張 灼， 朱杰寧， 肖 珍， 胡志琴， 唐春梅， 符永恒， 林秋雄， 吳書林， 杜 昶， 單志新△

(1華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院， 廣東 廣州510632； 2 廣東省心血管病研究所，廣東省人民醫(yī)院， 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院, 廣東 廣州 510080)

微小RNA-199a-5p通過靶向SIRT1促進(jìn)心肌纖維化相關(guān)基因表達(dá)*

張 灼1,2， 朱杰寧2， 肖 珍2， 胡志琴2， 唐春梅2， 符永恒2， 林秋雄2， 吳書林2， 杜 昶1， 單志新1,2△

(1華南理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院， 廣東 廣州510632；2廣東省心血管病研究所，廣東省人民醫(yī)院， 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院, 廣東 廣州 510080)

目的研究微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)對(duì)心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用及其可能作用的靶基因。方法原代分離并體外培養(yǎng)成體C57BL/6小鼠心肌成纖維細(xì)胞；雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)miR-199a-5p與潛在靶基因沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1) 3’端非翻譯區(qū)(3’-UTR)的結(jié)合作用；實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分別檢測(cè)SIRT1以及纖維化標(biāo)志物膠原蛋白(Col)1a1、Col3a1和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果在血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中，Col1a1、Col3a1和α-SMA的表達(dá)增強(qiáng)，miR-199a-5p表達(dá)上調(diào)。在心肌成纖維細(xì)胞中過表達(dá)miR-199a-5p可以增強(qiáng)Col1a1、Col3a1和α-SMA的表達(dá)。雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示miR-199a-5p與SIRT1 3’-UTR有結(jié)合作用。RT-qPCR和Western blot結(jié)果證實(shí)miR-199a-5p可在轉(zhuǎn)錄水平抑制SIRT1表達(dá)。過表達(dá)miR-199a-5p和沉默SIRT1均能一致性促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞中Col1a1、Col3a1和α-SMA的表達(dá)。抑制AngⅡ誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中NF-κB激活，可顯著降低miR-199a-5p表達(dá)。結(jié)論SIRT1是miR-199a-5p的作用靶基因，并介導(dǎo)miR-199a-5p促進(jìn)纖維化標(biāo)志物Col1a1、Col3a1和α-SMA的表達(dá)。

心肌纖維化； 成纖維細(xì)胞； 微小RNA-199a-5p； 沉默信息調(diào)節(jié)因子1

心肌纖維化是一系列常見急性和慢性心肌疾病的特征之一[1]，其主要的病理特征為過度細(xì)胞外基質(zhì)沉積，最終導(dǎo)致心肌僵硬、心臟重構(gòu)乃至心力衰竭[2]。研究表明，細(xì)胞外基質(zhì)不僅充當(dāng)著細(xì)胞的支撐組織結(jié)構(gòu)，同時(shí)扮演著將促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移和分化的生長(zhǎng)因子及生物活性分子與細(xì)胞隔絕的角色[3]。過多的膠原和細(xì)胞外基質(zhì)沉積會(huì)損害心肌細(xì)胞和心肌成纖維細(xì)胞的正常功能。心肌成纖維細(xì)胞受外界刺激后會(huì)向肌成纖維細(xì)胞分化，分泌富含膠原的細(xì)胞外基質(zhì)和促纖維化細(xì)胞因子(如TGF-β1)[4]?？偟膩碚f，目前對(duì)心肌纖維化的研究還不夠深入，相關(guān)的病理機(jī)理仍不清楚，尚無有效的針對(duì)心肌纖維化的治療方法。

微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是一類大約22個(gè)堿基組成的RNA。其主要作用機(jī)制是與靶基因mRNA 3’端非編碼區(qū)(3’-untranslated region， 3’-UTR)序列相互識(shí)別配對(duì)，通過調(diào)節(jié)靶基因的脫腺苷化、降解目標(biāo)基因、抑制目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄等途徑，來實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因表達(dá)的調(diào)控[5]。心肌細(xì)胞過度分泌細(xì)胞外基質(zhì)是導(dǎo)致心肌纖維化的一個(gè)重要因素，已有報(bào)道多種miRNA參與調(diào)控了心肌成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變的過程。例如，通過過表達(dá)miR-24前體方式上調(diào)心肌成纖維細(xì)胞中miR-24表達(dá)，可抑制纖維化相關(guān)基因表達(dá)，同時(shí)抑制心肌成纖維細(xì)胞移動(dòng)和向肌成纖維細(xì)胞分化[6]。而miR-133a/miR-30c、miR-29、miR-214-3p和miR-208a分別通過作用靶基因CTGF、MMP-2、EZH1/2和TGF-β1，發(fā)揮抑制心肌纖維化的作用[7-11]。

