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        宮頸癌及癌前病變中血清IL-10的表達(dá)與HPV感染的相關(guān)性分析

        2017-10-17 07:47:56王興紅
        中國婦幼健康研究 2017年10期
        關(guān)鍵詞:分泌物感染率宮頸癌

        莫 翔,王興紅

        (廣西玉林市婦幼保健院,廣西 玉林 537000)

        宮頸癌及癌前病變中血清IL-10的表達(dá)與HPV感染的相關(guān)性分析

        莫 翔,王興紅

        (廣西玉林市婦幼保健院,廣西 玉林 537000)

        目的分析宮頸癌及癌前病變中血清白介素-10(IL-10)的表達(dá)與人類乳頭瘤病毒(HPV)感染的相關(guān)性。方法選取廣西玉林市婦幼保健院自2014年1月至2016年6月收集的宮頸癌及癌前病變患者110份宮頸分泌物及組織,其中25例浸潤性宮頸鱗癌,21例宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)Ⅰ,22例CINⅡ及20例CINⅢ、22例正常女性宮頸組織,采用第二代雜交捕獲法對幾組HPV感染情況,同時采用反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)(RT-PCR)法對宮頸組織中IL-10 mRNA表達(dá)進(jìn)行測量。結(jié)果宮頸癌組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,CINⅡ-Ⅲ組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組,CINⅠ組HPV感染率均明顯高于正常組織,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.67~12.32,均P<0.05)。宮頸癌組IL-10陽性表達(dá)量均明顯高于CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,CINⅡ-Ⅲ組IL-10陽性表達(dá)量均明顯高于CINⅠ組,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(t=7.25~8.11,均P<0.05);宮頸癌組IL-10陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為10.55、7.12,均P<0.05),CINⅡ-Ⅲ組IL-10陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.20,P<0.05),IL-10的表達(dá)水平在CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ及宮頸癌組織中呈明顯的上升趨勢。進(jìn)一步分析血清IL-10的表達(dá)與HPV表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果提示IL-10的表達(dá)與HPV感染呈正相關(guān)(r=0.702,P=0.001)。宮頸組織IL-10表達(dá)不僅和HPV感染密切相關(guān),而且與宮頸病變的嚴(yán)重程度也相關(guān)。結(jié)論宮頸癌前病變的發(fā)生發(fā)展與IL-10相關(guān),IL-10的表達(dá)與HPV和子宮頸癌疾病階段存在明顯的相關(guān)性。

        宮頸癌;癌前病變;白細(xì)胞介素-10;人乳頭瘤病毒

        人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宮頸疾病發(fā)生發(fā)展的重要危險因素之一,其作用機制為HPV與宿主DNA相結(jié)合對基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用,從而導(dǎo)致宿主細(xì)胞發(fā)生惡性增殖,導(dǎo)致疾病由宮頸炎開始,經(jīng)過宮頸糜爛、不典型增生,最終發(fā)展成為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)直至宮頸癌[1]。有研究表明,在宮頸癌及癌前病變發(fā)展過程中,伴隨著不同程度的機體免疫功能方面的改變,同時也存在細(xì)胞凋亡調(diào)控過程的改變,多認(rèn)為與HPV持續(xù)感染有著不可分割的關(guān)系,其中血清白介素-10(interleukin-10,IL-10)引起了臨床工作者的廣泛重視[2]。本研究針對宮頸疾病病灶中IL-10的表達(dá)與HPV感染情況的相關(guān)性展開分析,進(jìn)一步探討二者之間的關(guān)系,結(jié)果報告如下。

        1資料與方法

        1.1一般資料

        選取廣西玉林市婦幼保健院自2014年1月至2016年6月收集的宮頸癌及癌前病變患者110份宮頸分泌物及組織,均排除急性感染、肝腎功能損傷、心腦血管疾病等者,排除非原發(fā)初診,排除合并其他部位惡性腫瘤患者,其中25例浸潤性宮頸鱗癌,21例CINⅠ,22例CINⅡ及20例CINⅢ(合并為CINⅡ-Ⅲ組共42例),22例正常宮頸組織,故分為宮頸癌組、CINⅠ組、CINⅡ-Ⅲ組(CINⅡ和CINⅢ合并)、正常組織組。宮頸癌組年齡35~72歲,平均年齡(54.23±4.45)歲;CINⅠ組年齡33~71歲,平均年齡(52.45±4.34)歲;CINⅡ-Ⅲ組年齡33~70歲,平均年齡(52.78±4.23)歲;正常組織組年齡35~72歲,平均年齡(56.23±4.67)歲。幾組一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,具有可比性。全部研究對象均簽署了關(guān)于本次試驗的知情權(quán)同意書。

