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(北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,食品加工與安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100083)

黑果腺肋花楸原花青素的純化及表兒茶素和原花青素B2含量測(cè)定

朱月,張海平+,侯亞男,安建輝,封曉茹,溫馨亞,李騰,孫愛(ài)東*

(北京林業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,食品加工與安全北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京 100083)

本文研究AB-8型大孔樹(shù)脂對(duì)黑果腺肋花楸原花青素粗提物的吸附和解吸特性,并利用高效液相色譜法測(cè)定原花青素純化物中表兒茶素和原花青素B2含量。結(jié)果表明，上樣溶液濃度4 mg/mL,吸附流速2 BV/h,解吸液乙醇濃度為50%,得到純化物中原花青素含量為14.29%;高效液相色譜法采用Aglient Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以甲醇(A)-水(B)為流動(dòng)相梯度洗脫(0～10 min,10% A-30% A;10～20 min,30% A-70% A;20～30 min,70% A-100% A),流速1 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，表兒茶素和原花青素B2質(zhì)量濃度在0.025～0.2 mg/mL內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,兩種成分的加樣回收率分別為105.5%和99.8%;經(jīng)測(cè)定黑果腺肋花楸純化物中表兒茶素和原花青素B2含量分別為14.26 mg/g和22.45 mg/g。

黑果腺肋花楸,AB-8大孔樹(shù)脂,原花青素,高效液相色譜(HPLC),表兒茶素,原花青素B2

黑果腺肋花楸(Aorniamealnocarpa Elliot)為薔薇科(Roseeeae)腺肋花楸屬多年生落葉灌木,原產(chǎn)于美國(guó)東北部,我國(guó)對(duì)黑果腺肋花楸的相關(guān)研究起步較晚。自20世紀(jì)90年代初,遼寧省干旱地區(qū)造林研究所最先開(kāi)始了我國(guó)腺肋花楸引種栽培和果實(shí)加工利用的實(shí)驗(yàn)研究工作[1]。黑果腺肋花楸富含豐富的多酚類物質(zhì),研究表明,黑果腺肋花楸的多酚含量和抗氧化活性顯著高于藍(lán)莓、蔓越莓和越橘等漿果[2]。其中原花青素含量占總酚的41.9%～59.1%[3]?？梢?jiàn)黑果腺肋花楸酚類物質(zhì)中原花青素含量最高,對(duì)黑果腺肋花楸的生物活性起著至關(guān)重要的作用。原花青素又稱縮合單寧,按聚合度的不同可分為單倍體、低聚體和多聚體[4]。單倍體是原花青素基本的結(jié)構(gòu)單元,一般指兒茶素和表兒茶素,也有其它單倍體如表沒(méi)食子兒茶素和表阿夫兒茶精等;低聚體由2～4個(gè)單倍體縮合而成;多聚體則是由5個(gè)以上單倍體縮合而成。原花青素低聚體的生物活性研究最為活躍,其中二聚體分布最廣,研究最多,是最重要的一類原花青素[5]。

AB-8大孔樹(shù)脂具有吸附量大、解吸率高、性質(zhì)穩(wěn)定等特點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于原花青素的分離純化[6]。本文對(duì)黑果腺肋花楸原花青素在AB-8大孔樹(shù)脂上的吸附和解吸條件進(jìn)行探討,并選擇高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定純化后的黑果腺肋花楸原花青素中單倍體表兒茶素和二聚體原花青素B2含量,為黑果腺肋花楸原花青素的深度開(kāi)發(fā)和綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與儀器

黑果腺肋花楸果實(shí)，放置于-80 ℃低溫冰箱冷凍備用 黑龍江;AB-8大孔樹(shù)脂 上海阿拉丁生化科技有限公司;無(wú)水甲醇、無(wú)水乙醇、鹽酸 分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;香草醛 上海阿拉丁生化科技有限公司;表兒茶素(HPLC>98%)、原花青素B2標(biāo)品(HPLC>98%) 上海源葉生物科技有限公司;無(wú)水甲醇、乙腈 色譜純,西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司。