本文將研究miR-199a-5p在血管緊張素II(angiotensin II，Ang II)處理的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)纖維化相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用，旨在明確miR-199a-5p的作用靶基因，以及參與Ang II調(diào)控小鼠心肌成纖維細(xì)胞miR-199a-5p表達(dá)的信號(hào)通路。

材 料 和 方 法

1主要試劑

限制性內(nèi)切酶XhoI和EcoR I、轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine 2000、Trizol、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及4×SDS loading buffer(Invitrogen)；2×SYBR Green Mix和無RNA酶水(TaKaRa)；miR-199a-5p mimic和沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator，SIRT1) siRNA(廣州銳博)；BCA蛋白定量試劑盒(Thermo)；SDS-PAGE凝膠配制試劑盒(碧云天)； GAPDH抗體、膠原蛋白(collagen，Col)1a1抗體和Col3a1抗體(Protein Technology)；α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)抗體(Abcam)；SIRT1、P65和p-P65抗體(Sigma)；蛋白Marker(Fermentas)；PVDF膜(Whatman)；ECL發(fā)光液(Millipore)；DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基(HyClone)；特級(jí)澳洲胎牛血清和0.25% EDTA-胰蛋白酶(Gibco)。其它生化試劑均為進(jìn)口分裝或國產(chǎn)分析純。

2主要方法

2.1小鼠心肌成纖維細(xì)胞原代分離培養(yǎng)和處理 將出生3～4周SPF級(jí)C57BL/6小鼠心臟以0.25% EDTA-胰蛋白酶消化法分離細(xì)胞。離心棄去上清液，沉淀用完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、1×105U/L 青霉素和100 mg/L 鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基)重懸浮，接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，再置于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)24 h后，更換1次完全培養(yǎng)基。傳代到第3代分別將100 nmol/L 無序siRNA對(duì)照(scramble)、miR-199a-5p mimic或SIRT1 siRNA轉(zhuǎn)染到小鼠心肌成纖維細(xì)胞中，24 h后結(jié)束實(shí)驗(yàn)。

2.2RT-qPCR檢測(cè)SIRT1以及纖維化標(biāo)志物Col1a1、Col3a1和α-SMA表達(dá)情況 用Trizol法提取心肌成纖維細(xì)胞總RNA。取1.5 μg總RNA，加入5×逆轉(zhuǎn)錄試劑4 μL(逆轉(zhuǎn)錄試劑盒)，用Oligo(dT)15和random primers逆轉(zhuǎn)錄出cDNA,用于檢測(cè)SIRT1、Col1a1、Col3a1及α-SMA的 mRNA水平(GAPDH為內(nèi)參照)。取1.0 μg總RNA，用miR-199a-5p特異的逆轉(zhuǎn)錄引物逆轉(zhuǎn)錄出cDNA，用于檢測(cè)miR-199a-5p水平(U6為內(nèi)參照)。所用引物序列見表1。在ViiA 7 Quantitative PCR System(Applied Biosystems)進(jìn)行PCR反應(yīng)和結(jié)果分析。以2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)水平。

2.3Western blot法檢測(cè)蛋白水平 收集處理后的心肌成纖維細(xì)胞，加入RIPA蛋白裂解液，冰上裂解，于4 ℃、12 000 r/min離心15 min，取上清蛋白質(zhì)定量后分裝，加入4×SDS上樣緩沖液，99 ℃加熱10 min使蛋白質(zhì)變性，然后進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。用PVDF膜轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，分別用相應(yīng)的Ⅰ抗Col1a1(1∶1 000)、Col3a1(1∶5 000)、α-SMA(1∶5 000)和SIRT1(1∶1 000)4 ℃孵育過夜。TBST洗膜后，加入相應(yīng)Ⅱ抗(1∶5 000)室溫孵育1 h。ECL發(fā)光試劑盒顯影，以GAPDH(1∶5 000)為內(nèi)參照，掃描灰度值并分析蛋白表達(dá)相對(duì)含量。

表1 RT-qPCR引物序列

F: forward; R: reverse; RT: reverse transcription.

