劉宏 胡倫文 李玉杰 李濤

[摘要] 目的 對一起疑似霍亂疫情的病原菌進(jìn)行實驗室檢測。方法 按照《霍亂防治手冊》（第六版）對采集的480份標(biāo)本進(jìn)行霍亂弧菌檢測。結(jié)果 O139霍亂弧菌血清凝集試驗陽性的標(biāo)本共16份，其中患者糞便（或肛拭）標(biāo)本共10份，外環(huán)境樣品6份。結(jié)論 這起疫情是一起因聚餐引起的霍亂O139暴發(fā)疫情。

[關(guān)鍵詞] 霍亂；實驗室檢測；暴發(fā)；疫情

[中圖分類號] R254.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2017）06（b）-0053-02

霍亂是由O1群或O139群霍亂弧菌引起的急性腸道傳染病，該病發(fā)病急，傳播快，波及范圍廣，能引起大范圍流行，屬甲類傳染病。湖北省松滋市位于湖北省中南部，處于平原與丘陵結(jié)合地區(qū)，2012年8月曾發(fā)生一起輸入性霍亂疫情，疫情的發(fā)生主要跟食用被霍亂弧菌污染的水產(chǎn)品，特別是甲魚有關(guān)[1-2]。2016年10月5日8時，松滋市疾控中心接到市人民醫(yī)院電話報告一例疑似霍亂病例。疾控中心立即組織相關(guān)專業(yè)人員趕赴現(xiàn)場核實調(diào)查處理并收集患者標(biāo)本進(jìn)行復(fù)核，復(fù)核鑒定結(jié)果為O139群霍亂弧菌陽性，毒力基因CTX陽性。截止10月14日，該起暴發(fā)疫情累計報告病例10例（其中健康帶菌者2例），所有病例均來自陳店鎮(zhèn)夾馬槽村婚宴就餐者。結(jié)合流行病學(xué)特征，臨床表現(xiàn)和實驗室檢測結(jié)果綜合分析，確定這是一起因聚餐引起的霍亂O139暴發(fā)疫情。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 采樣器材 10 mL堿胨水管、含50 mL 10倍濃縮堿胨水的廣口瓶，500 mL無菌廣口瓶，一次性無菌采樣袋，肛拭采樣器，無菌棉簽，一次性紙杯，酒精燈，滅菌規(guī)格板（5 cm2），10 mL復(fù)方中和劑管，10 mL無菌生理鹽水管等。

1.1.2 檢測試劑 堿性蛋白胨水增菌液，慶大霉素瓊脂培養(yǎng)基，TCBS瓊脂，O1、O139群霍亂弧菌檢測膠體金試劑，O1、O139群霍亂弧菌診斷血清，氧化酶試劑，革蘭氏染液，營養(yǎng)瓊脂，以上試劑均在有效期內(nèi)使用。

1.2 方法

1.2.1 檢測標(biāo)準(zhǔn) 對采集的所有標(biāo)本均嚴(yán)格按照《霍亂防治手冊》[3]（第六版）進(jìn)行病

原學(xué)檢測。

1.2.2 采樣方法 （1）糞便、嘔吐物：用棉簽取適量于10 mL堿胨水管。無糞便標(biāo)本可采集肛拭，將棉拭子插入患者直腸內(nèi)3～5 cm，旋轉(zhuǎn)360°，置于堿胨水管中，棄去手接觸的部分。（2）水體標(biāo)本：①鹽水瓶法：采集30 cm深度以內(nèi)的表層水450 mL置于含50 mL 10倍濃縮堿胨水瓶中。②moore紗布集菌法：將紗布放在水中，放置24 h后，將帶水的紗布放入堿胨水瓶中送檢。③食品：針對不同的可疑食品，取適量于無菌采樣袋中，注意采集過程中不能交叉污染。④海（水）產(chǎn)品：選取海（水）產(chǎn)品或涂抹拭子，置于無菌采樣袋或試管中送檢。⑤物體表面：用滅菌棉拭子蘸取堿胨水后涂擦相關(guān)污染物體表面，放入堿胨水管中。消毒效果監(jiān)測采樣：將滅菌棉簽潤濕后用無菌規(guī)格板采集100 cm2的污染物表面，放入采樣管中送檢。