JYL-C010打漿機(jī) 九陽(yáng)股份有限公司;UV-6100紫外分光光度儀 上海元析儀器有限公司;KQ-100DE超聲破碎儀 數(shù)控超聲波清洗器;L3660D低速離心機(jī) 上海知信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司;FD-18冷凍干燥機(jī) 北京德天佑科技發(fā)展有限公司;LQ-A 30002電子天平 瑞安市樂(lè)祺貿(mào)易有限公司;HL-2S恒流泵 上海青浦滬西儀器廠;色譜柱Agilent Eclipse XDB-C18,4.6×250 mm Agilent Technologies,Inc.;LC-20AD高分離度快速液相色譜系統(tǒng) SHIMADZU公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 黑果腺肋花楸原花青素粗提物制備 取40 g黑果腺肋花楸勻漿(預(yù)處理的花楸鮮果于打漿機(jī)中打漿3 min),在液料比25∶1、提取時(shí)間60 min、提取溫度70 ℃、60%乙醇濃度條件下提取原花青素;將提取得到的原花青素粗提物真空濃縮,冷凍干燥得紫黑色膏狀物質(zhì),放置于-20 ℃冰箱中,待用[7]。

1.2.2 AB-8 大孔樹(shù)脂預(yù)處理 AB-8大孔樹(shù)脂用無(wú)水乙醇浸泡24 h,充分溶脹后,去離子水洗至無(wú)醇;加入5% HCl溶液浸泡12 h后,去離子水洗至中性;加入5% NaOH溶液浸泡12 h后,去離子水洗至中性;抽濾吸干樹(shù)脂表面水分,待用[8]。

1.2.3 AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 AB-8大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附與解吸實(shí)驗(yàn) 稱取0.3 g干樹(shù)脂,加入20 mL約為5.24 mg/mL的原花青素粗提液,置搖床上30 ℃、120 r/min振蕩24 h,充分吸附后過(guò)濾,用鹽酸-香草醛法[9]測(cè)濾液中原花青素含量;然后將吸至飽和的樹(shù)脂用50 mL、95%的乙醇洗脫,測(cè)定洗脫液中原花青素含量,計(jì)算吸附量和解吸率[10]。

1.2.3.2 AB-8大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)研究 步驟同1.2.3.1,但需在30 ℃搖床中以120 r/min振蕩;每30 min測(cè)定一次原花青素提取液濃度的變化。

1.2.3.3 AB-8大孔樹(shù)脂吸附等溫線測(cè)定 準(zhǔn)確稱取預(yù)處理的大孔樹(shù)脂5份,每份0.5 g,置于50 mL三角瓶中,加入不同質(zhì)量濃度的原花青素溶液,置于振蕩器上30 ℃、120 r/min振蕩12 h,待吸附平衡后測(cè)定溶液的質(zhì)量濃度,并計(jì)算吸附量,以吸附量對(duì)平衡時(shí)質(zhì)量濃度作圖,繪制吸附等溫曲線[11]。

1.2.4 AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的動(dòng)態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 上樣流速對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響 取一定量的樹(shù)脂濕法裝柱,配制4 mg/mL的原花青素粗提物溶液,分別采用2、4、6 BV/h的流速流經(jīng)AB-8樹(shù)脂柱,2 mL/管收集餾分并測(cè)定原花青素濃度,當(dāng)流出液中原花青素濃度達(dá)到上樣量的1/10時(shí),AB-8大孔樹(shù)脂達(dá)到吸附通量,停止上樣,繪制穿透曲線,以泄漏點(diǎn)最遲出現(xiàn)的吸附流速為宜。