2.4雙螢光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-199a-5p與SIRT1 3’-UTR的結(jié)合作用 參照我們已報(bào)道方法[11]分別構(gòu)建包含miR-199a-5p潛在結(jié)合序列的SIRT1 3’-UTR重組螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒pGL3-SIRT1-451-457及包含結(jié)合序列突變的重組質(zhì)粒pGL3-SIRT1-451-457-MUT。將HEK293細(xì)胞(細(xì)胞密度約為每孔1×105)轉(zhuǎn)染200 ng重組螢光素酶報(bào)告質(zhì)粒、100 nmol miR-199a-5p mimic及10 ng pRL-TK(表達(dá)海腎螢光素酶的內(nèi)參照質(zhì)粒)。轉(zhuǎn)染后24 h，測(cè)定螢火蟲螢光素酶及海腎螢光素酶的發(fā)光強(qiáng)度，兩者比值的變化可反映miR-199a-5p與SIRT1 3’-UTR結(jié)合的能力。

3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SEM)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，并用Bonferroni校正的t檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1miR-199a-5p在AngII誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中的表達(dá)

RT-qPCR結(jié)果顯示，用Ang II處理的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中，纖維化標(biāo)志物Col1a1、Col3a1和α-SMA mRNA水平顯著升高(P<0.05或P<0.01)，同時(shí)miR-199a-5p的水平也顯著升高(P<0.01)，見圖1。

Figure 1. miR-199a-5p was up-regulated in AngⅡ-treated car-diac fibroblasts. A： the mRNA expression levels of Col1a1， Col3a1 and α-SMA in Ang Ⅱ-treated cardiac fibroblasts were detected by RT-qPCR； B： the expression of miR-199a-5p was detected in cardiac fibroblasts treated with AngⅡ. Mean±SEM.n=3.*P<0.05,**P<0.01vscontrol group.

圖1miR-199a-5p在AngII誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中表達(dá)增強(qiáng)

2miR-199a-5p促進(jìn)小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)

為了明確過表達(dá)miR-199a-5p對(duì)纖維化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響，我們將100 nmol miR-199a-5p mimic轉(zhuǎn)染入C57BL/6小鼠來源的心肌成纖維細(xì)胞中。RT-qPCR結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-199a-5p mimic的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中miR-199a-5p水平顯著升高(P<0.01)，見圖2A。Western blot檢測(cè)顯示，miR-199a-5p mimic過表達(dá)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中，纖維化相關(guān)蛋白Col1a1、Col3a1和α-SMA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)，見圖2B。

Figure 2. miR-199a-5p enhanced the expression of fibrosis-related proteins in cardiac fibroblasts. A： the expression of miR-199a-5p was determined by RT-qPCR； B： the expression of fibrosis-related proteins was determined by Western blot. Mean±SEM.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsscramble group.

圖2miR-199a-5p促進(jìn)小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)

3SIRT1介導(dǎo)miR-199a-5p促進(jìn)小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)

基于miRDB(www.mirdb.org)及TargetScan(www.targetscan.org)的序列分析提示，SIRT1 3’-UTR的451～457堿基可能是miR-199a-5p的結(jié)合位點(diǎn)。雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，miR-199a-5p可特異地結(jié)合到SIRT1 3’-UTR的451～457位點(diǎn)，而突變結(jié)合區(qū)域的序列后，miR-199a-5p就不能與SIRT1 3’-UTR結(jié)合，見圖3A。RT-qPCR和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在miR-199a-5p mimic過表達(dá)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中，SIRT1的mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低，提示miR-199a-5p可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控SIRT1的表達(dá)，見圖3B。Western blot檢測(cè)證實(shí)，SIRT1 siRNA和miR-199a-5p mimic可顯著降低小鼠心肌成纖維細(xì)胞中SIRT1表達(dá)，同時(shí)能一致性地升高纖維化相關(guān)蛋白Col1a1、Col3a1和α-SMA表達(dá)，見圖3C。

4NF-κB信號(hào)分子介導(dǎo)AngII上調(diào)心肌成纖維細(xì)胞中miR-199a-5p表達(dá)