        1.2方法

        1.2.1第二代雜交捕獲法檢測HPV-DNA

        采用第二代雜交捕獲法檢測HPV-DNA,高危型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68,操作方法為:在收集到的幾組宮頸分泌物及組織樣本中加入裂解體,將樣本DNA雙鏈分解為單鏈,使用RNA探針將其與DNA單鏈相結(jié)合,形成RNA-DNA雜交體。采用特異性抗體將RNA-DNA雜交體固定在微孔壁上,將該雜交體與具有堿性磷酸酶的第二抗體相結(jié)合,放大信號[3]。在堿性磷酸酶的促進(jìn)下可見酶底物發(fā)光,期間對光的強弱進(jìn)行判斷,利用光的強弱對RNA-DNA雜合體的含量進(jìn)行判斷,從而判斷是否存在HPV感染。若可見DNA負(fù)荷量≥1.0ng/L[相對發(fā)光度單位(relative light unit,RLU)/陽性定標(biāo)的閾值(cut off,CO)≥1.0]即為陽性,反之為陰性[4]。

        1.2.2反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)法檢測宮頸分泌物及組織中IL-10mRNA

        將宮頸分泌物及組織中的RNA提取后,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行PCR反應(yīng),IL-10基因產(chǎn)物的長度為351bp,PCR反應(yīng)條件:94℃條件下,預(yù)變性5min,后進(jìn)行40次循環(huán)(循環(huán)條件為94℃/30s,60℃/30s,72℃/30s),后在72℃的條件下延伸10min,采用2%瓊脂糖對擴增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳。IL-10的相對表達(dá)量采用actin的PCR產(chǎn)物含量比值表示[5]。

        1.3統(tǒng)計學(xué)方法

        2結(jié)果

        2.1宮頸分泌物及組織中高危HPV-DNA感染情況

        宮頸癌組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組(χ2值分別為12.32、9.55、7.24,均P<0.05),CINⅡ-Ⅲ組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組(χ2值分別為10.21、8.23,均P<0.05),CINⅠ組HPV感染率均明顯高于正常組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.67,P<0.05),見表1。

        表1 各組宮頸組織中高危HPV-DNA感染情況對比[n(%)]

        注:a與正常組織組比較,P<0.05;b與CINⅠ組比較,P<0.05;c與宮頸癌組,P<0.05

        2.2宮頸分泌物及組織中IL-10的表達(dá)情況

        宮頸癌組IL-10陽性表達(dá)量均明顯高于CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(t值分別為7.25、6.78,均P<0.05),CINⅡ-Ⅲ組IL-10陽性表達(dá)量均明顯高于CINⅠ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=8.11,P<0.05);宮頸癌組IL-10陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2值分別為10.55、7.12,均P<0.05),CINⅡ-Ⅲ組IL-10陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.20,P<0.05),見表2。

        表2 各組宮頸分泌物及組織中IL-10的表達(dá)

        注:a與宮頸癌組比較,P<0.05;b與CINⅠ組比較,P<0.05

        2.3宮頸癌及癌前病變中血清IL-10與HPV表達(dá)相關(guān)性

        進(jìn)一步分析血清IL-10的表達(dá)與HPV表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果提示IL-10的表達(dá)與HPV感染呈正相關(guān)(r=0.702,P=0.001)。宮頸組織IL-10表達(dá)不僅和HPV感染密切相關(guān),而且與宮頸病變的嚴(yán)重程度也相關(guān)。

        3討論

        3.1 HPV與IL-10在宮頸癌及癌前病變中的水平變化機制

        HPV作為一類可特異性感染人皮膚及黏膜的雙鏈閉合環(huán)狀DNA病毒,當(dāng)其感染宿主后可與宿主基因相結(jié)合組成DNA整合導(dǎo)致宿主的基因表達(dá)發(fā)生改變,促進(jìn)原癌基因的激活,使得抑癌基因發(fā)生突變,從而引起免疫功能的失調(diào)[6-7]。近年來,隨著研究的不斷深入有研究發(fā)現(xiàn),機體的免疫因素在宮頸癌發(fā)展中具有重要的作用,免疫功能的失調(diào)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后可能存在密切的關(guān)系[8]。IL-10屬于一類Th2基因型細(xì)胞因子,具有較多的生物學(xué)特性,大量資料顯示,IL-10在自身免疫疾病、抗感染及腫瘤免疫的治療過程中具有重要意義[9-10]。在IL-10的調(diào)節(jié)作用下,效應(yīng)B細(xì)胞可直接作用于Fas/Fasl信號通路中,從而發(fā)揮突出的抗腫瘤效應(yīng)。另外IL-10還借助活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等其他信號通路,對內(nèi)皮祖細(xì)胞的功能產(chǎn)生促進(jìn)作用,較為常見的功能包括細(xì)胞的遷移及黏附等[11]。有研究發(fā)現(xiàn),在宮頸惡性病變中IL-10的含量呈現(xiàn)較高的表達(dá)水平,且宮頸鱗狀上皮內(nèi)損傷的嚴(yán)重程度與IL-10的高表達(dá)有密切的關(guān)系,而高水平的免疫調(diào)節(jié)因子僅局限在鱗-柱狀上皮的交接區(qū)域內(nèi)[12]。另外,已經(jīng)感染了HPV婦女的外周血中,血清IL-10的含量也明顯高于未感染的婦女,證實了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與IL-10的分泌量相關(guān)。