1.2.4.2 上樣濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響 取一定量的樹(shù)脂濕法裝柱,分別配制2、3、4 mg/mL的原花青素粗提物溶液,以2 BV/h的流速流經(jīng)AB-8樹(shù)脂柱,2 mL/管收集餾分并測(cè)定原花青素濃度,當(dāng)流出液中原花青素濃度達(dá)到上樣量的1/10時(shí),AB-8大孔樹(shù)脂達(dá)到吸附通量,停止上樣,繪制穿透曲線,以泄露點(diǎn)最遲出現(xiàn)的上樣濃度為宜。

1.2.4.3 乙醇濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂解吸效果的影響 取一定量的樹(shù)脂濕法裝柱,配制4 mg/mL的原花青素粗提物溶液,以2 BV/h的流速流經(jīng)AB-8樹(shù)脂柱,達(dá)到吸附通量后,以30%,50%,70%的乙醇溶液分別進(jìn)行洗脫,2 mL/管收集餾分,以流出液體積為橫坐標(biāo),原花青素濃度為縱坐標(biāo)繪圖,選擇合適的乙醇洗脫濃度。

1.2.5 HPLC測(cè)定兒茶素、表兒茶素和原花青素B2含量

1.2.5.1 HPLC分析條件 色譜儀為SHIMADZU的LC-20AT,檢測(cè)器為PDA檢測(cè)器。Aglient Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相A:色譜級(jí)甲醇,流動(dòng)相B:去離子水;采用梯度洗脫方式,程序如下:0～10 min,10%～30% A;10～20 min,30%～70% A;20～30 min,70%～100% A。進(jìn)樣量:20 μL;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;柱溫:30 ℃;流速:1 mL/min;時(shí)間:30 min。

1.2.5.2 溶液配制 標(biāo)準(zhǔn)品溶液:準(zhǔn)確稱取表兒茶素和原花青素B2各5 mg,用25 mL甲醇溶液溶解,配制成0.2 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。再精密移取1、2、4、6、8 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇定容至8 mL,分別配制為0.025、0.05、0.1、0.15、0.2 mg/mL表兒茶素和原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)溶液。再取適量的兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液混合,得到混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。用0.45 μm微孔濾膜將所有標(biāo)準(zhǔn)品溶液過(guò)濾,進(jìn)樣分析;以濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪圖,得到線性回歸方程,結(jié)果見(jiàn)圖9。

供試品溶液:稱取0.05 g經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化的原花青素樣品,溶于20%甲醇中,用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾,待用。

2 結(jié)果與分析

2.1AB-8大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附與解吸結(jié)果

2.1.1 AB-8大孔樹(shù)脂的靜態(tài)吸附量和解吸率 由于原花青素為極性化合物,且其分子結(jié)構(gòu)中帶有酚羥基,形成氫鍵的能力較強(qiáng),因此很容易被極性樹(shù)脂和弱極性樹(shù)脂所吸附。弱極性AB-8大孔吸附樹(shù)脂,粒徑0.3～1.25 mm,比表面積480～520 m2/g,平均孔徑13.0～14.0 nm,外觀乳白色小球,孔容0.73～0.77 mL/g,對(duì)原花青素具有較好的吸附和解吸效果[12]。經(jīng)計(jì)算,AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的吸附量為225.8 mg/g,解吸率為91.597%。

2.1.2 AB-8大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)特性 由圖1可知,AB-8大孔樹(shù)脂起始吸附量較大,此后吸附量增加較慢,在8 h 后基本可以達(dá)到平衡,平衡吸附量較大。

圖1 AB-8大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線Fig.1 Statie absorptiondynamicscurves of AB-8 macroporousresin

2.1.3 AB-8大孔樹(shù)脂吸附等溫線 目前,普遍將大孔吸附樹(shù)脂的吸附作用機(jī)制歸結(jié)為L(zhǎng)angmuir或Freundich模式。Langmuir 等溫方程為單層分子吸附理論,其方程式如下:

式中，qm:飽和吸附量(mg/g);KL:Langmuir等溫方程參數(shù);qe:吸附量(mg/g);Ce:平衡濃度(mg/L)。

圖2 AB-8大孔樹(shù)脂吸附等溫線Fig.2 Adsorptionisothcrrn of AB-8 macroporous resins

以1/Ce為橫坐標(biāo),1/qe為縱坐標(biāo)進(jìn)行Langmuir 等溫方程擬合曲線,截距為1/qm,斜率為1/(qmKL),根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),即可求得qm、KL,并計(jì)算出相應(yīng)的R2[13]。

