謝躍鵬 周志虹 張孝靜

浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院 浙江 杭州 310005

金絲桃苷對誘導(dǎo)骨肉瘤細胞成骨分化的影響*

謝躍鵬 周志虹#張孝靜

浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第三醫(yī)院 浙江 杭州 310005

金絲桃苷 骨肉瘤 成骨分化

骨肉瘤是一種惡性結(jié)締組織腫瘤，據(jù)統(tǒng)計其發(fā)病率在原發(fā)性惡性骨腫瘤中占據(jù)首位。該腫瘤惡性程度甚高，預(yù)后極差，特點是肺部轉(zhuǎn)移早[1]。金絲桃苷（Hyperoside）又名槲皮素[2]，屬于黃酮醇苷類化合物，廣泛存在于各種植物體內(nèi)。研究發(fā)現(xiàn)，金絲桃苷能夠抑制多種腫瘤細胞。本研究進一步探討金絲桃苷在抑制骨肉瘤細胞增殖后對骨肉瘤誘導(dǎo)分化的影響。

1 資料與方法

1.1 細胞和試劑：人骨肉瘤U2OS和MG63細胞株購自上海生物化學(xué)與細胞生物學(xué)研究所。細胞株在RPMI-1640或DMEM培養(yǎng)基中加10%加熱去活化的胎牛血清，并在5%CO2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)。同時加入青霉素（100U/ml）和鏈霉素（100U/ml）。金絲桃苷從澤朗生物科技有限公司購買，并且溶解在二甲基亞砜（DMSO）中。

1.2 實驗方法和觀察指標(biāo)：采用體外細胞培養(yǎng)技術(shù)，將C50濃度金絲桃苷分別加入U2OS和MG63兩組細胞中，采用蛋白質(zhì)印記（Western blotting）法測定骨橋蛋白、RUNX2蛋白在兩組細胞培養(yǎng)第3、5、7天的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS16.0軟件錄入數(shù)據(jù)并進行統(tǒng)計學(xué)分析，所有計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組細胞中骨橋蛋白表達水平：加入C50濃度的金絲桃苷后，兩組細胞在開始和培養(yǎng)第3、5、7天骨橋蛋白表達均有明顯增長，且隨著時間的延長，U2OS組表達量呈上升趨勢，而MG63組在第5天之后表達量達到峰值并出現(xiàn)下降趨勢。兩者相比較，U2OS組中骨橋蛋白增長趨勢明顯優(yōu)于MG63組（P＜0.05）。見圖1。

2.2 兩組細胞中RUNX2蛋白表達水平：加入金絲桃苷后，兩組在上述4個時段RUNX2蛋白表達均有明顯增長，U2OS組在第7天時達到峰值，MG63組在第5天時已達到峰值并到第7天時維持穩(wěn)定水平。兩組比較，RUNX2蛋白最終表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2。

圖1 兩組骨橋蛋白表達水平

圖2 兩組RUNX2蛋白表達水平

3 討論

低分化是骨肉瘤最主要的特征之一，針對這一特性，基于細胞非毒性誘導(dǎo)骨肉瘤細胞成骨分化的途徑可能是一個治療的新方向。骨橋蛋白存在于正常體液以及軟骨內(nèi)化骨、膜內(nèi)化骨區(qū)域。有研究表明，成骨細胞的分化和礦化組織的重建可被骨橋蛋白誘導(dǎo)和促進[3]。Enomoto等[4]發(fā)現(xiàn)RUNX2缺陷的小鼠膜內(nèi)和軟骨內(nèi)骨化成骨均不能發(fā)生，證實RUNX2是成骨細胞分化所必需的因子。本實驗結(jié)果表明，金絲桃苷能夠在多層次調(diào)控骨肉瘤增殖分化的信號調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮作用，可能是通過顯著激活骨橋蛋白和RUNX2蛋白的表達，從而誘導(dǎo)骨肉瘤向成骨方向分化。

[1]Tang N,Song W X,Luo J Y，et al.Osteosarcoma development and stem celldifferentiation[J].Cl in Or thop Relat Res,2008,466(9)：2114-2130.

[2]Li Z L,Hu J,Li Y L,et al.The effect of hyperoside on the functional recovery of the ischemic/reper fused isolated rat hear t:potential involvement of the ext racel lular signal-regulated kinase 1/2 signaling pathway[J].Free Radic Biol Med,2013，57（4）：132-140.

[3]王立平,黨耕町.骨橋蛋白在骨愈合過程中的基因表達[J].北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,1998,30(4)：355-357.

[4]Enomoto H,Furuichit T,Zanma A,et al.Runx2 def iciency in chondrocytes causes adipogenic changes in vit ro[J].J CellSci,2004,117(3)：417-425.

2017-06-28

浙江省公益性技術(shù)應(yīng)用研究計劃建議項目金絲桃苷抗骨肉瘤細胞增殖的作用及其機制研究，編號：2014C33218

# 通訊作者：周志虹，E-mai l：421522908@qq.com