Western blot檢測(cè)顯示，Ang II處理小鼠心肌成纖維細(xì)胞10 min和20 min后，細(xì)胞中磷酸化NF-κB p65水平顯著升高，見圖4A。RT-qPCR結(jié)果顯示，利用NF-κB抑制劑JSH23和QNZ可有效抑制Ang II上調(diào)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞miR-199a-5p表達(dá)，見圖4B。同樣，采用RNA干擾技術(shù)沉默NF-κB p65的表達(dá)，也可有效抑制Ang II上調(diào)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞miR-199a-5p表達(dá)，見圖4C。

討 論

近期研究表明，miR-199a-5p在發(fā)生房顫、心肌梗死和心肌肥厚的小鼠心肌中表達(dá)上調(diào)[12-15]。機(jī)制研究表明，過氧化物酶體增殖物活化受體協(xié)同刺激因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ coactivator-1α，PGC-1α)是miR-199a-5p的作用靶點(diǎn)，PGC-1α在miR-199a-5p修飾的H9c2細(xì)胞中表達(dá)降低，導(dǎo)致ATP能量代謝受損[16]。在糖尿病腎病中的研究發(fā)現(xiàn)，高葡萄糖可促進(jìn)miR-199a-5p表達(dá)，進(jìn)而激活NF-κB信號(hào)分子，促進(jìn)腎小球膜細(xì)胞的炎癥和纖維化[17]。但miR-199a-5p在心肌纖維中的作用機(jī)制尚未完全闡明。

在本文中，我們證實(shí)miR-199a-5p在Ang II誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中表達(dá)升高。雙螢光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)提示miR-199a-5p能與SIRT1 3’-UTR特異性結(jié)合，并證實(shí)miR-199a-5p可在mRNA和蛋白水平抑制心肌成纖維細(xì)胞中SIRT1表達(dá)，說明miR-199a-5p在轉(zhuǎn)錄水平抑制SIRT1表達(dá)。進(jìn)一步研究表明，miR-199a-5p和SIRT1 siRNA可一致性地促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞纖維化相關(guān)基因表達(dá)。因此，上述結(jié)果證實(shí)SIRT1是miR-199a-5p的靶基因，并介導(dǎo)了miR-199a-5p促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因表達(dá)的作用。本文與以往在神經(jīng)元[18]和內(nèi)皮細(xì)胞[19]中的研究發(fā)現(xiàn)SIRT1介導(dǎo)miR-199a-5p發(fā)揮生物學(xué)作用的報(bào)道一致。

Figure 3. miR-199a-5p andSIRT1 siRNA increased the expression of fibrosis-related proteins in cardiac fibroblasts. A： dual-luciferase assay； B： SIRT1 mRNA and protein expression in cardiac fibroblasts transfected with miR-199a-5p mimic； C： the protein expression of Col1a1, Col3a1, α-SMA and SIRT1 in cardiac fibroblasts transfected with miR-199a-5p mimic orSIRT1 siRNA. Mean±SEM.n=3.#P<0.05vsPGL3-promoter group；*P<0.05,**P<0.01vsscramble group.

圖3SIRT1介導(dǎo)miR-199a-5p促進(jìn)小鼠心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)

SIRT1被稱為長(zhǎng)壽蛋白，其所在的sirtuin家族被證實(shí)具有延緩細(xì)胞衰老的功能[20]。這一家族包括SIRT1～7，具有明顯的細(xì)胞內(nèi)分布特異性，其中SIRT1主要分布在細(xì)胞核中，在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜上只有少量分布[21]。研究顯示，SIRT1能夠調(diào)節(jié)老鼠心肌細(xì)胞生長(zhǎng)、存活，在SIRT1表達(dá)上調(diào)時(shí)，能夠延緩老鼠的衰老[22]；白藜蘆醇可激活SIRT1減輕外界刺激，延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，降低心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因的表達(dá)[23-24]。本文結(jié)果表明，SIRT1在Ang II誘導(dǎo)的小鼠心肌成纖維細(xì)胞中特異性地表達(dá)下調(diào)，而抑制心肌成纖維細(xì)胞中SIRT1表達(dá)可增強(qiáng)纖維化相關(guān)基因的表達(dá)。本文結(jié)果與以往關(guān)于SIRT1具有抑制心肌纖維化作用的報(bào)道一致[24]。

Figure 4. NF-κB signaling pathway mediated the up-regulation of miR-199a-5p in Ang II-induced cardiac fibroblasts. A： activation of NF-κB signaling in AngⅡ-treated cardiac fibroblasts detected by Western bolt； B： the expression of miR-199a-5p in AngⅡ-induced cardiac fibroblasts pre-treated with NF-κB inhibitor JSH23 or QNZ； C： the expression of miR-199a-5p in cardiac fibroblasts transfected with NF-κB p65 siRNA (si-NF-κB p65). Mean±SEM.n=3.**P<0.01vs0 min；△△P<0.01vscontrol；#P<0.05vsAng II；▲▲P<0.01vsscramble.