由qm=378.8;R2=0.99152;據(jù)此可以認(rèn)為,在所研究的濃度范圍內(nèi),AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)原花青素的吸附為單層吸附[14-15];理論上AB-8大孔樹(shù)脂的飽和吸附量比實(shí)際實(shí)驗(yàn)中求得的飽和吸附量數(shù)值更高;另外由吸附等溫線可以看出樹(shù)脂的吸附量隨原花青素濃度的增高而升高,所以適量增加原花青素濃度可以提高AB-8大孔樹(shù)脂的吸附量。

圖3 Langmuir等溫方程擬合曲線Fig.3 Fitting curve of Langmuir isotherm formula

2.2AB-8大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附與解吸結(jié)果

2.2.1 吸附流速對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響 由圖4可知,AB-8大孔樹(shù)脂的吸附通量隨吸附流速的增高而降低。上樣流速為2、4、6 BV/h時(shí)樹(shù)脂的吸附通量分別為180、120、100 mL。結(jié)果表明隨著吸附流速的降低,樹(shù)脂的吸附通量增大,泄漏點(diǎn)出現(xiàn)時(shí)間延長(zhǎng),能夠吸附更多的原花青素,所以選擇2 BV/h的吸附流速為宜。

圖4 上樣流速對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響Fig.4 Effect of flow rate on adsorption ofAB-8 macroporous resins

2.2.2 上樣濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響 由圖5可知,在不同的上樣濃度下,AB-8大孔樹(shù)脂達(dá)到吸附通量時(shí)進(jìn)樣量相似,均在90管(180 mL)左右達(dá)到吸附通量,但上樣濃度為4 mg/mL時(shí)樹(shù)脂的吸附量最大。所以為了充分利用AB-8大孔樹(shù)脂,選擇4 mg/mL為最佳上樣濃度。

圖5 上樣濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂吸附效果的影響Fig.5 Effect of concentration on adsorption ofAB-8 macroporous resins

2.2.3 乙醇濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂解吸效果的影響 由圖6可知,隨著乙醇濃度的增加,AB-8大孔樹(shù)脂的解吸速率逐漸加快。80 mL 30%的乙醇溶液可以將原花青素完全洗脫,但是存在拖尾現(xiàn)象;60 mL左右的50%乙醇溶液和70%乙醇溶液可以將原花青素完全洗脫,洗脫效果相似,洗脫峰集中。但是一些非黃烷三醇類雜質(zhì)也可能被70%的乙醇洗脫,所以為了得到較高純度的原花青素,選擇50%乙醇溶液作為洗脫溶劑。

圖6 乙醇濃度對(duì)AB-8大孔樹(shù)脂解吸效果的影響Fig.6 Effect of ethanol concentrationon the desorption of AB-8 macroporous resins

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,上樣溶液濃度4 mg/mL,吸附流速2 BV/h,解吸液乙醇濃度50%時(shí),AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)黑果腺肋花楸原花青素的動(dòng)態(tài)吸附和解吸能力最佳。經(jīng)AB-8大孔樹(shù)脂純化,得到黑果腺肋花楸原花青素含量為14.29%。

2.3HPLC分析

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取各標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)樣并測(cè)定峰面積值。以標(biāo)準(zhǔn)液濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果如圖7所示。表兒茶素、原花青素B2的線性回歸方程分別為:y=2×107x-173065,R2=0.9974;y=1×107x-101750,R2=0.9985。

圖7 表兒茶素和原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.7 Standard curve of epicatechin and procyanidins B2