        3.2宮頸癌及癌前病變中血清IL-10的表達(dá)與HPV感染的相關(guān)性

        本研究結(jié)果顯示,宮頸癌組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,CINⅡ-Ⅲ組HPV感染率均明顯高于正常組織組、CINⅠ組,CINⅠ組HPV感染率均明顯高于正常組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。可見隨著病變嚴(yán)重程度的發(fā)展,HPV感染率有增加趨勢。宮頸癌組IL-10陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組及CINⅡ-Ⅲ組,CINⅡ-Ⅲ組陽性表達(dá)率均明顯高于CINⅠ組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。可見正常宮頸組織中無IL-10表達(dá),隨著宮頸病變嚴(yán)重程度的增加,表達(dá)比例呈上升趨勢。進(jìn)一步分析血清IL-10的表達(dá)與HPV表達(dá)的相關(guān)性,結(jié)果提示IL-10的表達(dá)與HPV感染呈正相關(guān)。說明宮頸組織IL-10表達(dá)不僅和HPV感染密切相關(guān),而且與宮頸病變的嚴(yán)重程度也相關(guān)。在不同的子宮頸癌階段,IL-10表達(dá)呈明顯的上升趨勢。

        綜上所述,宮頸癌前病變的發(fā)生發(fā)展與IL-10對宮頸局部產(chǎn)生的抑制反應(yīng)相關(guān),IL-10的表達(dá)與HPV和子宮頸癌疾病階段存在明顯的相關(guān)性。由于本次研究樣本量有限,可通過進(jìn)一步擴大樣本量深入研究以得出精確的結(jié)論。

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        [專業(yè)責(zé)任編輯:安瑞芳]

        CorrelationbetweenserumIL-10expressionandHPVinfectionincervicalcancerandprecancerouslesions

        MO Xiang, WANG Xing-hong

        (YulinMaternalandChildHealthCareHospitalofGuangxi,GuangxiYulin537000,China)

        ObjectiveTo analyze the correlation between serum interleukin-10 (IL-10) expression and human papilloma virus (HPV) infection in cervical cancer and precancerous lesion.MethodsCervical secretions and tissues from 110 patients suspected with cervical cancer and precancerous lesion in Yulin Maternal and Child Health Care Hospital from January 2014 to June 2016 were selected. Among them, 25 cases were diganosed with invasive cervical squamous carcinoma, 21 cases with cervical intraepithelial neoplasia (CIN) Ⅰ, 22 cases wtih CIN Ⅱ and 20 cases with CIN Ⅲ, and 22 cases with normal cervical tissues. HPV infection was detected by hybrid capture II in all groups, and IL-10mRNA expression in cervical tissues was measured by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR).ResultsHPV infection rate in cervical cancer group was significantly higher than that in normal tissue group, CIN Ⅰgroup, CIN Ⅱ-Ⅲ group. HPV infection rate in CIN Ⅱ-Ⅲ group was significantly higher than that in normal tissue group and CIN Ⅰ group, and that in CIN Ⅰ group was significantly higher than in normal tissue group. All above differences had statistical significance (χ2value ranged 5.67-12.32, allP<0.05). IL-10 positive expression in cervical cancer group was significantly higher than that in CIN Ⅰ, CIN Ⅱ-Ⅲ groups, and that in CIN Ⅱ-Ⅲ group was significantly higher than that in CIN Ⅰ group. The differences were statistically significant (χ2value ranged 7.25-8.11, allP<0.05). IL-10 positive expression rate in cervical cancer group was significantly higher than that in CIN Ⅰand CIN Ⅱ-Ⅲ groups with statistically significant differences (χ2value was 10.55 and 7.12, respectively, bothP<0.05). IL-10 positive expression rate in CIN Ⅱ and CIN Ⅲ groups was significantly higher than that in CIN Ⅰ group with significant difference (χ2=8.20,P<0.05). IL-10 expression showed an obvious rising trend in CIN Ⅰand CIN Ⅱ- Ⅲ and cervical cancer tissues. Further analysis revealed that IL-10 expression was positively correlated with HPV infection (r=0.702,P=0.001). IL-10 expression in cervical tissues was not only closely related with HPV infection, but with severity of cervical lesions.ConclusionOccurrence and development of cervical precancerous lesion is related with IL-10, and expression of IL-10 is obviously related with HPV and cervical cancer stage.

        cervical cancer; precancerous lesions; interleukin-10 (IL-10); human papilloma virus (HPV)

        R737.33

        A

        1673-5293(2017)10-1265-03

        2017-01-17

        莫 翔(1979—),女,瑤族,主治醫(yī)師,主要從事婦科臨床工作。

        王興紅,副主任醫(yī)師。

        10.3969/j.issn.1673-5293.2017.10.034

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