1.2.3 標(biāo)本種類及數(shù)量 患者糞便或肛拭標(biāo)本63份，病例家居外環(huán)境樣品（主要是廁所糞便和水樣）47份，參加集中就餐人員肛拭樣品61份，密切接觸者肛拭樣品29份，食品、水產(chǎn)品（甲魚、基尾蝦等）16份，物表樣品14份，消毒效果監(jiān)測樣品120份，醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)急監(jiān)測腹瀉病例排泄物標(biāo)本130份，合計480份。

1.2.4增菌、分離培養(yǎng) ①增菌。將標(biāo)本接種于堿胨水中置37℃培養(yǎng)6～8 h，注意觀察增菌液生長情況，增菌時間也可適當(dāng)延長。當(dāng)標(biāo)本含菌量較少時，如患者恢復(fù)期檢測、帶菌狀況調(diào)查，為提高檢出率，可進(jìn)行二次增菌。水體（包括食品、海水產(chǎn)品、物表涂抹標(biāo)本等）必要時也可進(jìn)行二次增菌。②劃線分離、金標(biāo)快檢。取適量表層增菌液接種于慶大霉素平板和TCBS平板，置37℃培養(yǎng)18～24 h；同時取增菌液用霍亂弧菌O1和O139快檢金標(biāo)試紙進(jìn)行初步的篩查試驗，為檢測贏得時間和提供下一步檢測方向。③菌落形態(tài)。霍亂弧菌菌落為圓形、半透明、表面光滑、扁平、邊緣整齊。慶大霉素平板上菌落為無色，TCBS瓊脂上菌落為黃色。

1.2.5 菌株鑒定 ①形態(tài)與染色。對可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，為革蘭氏陰性短小稍彎曲的桿菌，無芽孢，無莢膜，菌體兩端鈍圓或稍平。②氧化酶試驗。用滅菌木質(zhì)牙簽挑取24 h生長純培養(yǎng)菌落涂抹在氧化酶試紙上，觀察顏色變化，1～2 min內(nèi)出現(xiàn)黑紫色為陽性，不變色為陰性。③血清凝集。分別取霍亂O1多價、O139群診斷血清一滴于潔凈玻片上，然后挑取少許單個純培養(yǎng)可疑菌落與標(biāo)準(zhǔn)血清混合，1 min內(nèi)出現(xiàn)凝集為陽性，同時用生理鹽水做對照。④動力試驗。取純培養(yǎng)物在暗視野顯微鏡下觀察霍亂弧菌呈穿梭樣運(yùn)動。

1.3 藥敏試驗

該實驗室不能開展藥敏試驗，該試驗由省疾控衛(wèi)檢所協(xié)助完成。

2 結(jié)果

①因為松滋市此起霍亂疫情為湖北省2016年首發(fā)疫情，必須將首發(fā)病例標(biāo)本送至湖北省疾控中心衛(wèi)檢所復(fù)核鑒定。鑒定結(jié)果如表1。

②病原菌株藥敏試驗結(jié)果。該病原菌株對慶大霉素、阿奇霉素、氯霉素耐藥；氨芐西林、頭孢他啶中介；氨芐西林、頭孢唑啉、頭孢噻肟、紅霉素、環(huán)丙沙星、甲氧芐啶等敏感。

③經(jīng)實驗室檢測，O139霍亂弧菌血清凝集試驗陽性的標(biāo)本共16份，其中患者糞便（或肛拭）標(biāo)本共10份（含健康帶菌者2例），外環(huán)境樣品6份。6份外環(huán)境陽性標(biāo)本分別為婚宴東家消毒前廁所糞便、3例確診病例家中化糞池、廁所糞便消毒前標(biāo)本。其余的環(huán)境標(biāo)本、食品、密切接觸者標(biāo)本和腹瀉病例應(yīng)急檢測等結(jié)果均為陰性。