2.3.2 精密度實(shí)驗(yàn) 取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)進(jìn)樣五次,測(cè)定表兒茶素和原花青素B2的峰面積,求出峰面積平均值,并得出RSD值,結(jié)果見(jiàn)表1。表兒茶素、原花青素B2的峰面積RSD值分別是1.08%和2.07%,表明儀器精密度較好。

2.3.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取原花青素純化物0.05 g,按照1.2.5.2方法制備供試品溶液,分別于0、3、6、9、12 h重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定表兒茶素和原花青素B2的峰面積及RSD值,測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表兒茶素、原花青素B2的峰面積均值分別是1107328.2和580784.6,峰面積RSD值分別是0.37%和1.16%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)Table 1 Precision experiment

表2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)Table 2 Stability experiment

2.3.4 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知表兒茶素和原花青素B2含量的原花青素純化物5份,分別加入一定量的表兒茶素和原花青素B2標(biāo)準(zhǔn)品,按1.2.5.2制備供試品溶液,按前述方法測(cè)定表兒茶素和原花青素B2的含量,并計(jì)算回收率,結(jié)果如表3[16-17]。

表3 加樣回收實(shí)驗(yàn)Table 3 Sample recoveries rate experiment

2.3.5 樣品含量測(cè)定 按照1.2.5.2 準(zhǔn)確配制供試品溶液,在1.5.2.1色譜條件下進(jìn)行分析,連續(xù)進(jìn)樣三次,按外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算,測(cè)得黑果腺肋花楸純化物中表兒茶素和原花青素B2含量分別為14.26 mg/g和22.45 mg/g。

圖8 混合對(duì)照品(A)與供試品溶液(B)Fig.8 HPLC chromatograms of mixed referencesubstances(A)and procyanidinssample(B)注：1. 原花青素B2(Procyanidins B2);2. 表兒茶素(Epicatechin)。

3 結(jié)論

本文首次應(yīng)用AB-8大孔樹(shù)脂純化黑果腺肋花楸原花青素,并通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定原花青素純化物中表兒茶素和原花青素B2含量,為黑果腺肋花楸原花青素的深度開(kāi)發(fā)和綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。但從原花青素純化物的高效液相色譜圖可以看出,純化物中物質(zhì)種類仍然較多,除了包含原花青素低聚體和多聚體,還可能含有花青素、酚酸等多酚類物質(zhì),有待進(jìn)一步的研究鑒定[18-19]。

[1]韓文忠,姜鎮(zhèn)榮,馬興華,等. 國(guó)內(nèi)外腺肋花楸產(chǎn)業(yè)和技術(shù)發(fā)展概況[J]. 防護(hù)林科技,2007(03):57-58.

[2]Kulling SE R H. Chokeberry(Aronia melanocarpa)-A Review on the Characteristic Components and Potential Health Effects[J].Planta Med,2008(74):1625-1634.

[3]Oszmiański J,Wojdylo A Aronia melanocarpa phenolics and their antioxidant activity[J]. European Food Research and Technology,2005,221(6):809-813.

[4]張慧文張玉. 原花青素的研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué),2015,36(05):296-304.

[5]張妍. 原花青素研究進(jìn)展[J]. 中藥藥理與臨床,2011,27(6):112-116.

[6]趙平 張?jiān)缕? AB-8大孔樹(shù)脂對(duì)葡萄籽原花青素的吸附過(guò)程[J]. 化工學(xué)報(bào),2013,64(3):980-985.

[7]朱月,李?yuàn)^梅,王艷麗,等. 黑果腺肋花楸原花青素的提取及抑菌性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2017(02):302-306.

[8]周桃英,羅登宏,李國(guó)慶,等. AB-8大孔樹(shù)脂純化荷葉總黃酮的工藝研究[J]. 中國(guó)食品添加劑,2009(5):113-119.

[9]謝偉光,張黎明. 山楂葉原花青素提取分離工藝研究[J]. 食品工業(yè)科技,2008(03):216-219.

[10]孫蕓.葡萄籽原花青素聚合度與功效關(guān)系的研究[D]. 無(wú)錫:江南大學(xué),2004.