圖4NF-κB信號(hào)分子介導(dǎo)AngII上調(diào)miR-199a-5p表達(dá)

我們發(fā)現(xiàn)在Ang II處理的心肌成纖維細(xì)胞中miR-199a-5p表達(dá)上調(diào)，并伴隨NF-κB信號(hào)分子激活。利用NF-κB抑制劑(JSH23和QNZ)或沉默NF-κB p65能夠顯著降低miR-199a-5p的表達(dá)。因此，NF-κB信號(hào)分子在Ang II誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞中激活，并介導(dǎo)了Ang II誘導(dǎo)的miR-199a-5p表達(dá)上調(diào)。

綜上所述，本文證實(shí)Ang II通過激活NF-κB信號(hào)分子，增加心肌成纖維細(xì)胞中miR-199a-5p表達(dá)；SIRT1是miR-199a-5p的作用靶基因，介導(dǎo)miR-199a-5p發(fā)揮促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞中纖維化相關(guān)基因表達(dá)的作用。在后續(xù)研究中，我們將在整體動(dòng)物水平，進(jìn)一步明確miR-199a-5p對(duì)SIRT1表達(dá)和對(duì)心肌纖維化的調(diào)控作用。

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

miR-199a-5penhancesexpressionofmyocardialfibrosis-relatedgenesbytargetingSIRT1

ZHANG Zhuo1,2, ZHU Jie-ning2, XIAO Zhen2, HU Zhi-qin2, TANG Chun-mei2, FU Yong-heng2, LIN Qiu-xiong2, WU Shu-lin2, DU Chang1, SHAN Zhi-xin1,2

(1SchoolofMedicine,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510632,China;2GuangdongCardiovascularinstitute,GuangdongGeneralHospital,GuangdongAcademyofMedicalSciences,Guangzhou510080,China.E-mail:zhixinshan@aliyun.com)

AIM: To investigate the role of microRNA (miR)-199a-5p in myocardial fibrosis and the potential target of miR-199a-5p.METHODSC57BL/6 mouse cardiac fibroblasts were isolated and cultured for cellular experimental study. Dual-luciferase reporter assay was performed to confirm the interaction between miR-199a-5p and the 3’-untranslated region (3’-UTR) of silent information regulator 1 (SIRT1). The expression of SIRT1 and fibrosis markers collagen (Col) 1a1, Col3a1 and α-smooth muscle actin (α-SMA) at mRNA and protein levels was determined by RT-qPCR and Western blot, respectively.RESULTSThe expression levels of miR-199a-5p， Col1a1, Col3a1 and α-SMA were markedly increased in cardiac fibroblasts after treatment with angiotensin Ⅱ (AngⅡ). The over-expression of miR-199a-5p significantly increased the expression of Col1a1, Col3a1 and α-SMA in cardiac fibroblasts. Moreover, the results of dual-luciferase reporter assay revealed that miR-199a-5p interacted with the 3’-UTR ofSIRT1. miR-199a-5p inhibited SIRT1 expression at post-transcriptional level. Meanwhile, miR-199a-5p mimic, in parallel toSIRT1 siRNA, inhibited SIRT1 expression, increased the expression of Col1a1, Col3a1 and α-SMA in cardiac fibroblasts. Inactivation of NF-κB signaling contributed to the decrease in miR-199a-5p in Ang II-treated cardiac fibroblasts.CONCLUSIONSIRT1 is a target gene of miR-199a-5p, which mediates the pro-fibrotic effect of miR-199a-5p on cardiac fibroblasts.

Myocardial fibrosis; Fibroblasts; MicroRNA-199a-5p; Silent information regulator 1

R363.2+1

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.10.008

1000- 4718(2017)10- 1781- 07

2017- 03- 07

2017- 05- 24

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81470439； No. 91649109; No. 81770264)；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究項(xiàng)目(No. 2014A030313635； No. 2013B022000083； No. A2015187)

△通訊作者 Tel: 020-83827812-51158； E-mail: zhixinshan@aliyun.com

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