)。

總之，磺胺嘧啶聯(lián)合采用蘆薈膏能很好的改善末梢循環(huán)功能與促進潰瘍面愈合，該研究為今后的臨床工作提供了很好的理論依據(jù)。

[1]李玲,戚莎莎,宋光耀.糖尿病足潰瘍的危險因素與治療進展[J].中國全科醫(yī)學,2013,16(9):3159-3163.

[2]李海珍,王紅英,仲麗麗,等.磺胺嘧啶銀脂質(zhì)水膠輔料結(jié)合創(chuàng)面負壓封閉引流技術(shù)在糖尿病足潰瘍中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2014,23(31):3514-3515.

[3]陳曉東,吳伯瑜,江瓊,等.蘆薈粗多糖對人表皮細胞體外分泌細胞因子的影響[J].中國藥理學通報,20005,21(11):1363-1365.

[4]張溪,廖成靜,賈赤宇.蘆薈在燒傷創(chuàng)面應(yīng)用的研究進展[J/CD].中華燒傷與修復雜志(電子版),2015,10(1):80-82.

[5] Luo J,Quan J,Tsai J,et al.Nogenetic mouse model of non-insulin-dependentdiabetesmellitus[J].Metabolism,1998,47(5):663-668.

[6]Yamagishi S,Fukami K,Matsui T.Crosstalk between advanced glycation end products(AGEs)-receptor RAGE axis and dipeptidyl peptidase-4-incretin system in diabetic vascular complications[J].Cardiovascular Diabetology,2015;14(4):2-4.

[7]李經(jīng).糖尿病足的研究和治療進展[J].現(xiàn)代診斷與治療,2015,26(9):1948-1951.

[8]Falanga V.Wound healing and its impairment in the diabetic foot[J].Lancet,2005;366(9498):1736-1743.

[9]Raunig JM,Yamauchi Y,Ward MA,et al.Placental inflammation and oxidative stress in the mouse model of assisted reproduction[J].Placenta,2011,32(11):852-858.

[10]李建學,陳曉東,宋信福,等.蘆薈燒傷膏對小鼠燙傷創(chuàng)面組織中轉(zhuǎn)化生長因子和表皮生長因子樣結(jié)構(gòu)域7的影響[J].中華實驗外科雜志,2016,33(5):1204-1206.

[11]匡洪宇,馬麗麗,江紅,等.持續(xù)及間斷高糖培養(yǎng)對牛視網(wǎng)膜血管周細胞凋亡的影響[J].中國糖尿病雜志,2008,18(8):498-500.

[12]謝熹瑋,趙 平.卡托普利和纈沙坦防治小鼠糖尿病性視網(wǎng)膜病變的實驗性研究[J].中華眼科雜志,2004,40(11):770-773.

A study of silver sulfadiazine combined with aloes burn cream in the protection of peripheral curculatory diaorders and ulcer on diabetic foot in diabetic rat.ZHAO Yue-ping1,ZHANG Bo2,LIU Mei-jun1,HOU Yu-shan2,

SUN Meng-meng1,LI Qing1,YUAN Fei-yang1,SU Hong1,TAI He1.Department of Endocrinology and Metabolic Disease1,Department of Burns and Plastic Surgery2,Liaoning Provincial Corps Hospital of Chinese People's Armed Police Forces,Shenyang 110034,Liangning,CHINA

Objective To study the mechanism of silver sulfadiazine combined with aloes burn cream in the protection of peripheral curculatory diaorders and ulcer on diabetic foot in diabetic rats.Methods A total of 80 modeling diabetic viripotent Wistar rats(modeled from 90 rats)were divided into the mold of peripheral curculatory diaorders group and the ulcer group according to random number tables,with 40 rats in each group.The peripheral curculatory diaorders group

an ice-cold stimulation,and 35 rats were successful,which were divided into the control group(silver sulfadiazine,n=18)and the observation group(silver sulfadiazine+aloes burn cream,n=17)randomly and received different treatments(treatment course for 35 days).On post treatment day(1,2,and 3 weeks),the plantar tempera-ture,hot pain thresholds of rats were detected in the peripheral curculatory diaorders group.Ulcer on diabetic foot group were given suffocating by steam,and 36 rats were successful,which were divided into the control group(silver sulfadiazine,n=18)and the observation group(silver sulfadiazine+aloes burn cream,n=18)randomly and received different treatments(treatment course for 35 days).On post treatment day(1,2,and 3 weeks),the healing condition of ulcer,and the level of vascular endothelial growth factor(VEGF)in the serum were detected.Results During the 35-day treatment,for the peripheral curculatory diaorders group,the plantar temperatures in the observation group were significantly higher than that in the control group(P＜0.05),while the hot pain thresholds in the observation group were significantly lower than that in the control group(P＜0.05);For the ulcer group,the level of VEGF and the healing condition of ulcer in the observation group were significantly higher than that in the control group(P＜0.05).Conclusion Silver sulfadiazine combined with aloes burn cream can improve the plantar temperature and pain dysesthesia of rats caused by diabetic peripheral circulatory disorders,and promote the wound healing of diabetic foot ulcers in rats with up-regulation of VEGF,which has the certain guiding value for clinical work.

Diabetic foot;Ulcer;Peripheral curculatory diaorders;Vascular endothelial growth factor(VEGF);Silver sulfadiazine;Aloes burn cream

R-332

A

1003—6350（2017）19—3102—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.19.003

邰賀。E-mall:www.tai_he83@126.com。

2016-12-02)