[11]李穎暢.藍(lán)莓花色苷提取純化及生理功能研究[D]. 沈陽(yáng):沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[12]李春陽(yáng).葡萄籽中原花青素的提取純化及其結(jié)構(gòu)和功能研究[D]. 無(wú)錫:江南大學(xué),2006.

[13]婁嵩,劉永峰,白清清,等. 大孔吸附樹(shù)脂的吸附機(jī)理[J].化學(xué)進(jìn)展,2012(08):1427-1436.

[14]陶莎,黃英,康玉凡,等. 大孔吸附樹(shù)脂分離純化紅小豆多酚工藝及效果[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào),2013(23):276-285.

[15]Castro-López L D R,Gómez-Plaza E,Ortega-Regules A,et al. Role of cell wall deconstructing enzymes in the proanthocyanidin-cell wall adsorption-desorption phenomena[J].Food Chemistry,2016,196:526-532.

[16]陳曉靜,何杰，楊建云，等. RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定葡萄籽提取物中沒(méi)食子酸、兒茶素和表兒茶素的含量[J]. 藥物分析雜志,2015,4(35):723-727.

[17]譚生建,賀業(yè)謙,李勉珊,等. HPLC法測(cè)定七厘散中兒茶素和表兒茶素的含量[J]. 解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(1):72-73,76.

[18]尹艷廷. 黑果腺肋花楸在太原地區(qū)的引種栽培初探[J]. 防護(hù)林科技,2008(05):120-134.

[19]玄永浩,金英善. 黑果腺肋花楸化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2009(20):101-102.

PurificationofblackchokeberryprocyanidinsanddeterminationofepicatechinandprocyanidinsB2byHPLC

ZHUYue,ZHANGHai-ping+,HOUYa-nan,ANJian-hui,FENGXiao-ru,WENXin-ya,LITeng,SUNAi-dong*

(Key Loboratory of Forestry Food Processing Security,College ofBiological Sciences and Biotechnology,Beijing Forestry University,Beijing 100083,China)

The adsorption and desorption properties of procyanidins from black chokeberry with AB-8 macroporous resins was studied. And the HPLC method was used to determine the content of epicatechin and procyanidins B2in procyanidins purification. The results showed that,procyanidins concentration of the sample solution was 4.0 mg/mL,adsorption flow rate was 2 BV/h,the desorption concentration of ethanol was 50%. Under the proposed conditions,the purity of procyanidins content from black chokeberry was 14.29%. Chromatographic separation was performed on the Aglient Eclipse XDB-C18,4.6 mm×250 mm.The mobile phase was methanol(A)-water(B)with the gradient elution(0～10 min,10% A-30% A;10～20 min,30% A-70% A;20～30 min,70% A-100% A). The flow rate was 1.0 mL/min and the detective wavelength was set at 280 nm.The linear ranges of epicatechin and procyanidins B2concentration were 0.025～0.2 mg/mL. The sample recoveries rate of the two components were 105.5% and 99.8% respectively. The content of epicatechin and procyanidins B2in black chokeberry procyanidins purification were 14.26 mg/g and 22.45 mg/g,respectively.

black chokeberry;AB-8 macroporous resins;procyanidins;high performance liquid chromatography;epicatechin;procyanidins B2

TS207.3

A

1002-0306(2017)19-0240-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.19.044

2017-04-14 +并列第一作者

朱月(1993-),女,在讀碩士研究生,研究方向:天然產(chǎn)物與功能性食品,E-mail:zhuyue1109@ 163.com。

張海平(1992-),男，在讀碩士研究生，研究方向：天然產(chǎn)物與功能性食品，E-mail:624571440@qq.com。

*

孫愛(ài)東(1968-),女,博士，教授,研究方向:天然產(chǎn)物生理活性物質(zhì)的開(kāi)發(fā)與利用,E-mail:adsun68@ 163.com。

國(guó)家自然科學(xué)基金(31471593);國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃(2016YFD0400302-4)。