3 討論

該起霍亂暴發(fā)疫情涉及范圍廣，人數(shù)多，包含松滋市5個鄉(xiāng)鎮(zhèn)，陳店鎮(zhèn)168名、老城鎮(zhèn)27名、沙道觀鎮(zhèn)1名、新江口鎮(zhèn)19名、八寶鎮(zhèn)2名，還有沙市5名，宜昌6名，合計228名。在共同就餐人員中檢索出2例健康帶菌者，通過及時發(fā)現(xiàn)，及時采取隔離措施，為防止疫情的蔓延起到了積極的作用。在此次霍亂疫情應(yīng)急處置中，正是檢驗人員有條不紊、夜以繼日的辛苦付出，還有荊州市和省級疾控中心實驗室各級領(lǐng)導(dǎo)們的專業(yè)指導(dǎo)和技術(shù)支撐，在最短時間內(nèi)報告檢測結(jié)果，使得松滋市政府及時啟動突發(fā)公共衛(wèi)生事件四級應(yīng)急響應(yīng)，為疫情的聯(lián)防聯(lián)控、及時控制傳染源，切斷傳播途徑、防止疫情的蔓延起到了重要的作用。該次霍亂暴發(fā)疫情無死亡病例，無二代病例發(fā)生。

3.1 傳染源情況不明

病例和帶菌者均來自陳店鎮(zhèn)夾馬槽村9月30日—10月1日的婚宴。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，懷疑該次婚宴菜單中基圍蝦污染可能是該起疫情的主要原因。經(jīng)調(diào)查了解：基圍蝦在9月30日下午清洗干凈，水煮沸后放入鍋中焯水5 min撈出，配調(diào)料后上桌，供應(yīng)30日、1日2 d，放在冰箱保存。首發(fā)病例自述10月1日晚將晚宴桌席剩余的基圍蝦打包放冰箱后第2天沒有加熱就一次性吃完，1 d后發(fā)病，惡心嘔吐，腹瀉十余次到醫(yī)院就診。由于時隔多日，無法采集到當(dāng)日婚宴剩余的基圍蝦，前后兩次在基圍蝦采購點(diǎn)（水產(chǎn)品批發(fā)市場）采集基圍蝦、養(yǎng)殖水、物表等相關(guān)標(biāo)本，均未檢出霍亂弧菌，無法確定傳染源，但流行病學(xué)調(diào)查表明是聚餐時感染，這和羅同勇[4]所述一致。湖北省疾控中心衛(wèi)檢所反饋，該起疫情分離株經(jīng)溯源分析，在國家數(shù)據(jù)庫中未發(fā)現(xiàn)相似株。

3.2 加強(qiáng)食品安全督導(dǎo)檢查

十月初為國慶小長假，居民探親訪友、旅游出行等聚餐需求大量增加，同時該月為婚禮宴請高峰期，餐飲服務(wù)衛(wèi)生條件、食品質(zhì)量安全難以適應(yīng)消費(fèi)要求。通過該次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，松滋市本地農(nóng)村自辦宴席，加工食品場地衛(wèi)生條件差，加上缺乏有效的監(jiān)管，食品在生產(chǎn)、加工、貯存和消費(fèi)環(huán)節(jié)容易被污染[5]，所以要加強(qiáng)農(nóng)村食品衛(wèi)生安全檢查與管理，廣泛開展健康教育宣傳，提高農(nóng)村居民自我防病防疫意識，特別是要加強(qiáng)農(nóng)村自辦宴席的監(jiān)管，從源頭上減少此類事件的發(fā)生。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 丁曉莉，李文橋，喻同琦，等.一起O139群霍亂疫情的調(diào)查[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，25（2）：99-100.

[2] 邱興慶，吳家兵，高永軍，等.一起聚餐所致O139霍亂疫情和甲魚市場調(diào)查[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2013，20（2）：171-174.

[3] 肖東樓.霍亂防治手冊[M].6版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.

[4] 羅同勇，余濱，艾運(yùn)生，等.武漢市2008年一起霍亂O139型疫情的應(yīng)急處置經(jīng)過[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（3）：544-546.

[5] 周建波，黃竹林，張勁夫.長沙市農(nóng)村四起聚餐霍亂暴發(fā)疫情調(diào)查分析[J].實用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，11（3）：528-529.

（收稿日期：2017-03-16）